2种CCK-8试剂最佳实验条件比较

正在细胞学实验中,MTT(噻唑蓝)比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点,而被广泛使用,但其操作较繁琐,需加入二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臜颗粒,且往往因溶解不全而对实验结果造成影响,为克服MTT法的不足,近年来出现了另外一些检测试剂,如XTT试剂[1]、MTS试剂[2],国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8(cell counting kit-8)[3],其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性,不需要裂解细胞,可直接进行比色。     

FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病的临床观察

目的探讨氟达拉滨联合中剂量阿糖胞苷即FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病（acute myeloidleukemia,AML）的临床疗效及副作用。方法观察组28例AML患者采用FA方案进行巩固强化治疗,氟达拉滨30 mg/m2（1～3 d）,静脉滴注,阿糖胞苷2 g/m2,（1～3 d）,静脉滴注,阿糖胞苷在氟达拉滨结束后4 h应用。同期对照组10例AML患者采用大剂量阿糖胞苷进行巩固强化治疗,即Ara-C 3 g/m2,q12 h×3 d。结果 FA组28例AML患者CR时间为109～1 735 d,14例患者持续完全缓解（continuous complete remission,CCR）2年以上,（3年）生存率为21.4%,1 300 d（〉3年）的生存率为14.3%,与大剂量阿糖胞苷组没有统计学差异。7例患者于CCR后3～47个月复发,复发患者均存在各种不良预后因素,至少处于中高危分级。不良反应主要为骨髓抑制和继发感染,但总体而言骨髓抑制时间较短,非血液毒性较轻,住院时间在3周左右。结论氟达拉滨能提升胞内Ara-CTP浓度,增强抗白血病作用。FA方案多疗程巩固治疗低中危AML,能减少AML复发,提高总体生存率和无病生存率,临床疗效肯定,不良反应较少,值得进一步深入研究。     

地西他滨联合CAG方案治疗老年急性髓系白血病疗效观察

目的比较地西他滨联合CAG方案与标准IA方案治疗老年急性髓系白血病患者的临床疗效及安全性。方法 回顾性分析20例接受地西他滨联合CAG方案、23例接受IA方案治疗的初发老年AML患者的临床资料,分别比较两组患者的总反应率(ORR)、总生存率(OS)及不良反应发生率。结果 43例患者的ORR为58.14%,地西他滨联合CAG组及IA组的ORR分别为65%、52.2%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。截至2015年8月31日,16例存活,25例死亡,2例失访,中位随访时间10(1～34)个月,2年OS率为11.63%,两组1年OS率分别为50%、39.13%,差异无统计学意义(P>0.05)。39例患者出现感染,25例有出血,两组患者在感染发生率、出血发生率差异无统计学意义。两组的红细胞输注量分别为5.35U、8.30U,单采血小板输注量分别为1.85U、3.48U,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 地西他滨联合CAG方案和IA方案治疗老年AML患者均有较好的疗效,地西他滨联合CAG方案CR率及OR率相对较高。两组治疗副反应相当,但地西他滨联合CAG组骨髓造血恢复较快。     

六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2及肠道P-gp活性的影响

目的:考察六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2及肠道P-gp活性的影响。方法:两组(各5只)大鼠分别灌胃给予六味地黄丸生理盐水7 d后,静脉给予咖啡因,用HPLC法测定咖啡因的血药浓度,获得药-时曲线,计算药动学参数,以咖啡因t1/2的变化来评价六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2活性的影响;采用在体肠循环法,通过分析P-gp底物地高辛肠吸收参数的变化来考察六味地黄丸对P-gp活性的影响。结果:生理盐水组、六味地黄丸组大鼠体内探针药物咖啡因的t1/2分别为(2.61±0.98)h、(5.14±0.21)h;地高辛在给药组和对照组肠吸收百分率分别为(6.54±0.71)%、(5.42±0.23)%,吸收速率常数分别为(0.030±0.005 7)h-1、(0.024±0.003 9)h-1。结论:六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2活性具有一定抑制作用,对肠道P-gp活性具有较弱的诱导作用。     

