抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。     

MyD88/PI3-K/NF-κB途径介导脂氧素A4拮抗LPS诱导大鼠内皮细胞的白细胞介素合成

目的研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞合成白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8的影响，并探讨其机制。方法对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC），用LXA4孵育，再加入LPS；或单用LPS刺激PMVEC。在孵育后用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的IL-1β、IL-6、IL-8蛋白表达；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、IL-8的mRNA表达。应用Western blot法检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3-K）、髓细胞分化因子88（MyD88）的表达。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定核因子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）的DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白合成与mRNA表达，抑制PI-3K的表达，抑制NF-κB和AP-1的DNA结合活性，但不影响LPS诱导的MyD88表达。结论LXA4通过下调PI3-K的表达和NF-κB、AP-1的DNA结合活性，拮抗LPS对PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8合成的诱导作用。     

G-CSF对外周血树突状细胞亚群比例的影响

目的 :了解G CSF对小鼠外周血树突状细胞 (DC)亚群比例的影响。方法 :以不同剂量 (0、5 .0、10 .0或 15 .0 μg)的G CSF ,分别皮下注射于BALB/c小鼠 ,连续 6d ,每天 1次。第 6天分离外周血DC ,用流式细胞仪检测DC1(CD11c+ CD8a-)和DC2 (CD11c+ CD8a+ )的比例并计算其绝对值。结果 :经不同剂量的G CSF刺激后 ,外周血DC1的绝对值无显著变化 ,而DC2的绝对值增加 5倍 (9.6× 10 6/Lvs 5 5 .1× 10 6/L ,P <0 .0 1) ,DC1/DC2比值降低 (4.2vs 0 .7,P <0 .0 1)。结论 :G CSF在体内可提高外周血DC2的绝对数 ,对DC1的数无明显影响 ,从而使DC1/DC2的比例倒置     

大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a( )中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。     

乙脑病毒prME蛋白编码基因表达分析及不同DNA免疫方法比较

将构建的含流行性乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)prME蛋白编码基因的重组质粒 (pJME)以不同浓度 (10 μg、5 μg以及 3μg)分别转染于HepG2细胞中 ,Westernblot法分析重组质粒表达特点 ,肌肉与基因枪注射方式将pJME免疫BALB/c鼠 ,二次免疫后 3周 ,腹腔注射乙脑病毒JaGAr 0 1株 ,10 5PFU/10 0 μl作为病毒攻击观察 2 1d。比较分析所产生的中和抗体效价以及保护基金项目 :日本金泽医科大学High Tech nologycenterH2 0 0 0 2项目资助作者单位 :中国医科大学附属第二医院感染科 (冯国和 ,王玉梅 ,窦晓光 ,王占英 ,乔…     

注射用去甲万古霉素(万迅)治疗急性细菌性感染不良反应调查研究

目的 :评价国产去甲万古霉素 (万迅 )上市后的不良反应。方法 采用多中心、开放试验设计 ,对去甲万古霉素治疗临床革兰阳性菌感染中的临床与实验室不良事件进行观察记录与评价。结果 :本中心入选病例共 2 6 4例 ,合格病例 2 5 7例 ,其中临床不良事件发生 7例 ,与去甲万古霉素有关者 5例 ,主要表现为消化道症状与皮疹 ,其临床不良反应发生率在入选病例中为 1 .89% ,在合格病例中为 1 .95 % ,临床不良反应多较轻微且为一过性 ;实验室不良事件发生 4 5例 ,其中与去甲万古霉素有关者 1 1例 ,主要表现为肾功能、肝功能异常及蛋白尿 ,其实验室不…     

腹部推拿联合艾灸治疗脾虚型功能性便秘的临床疗效

目的：分析腹部推拿联合艾灸治疗脾虚型功能性便秘的临床疗效。方法：选取郑州人民医院2021年11月至2023年1月期间收治的78例脾虚型功能性便秘患者,其中艾灸治疗的39例患者纳入对照组,在艾灸治疗基础上联合腹部推拿治疗的39例患者纳入观察组。治疗后,比较两组患者临床疗效与相关临床指标。结果：观察组患者总有效率高于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;治疗后,观察组患者排便次数、大便性状、盆底松弛程度、阻塞感、排便不尽感积分均低于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;治疗后,观察组患者直肠肛管压差、力排时肛管残余压均低于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;治疗后,观察组患者血清胃动素（MTL）、P物质（SP）水平均高于对照组,生长抑素（SS）水平低于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）。结论：腹部推拿联合艾灸治疗脾虚型功能性便秘可进一步改善患者相关临床指标。     

颅内肿瘤的CT误诊分析

目的　分析颅内肿瘤的CT误诊原因 ,提高颅内肿瘤的CT诊断水平。方法　回顾分析经病理证实、CT误诊的 17例颅内肿瘤的CT图像资料 ,并与病理学结果进行对照。结果　CT误诊的 17例包括脑膜瘤 7例 ,胶质瘤 7例 ,颅咽管瘤 1例 ,垂体瘤 1例 ,多发颅内肿瘤1例。病变征象不典型、对病变CT征象认识不足和观察不仔细、检查方法不当、诊断思维错误、机器因素等是造成CT误诊颅内肿瘤的主要原因。结论　加强对病变CT征象的认识 ,培养客观正确的诊断思维 ,选择恰当的扫描方式 ,有助于减少或避免颅内肿瘤的CT误诊。     

应用低分子右旋糖酐防治透析中低血压的体会

血液透析(HD)的主要目的是清除体内毒素和多余水份.低血压是透析最常见并发症,防治方法很多,但对于一些终末期肾衰患者又存在大量的体液潴留行HD,在单位时间内超滤出较大的水份达到干体重是非常困难的,最大限度的超滤又常引起容量性低血压,且顽固难以纠正,患者不能耐受而达不到除水及充分透析的目的.针对这种情况,我们对7例肾功不全尿毒症患者,采用快速间歇静点低分子右旋糖酐36次,临床效果满意,现介绍如下.     

引种紫锥菊有效成分菊苣酸含量研究

目的 研究引种紫锥菊中菊苣酸的含量,为开发利用紫锥菊资源提供依据。方法 对不同生长期、不同部位的紫锥菊提取物进行HPLC测定。结果 盛花期前后的地上部分菊苣酸含量最高（1.108%),产物的得率亦高（23.0%)。结论 引种栽培在北京地区的紫锥菊中菊苣酸含量优于原生长在北美洲的紫锥菊。