肝细胞生长因子信号途径激活促进疟原虫子孢子感染

目的研究肝细胞生长因子及其信号通路激活与疟原虫肝细胞感染的关系。方法采用ELISA和Western blot来检测肝细胞生长因子。用FITC标记的葡聚糖吸收测定法检测肝细胞损伤,通过免疫荧光法观察肝细胞生长因子的表达与损伤的肝细胞的关系。同时,采用免疫共沉淀的方法检测肝细胞生长因子及其受体信号通路的激活以及磷酸化。结果疟原虫子孢子感染肝细胞后造成了肝细胞损伤,同时诱导了肝细胞生长因子的合成、表达和释放,肝细胞生长因子促使疟原虫子孢子感染肝细胞,肝细胞生长因子及其受体信号通路的激活是疟原虫子孢子感染肝细胞的必要前提。结论肝细胞生长因子及其受体可能是疟疾治疗的潜在靶点。     

小鼠VCAM-1真核表达质粒的构建及表达

目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达.方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1( )真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质.结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,Western Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白.结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础.     

FGF受体信号转导及其临床应用研究进展

成纤维细胞生长因子受体（FGFRs）是一类穿膜的酪氨酸激酶受体,均为单链的糖蛋白分子。由细胞外区、跨膜区和细胞内区组成。成纤维细胞生长因子（FGFs）的生物活性是通过与FGFRs结合来启动细胞内信号转导。受体的活化导致受体酪氦酸自磷酸化作用的产生。FGFs／FGFRs在不同组织中。通过复杂的信号传递路径对细胞的增殖、分化和移行进行调节。由于它们具有广泛的生物学功能,因此在临床应用上具有重要作用。     

以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的 观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用.方法 采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果.结果 等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大.动物实验中ADM 0.4 mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05).结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物.     

108例支气管哮喘患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及相关性分析

目的探讨支气管哮喘(哮喘)患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及其相关关系。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测52例急性哮喘患者(急性组)、56例慢性哮喘患者(慢性组)和来自同期海南医学院附属医院健康体检中心的60名健康对照者(对照组)的MMP-9和TIMP-1血清水平,并对结果进行相关分析。结果急性组、慢性组与对照组比较,MMP-9和TIMP-1血清水平明显增高(P<0.05)。MMP-9与TIMP-1血清水平存在明显的相关关系(r=0.632,P<0.05)。结论 MMP-9与TIMP-1关系密切,并且参与了气道重塑的过程,其血清水平对哮喘的病情评估具有指导意义。     

弓形虫MIC8基因对弓形虫病的免疫保护性研究

目的观察弓形虫MIC8基因对弓形虫病免疫保护性的效果。方法用PCR方法扩增弓形虫MIC8基因,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-MIC8;MIC8-EGFP转染293T细胞,荧光显微镜观察表达情况;然后分别用质粒pEGFP-MIC8、pEGFP-N1空载体及生理盐水肌肉注射免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,末次免疫3周后用弓形虫RH株速殖子感染免疫小鼠。结果 PCR扩增弓形虫MIC基因序列正确,构建的重组表达载体pEGFP-MIC8鉴定正确,荧光显微镜下观察到重组质粒能够在293T细胞中表达。弓形虫攻击感染后,质粒pEGFP-MIC8免疫小鼠与对照组相比,小鼠的存活时间有一定的延长。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-MIC8对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。     

阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的作用。方法将原代培养的sD大鼠颅骨成骨细胞分为空白组、阿仑膦酸钠组和雌激素组。施加应力后阿仑膦酸钠组和雌激素组分别用相应药物的含药血清培养,空白组给予常规血清培养。培养1,24h后采用激光共聚焦显微镜检测细胞的形态学变化及荧光强度变化。结果应力施加后培养1h,各组细胞的荧光强度差异无统计学意义（P〉0．05）;各组细胞的形态变得不规则,细胞骨架松散,有少许细胞死亡脱落。培养24h,阿仑膦酸钠组的荧光强度[（103．7±5．1）]明显高于雌激素组[（94．2±8．4）]和空白组[（78．7±2．4）],差异均有统计学意义（均P〈0．05）。阿仑膦酸钠组的细胞形态趋于规则,边缘清晰,细胞骨架趋于整齐。结论阿仑膦酸钠和雌激素能修复机械应力对大鼠成骨细胞的损伤,以阿仑膦酸钠作用更为明显。     

弓形虫ROP5基因与基因佐剂IL-12对小鼠免疫保护性

目的 观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法 大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100 μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体IgG、IgG亚型的表达水平及细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,MTT法测定淋巴细胞转化率,观察小鼠受攻击感染弓形虫后的存活时间。结果 质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫小鼠3次后,与pcROP5质粒单独免疫组和对照组相比,IL-12基因佐剂的共免疫提高了免疫鼠血清中特异性抗体IgG及IgG亚型IgG2a的表达水平,提高了细胞因子IFN-γ的含量,增加了淋巴细胞的转化率,但IgG1和IL-4的表达水平变化不大;攻击感染后,质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫组小鼠存活时间显著延长。结论 弓形虫ROP5基因与基因佐剂pcmIL-12共免疫能增强对小鼠的免疫保护性。     

MMP-9血清水平及其基因-1562C/T多态性与儿童哮喘关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 血清水平及其基因-1562C/T多态性与儿童哮喘的相关关系.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(SELISA)测定65例哮喘儿童(病例组)和68名健康对照儿童(对照组)血清MMP-9水平,并采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测MMP-9基因...