转型期基层医院生存与发展研究（四） 基层医院专科发展现状分析

加强专科建设,构建优势专科群,是建设现代化医院的核心。然而,基层医院受人才、硬件和市场等条件的限制,专科发展举步维艰。本研究通过对113家基层医院的专科发展现状调查,对基层医院的专科发展水平进行分析,并讨论了基层医院未来专科发展的走向。     

23G和20G玻璃体切除联合超乳术治疗特发性黄斑前膜合并白内障的疗效比较

目的:对比研究23 G和20 G玻璃体切除手术(pars plana vitrectomy,PPV)联合内界膜剥除、白内障超声乳化人工晶状体植入术治疗合并白内障的特发性黄斑前膜(idiopathic macular epiretinal membrane,IMEM)的临床疗效.方法:采用非随机对照回顾性研究.对合并白内障的IMEM患者45例45眼,分别实施23 G和20 G PPV联合内界膜剥除、白内障超声乳化合并人工晶状体植入术,术后随访90 d.对比术中玻璃体切除时间、剥膜时间、平均超声能量(average ultrasound energy,AVE)和有效超声乳化时间(effective phacoemulsification time,EPT),术前与术后1、7 d的眼压,术前与术后30、90 d最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)和黄斑中心凹视网膜厚度,术后90 d角膜内皮细胞计数.结果:23G组玻璃体切除时间为12.57±1.35min,20G组玻璃体切除时间为17.30±1.19min,两者比较差异有显著统计学意义(t=-12.488,P<0.01).两组剥膜时间比较差异无统计学意义(t=-0.68,P=0.500).术后1d,23G组的眼压略低于20 G组,差异有显著统计学意义(t=-2.345,P=0.024).术后两组患者的BCVA和黄斑中心凹视网膜厚度均较术前明显改善.两组患者的眼压、BCVA和黄斑中心凹视网膜厚度组间差异均无统计学意义(F=0.465、1.895、0.689,P=0.499、0.176、0.411).两组患者的眼压、BCVA和黄斑中心凹视网膜厚度不同时间点差异均有统计学意义(F=291.245、103.06、665.402,P<0.01).23G和20G不同手术方式与不同时间点的眼压有交互作用(F=13.245,P<0.01),而不同手术方式与不同时间点的BCVA和黄斑视网膜厚度无交互作用(F=1.212、2.293,P=0.283、0.129).两组的平均超声能量和有效超声时间差异无统计学意义(t=-1.186、-0.737,P=0.242、0.465).术后90d,23G组患者的角膜内皮细胞计数略高于20G组,差异有统计学意义(t=2.049,P=0.048).结论:23 G PPV联合白内障超声乳化人工晶状体植入术治疗合并白内障的IMEM效果确切.和20 G相比,23 G PPV手术时间短,对角膜内皮细胞损伤小,但存在术中隐性切口漏造成术后一过性低眼压的可能.     

重组人促红细胞生成素对急性高眼压兔眼视网膜缺氧诱导因子1α表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对急性高眼压兔跟视网膜缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨国产rhEPO保护视网膜神经功能的机制.方法 在设立正常对照、模犁对照的情况下,日本大耳白兔皮下注射国产rhEPO,分别于缺血再灌注(生理盐水前房灌注法造成急性高眼压)后第1、3、7、14天免疫组化法观察视网膜HIF-1α基因表达.结果 正常兔眼视网膜无HIF-1α表达.模型组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数较正常对照组明显增加(P<0.01),EPO组兔眼视网膜HIF-1α表达阳性细胞数变化与模型组相似,但较模型组显著减少(P<0.01).结论 国产rhEPO能够下调视网膜HIF-1α的表达.下调视网膜HIF-1α的表达可能是rhEPO对视网膜缺血冉灌注损伤的保护机制之一.     

