生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫定量检测的质量控制

[目的]对定量检测生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的方法进行质量控制,分析其关键控制点,评估方法的可用性.[方法]测定"滤囊过滤→免疫磁分离→荧光染色法"实验各阶段的加标回收率和不同类型水样的加标总回收率,应用危害因素分析及关键控制点HACCP分析实验过程中影响定量检测的关键因素.[结果]实验各阶段"富集浓缩→免疫磁分离→染色计数"的平均加标回收率为:贾第鞭毛虫50%→80%→97%:隐孢子虫52%→88%→95%.不同类型水样平均加标回收率为:蒸馏水加标贾第鞭毛虫39%,隐孢子虫43%;水源水加标贾第鞭毛虫38%,隐孢子虫42%;管网水加标贾第鞭毛虫50%,隐孢子虫50%.方法总计贾第鞭毛虫加标回收率为42%,隐孢子虫加标回收率为45%.[结论]滤囊过滤/免疫磁分离/荧光染色法定量检测水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫,在采取质量控制措施以避免实验各环节的危险源后,其回收率满足美国EPA1623和我国GB/T5750方法的要求,可用于各类水样的检测.     

人类线粒体转移方法初报

将人肝脏匀浆、差速离心、等密度梯度离心纯化得到线粒体,通过显微注射法将其转移到小鼠的受精卵细胞质内,有61 % 的卵注射后存活,而存活的卵中53 % 能顺利完成第一次卵裂。提示将人类线粒体向实验动物小鼠转移具有可行性     

老年糖尿病的临床观察及护理对策

通过对老年糖尿病患者进行健康教育，帮助患者了解糖尿病相关知识，建立健康行为，提高患者自我保健意识，预防并发症，提高生活质量。     

99Tcm-annexinV在肺癌化疗评估中的应用

目的制备放射性药物99Tcm-annexinV,评估其在早期预测肺癌化疗效果中的作用。方法通过毕赤酵母重组表达、硫酸铵沉淀和分子筛层析纯化得到annexinV,采用氯化亚锡还原法在annexinV的氨基端标记放射性核素99Tcm,经脱盐柱纯化获得标记产物。采用薄层层析测定99Tcm-annexinV的标记率和放射性化学纯度,外露磷脂酰丝氨酸的红细胞测定99Tcm-annexinV的生物活性。通过在615小鼠腋部皮下接种LA795细胞和组织插块法获得荷肺癌小鼠模型,经腹腔注射环磷酰胺治疗肺癌后6、12、24和48h测定99Tcm-annexinV在小鼠体内的分布情况。结果毕赤酵母工程菌株分泌表达annexinV,经硫酸铵分级沉淀和分子筛层析纯化后annexinV得以有效回收。室温下30min完成anne-xinV的99Tcm标记,标记率为50.2%。99Tcm-annexinV放射性化学纯度为93.9%,其生物活性保存良好。生物分布实验表明,99Tcm-annexinV通过肾脏排泄。615荷肺癌小鼠模型经过环磷酰胺化疗后48h,99Tcm-annexinV在肿瘤组织的摄取达到最高,肿瘤/肌肉放射性摄取率之比为6.34,肿瘤/血液放射性摄取率之比为4.09。结论制备了毕赤酵母来源的99Tcm-annexinV,有可能应用于早期预测肺癌化疗效果。     

金黄色葡萄球菌与奇异变形杆菌混合感染引起的食源性疾病

金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在，在空气、水、尘埃以及人和动物的排泄物中都可找到。金黄色葡萄球菌肠毒素是世界性的卫生问题。在美国由葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33％，位居第三。文章就2003年夏季我市一起由葡萄球菌肠毒素引起的家庭散发中毒事件进行了回顾性分析。     

自发NIDDM中国地鼠繁殖发育生物学特性观察研究

研究培育自发ＮＩＤＤＭ中国地鼠实验动物模型观察其繁殖发育生物学特性结果表明，自发ＮＩＤＤＭ中国地鼠，３世代，３２胎次，１２１只平均出生体重为１．６０±０．１０ｇ，离乳体重为１４．９２±１．１７ｇ，平均产仔数为３．７８±１．２１，离乳活仔数为３．４７±１．１１，成活率为９１．７４％。仔鼠发育正常分别在３０和８０日龄出现二次增重高峰，提示自发ＮＩＤＤＭ的发病对本模型动物繁殖发育无严重影响作用。     

膜联蛋白Ⅴ的异硫氰酸荧光素标记和应用研究

目的制备一种新型的膜联蛋白Ⅴ,用异硫氰酸荧光素进行标记,观察它对外露磷脂酰丝氨酸（PS）红细胞的荧光染色情况。方法带有金属螯合位点的膜联蛋白Ⅴ通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得,膜联蛋白Ⅴ粗品通过离子交换和硫酸铵沉淀得到纯化产物。在硼酸盐缓冲液完成膜联蛋白Ⅴ的异硫氰酸荧光素标记,标记产物经过离子交换进行纯化。红细胞经过戊二醛处理后PS外露于细胞表面。在荧光显微镜下观察异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ⅴ对外露PS红细胞的结合。结果毕赤酵母重组表达的新型膜联蛋白Ⅴ经过离子交换和硫酸铵沉淀后得以纯化和浓缩。经过异硫氰酸荧光素进行标记后观察到它对外露PS红细胞的结合。结论毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白Ⅴ具有结合外露PS红细胞的能力,可以应用于细胞凋亡的体外检测。     

AAV介导AB单链抗体改善阿尔茨海默病模型小鼠行为受损

Intracranial delivery of human Fc-deleted antibody specific to amyloid-βpeptide(Aβ,anti-Aβ single-chain Fv,scFv)via adeno-associated virus(AAV)inhibits amyloid deposition in transgenic mice.However,the effects of AAV-mediated Fc-deleted antibody on animal behavior remain unclear.In this study,the anti-AβscFv antibody gene,isolated from phage display,was fused to the 5’end of the scFv antibody gene for antibody secretion by 2 rounds of polymerase chain reaction amplification.The fused antibody cDNA was cloned into a pSNAV2 plasmid under the control of the cytomegalovirus promoter.The sequence verified expression vector pSNAV2/scFv was transferred to BHK-21 cells,and stable transfected BHK-21/scFv cells were established by G418 selection and infected with the recombinant herpes simplex virus rHSV/repcap for AAV production.Recombinant AAV was injected into the left quadriceps femoris of PDAPP transgenic mice.After 3 months,Morris water-maze results confirmed significantly improved cognitive function in a mouse model of Alzheimer’s disease.     

抗β淀粉样肽40人单克隆抗体在昆虫细胞分泌表达

目的通过杆状病毒昆虫细胞系统重组表达抗β淀粉样肽40人单克隆抗体,为全人抗体治疗阿尔茨海默病创造条件。方法将抗β淀粉样肽40人单链抗体重链可变区和轻链可变区分别克隆插入pAC-L-CH3的多克隆位点,构建成pAC-VH-VL表达质粒。将表达质粒和BaculoGold共转染SF9细胞后,用免疫荧光方法进行人IgG表达的检测。将感染重组杆状病毒的昆虫细胞培养液上清过蛋白A-琼脂糖亲和层析柱,洗脱纯化出的抗体经过SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白质。结果杆状病毒昆虫细胞系统抗β淀粉样肽40人单克隆抗体表达质粒pAC-VH-VL构建成功。将表达质粒和辅助病毒感染昆虫细胞后可见昆虫细胞表达人抗体。经过蛋白A-琼脂糖亲和层析,从昆虫细胞培养基中纯化出抗β淀粉样肽40人单克隆抗体。结论通过基因工程手段在人抗Aβ40抗体可变区羧基端连接人抗体恒定区片段,通过杆状病毒昆虫系统分泌表达并纯化获得完整的人抗Aβ40单克隆抗体。