rAAV介导hBDNF基因转染对急性高眼压兔眼视网膜BDNF表达的影响

目的 通过观察视网膜内源性脑源性神经营养因:F(BDNF)表达的变化,探讨玻璃体注射携带人脑源性神经营养因子(hBDNF)的重组腺伴随病毒(rAAV-BDNF)对急性高眼压兔眼神经损害的保护机制.方法 24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为模型组,共24眼),用生理盐水前房灌注法造成急性高眼压模型,对侧眼不作任何处理作为正常对照组(24眼).另24只健康日本大耳白兔任选一眼作为造模眼(为BDNF组,共24眼),BDNF组在造模前3d玻璃体内注射10μl rAAV-BDNF.于造模后第1、3、7、14d三组各摘除6只观察眼做病理切片,进行免疫组化染色,观察视网膜内源性BDNF表达.结果 模型组兔眼视网膜内源性BDNF表达阳性细胞数减少,BDNF组兔眼视网膜内源性BDNF表达阳性细胞数较对照组及模型组增加(P<0.05,P<0.01).结论 rAAV-BDNF基因转染通过增加视网膜内源性BDNF的表达起到神经保护作用.玻璃体注射是rAAV-BDNF转染视网膜的有效途径.

Abstract：

Objective To observe the changes in the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) gene in the retina of rabbits with acute high intraocular pressure (IOP) after injection of recombinant adeno-associated virus (rAAV) vector containing human BDNF gene (rAAV-hBDNF), and investigate the neuroprotective mechanism of rAAV-hBDNF. Methods The unilateral eyes of 24 white rabbits were randomly chosen as the model group with high IOP induced by saline perfusion into the anterior chamber, and the contralateral eyes served as the control group without treatment. In another 24 white rabbits, 10 μl rAAV-BDNF was injected into the vitreous body of one of the eyes 3 days before induction of high IOP. On days 1,3,7, and 14 after perfusion, the bilateral eyes of 6 rabbits were excised for immunohistochemistry for the expression of endogenous BDNF gene in the retina. Results The number of BDNF-positive cells in the retina decreased after induction of high IOP, and injection of rAAV-hBDNF resulted in a significant increase in BDNF-positive cells as compared with the positive cell number in the high IOP model and control groups (P<0.05, P<0.01). Conclusion rAAV-mediated BDNF gene transfection can increase endogenous BDNF expression in the retina of rabbits with acute high IOP. Intravitreous injection is an effective pathway for rAAV-hBDNF gene transfection into the retina.     

冬凌草甲素抑制兔小梁切除术后培养的结膜成纤维细胞增殖的初步研究

目的观察冬凌草甲素（Ori）对小梁切除术后培养的免结膜成纤维细胞（RCF）增殖的影响。设计实验研究。研究对象体外培养的小梁切除术后结膜滤过区来源RCF。方法制作兔眼小梁切除术模型,术后7天取兔滤过区结膜下组织进行成纤维细胞体外培养。分别用浓度依次为5、10、20、30、40、50μmol·L^-1。的Ori干预48小时。采用MTT法检测不同浓度药物对成纤维细胞生长的影响。主要指标成纤维细胞的光密度（OD）值和生长抑制率。结果加入Ori培养48小时后,5、10、20、30、40、50μmol·L^-1不同浓度组成纤维细胞的OD值分别为（0．402±0．013）、（0．347±0．011）、（0．293±0．015）、（0．236±0．022）、（0．184±0．023）和（O．125±0．014）,与无药对照组OD值（0．453±0．015）比较差异均有统计学意义（P=0．021～0．000）,并呈浓度依赖性减小（F=5．48,P=0．003）。浓度为5、10、20、30、40、50μmol·L^-1的Ori对成纤维细胞生长抑制率分别为11．26％、23．40％、35．32％、47．90％、59．38％和72．41％。结论Ori可以抑制培养的兔眼滤过区结膜成纤维细胞的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。Ori可能成为一种治疗青光眼术后滤过泡纤维化的新药物。（眼科,2009,18：128-130）