浊点系统中红酵母静息细胞生物还原3,5-二(三氟甲基)苯乙酮

以红酵母静息细胞为生物催化剂,在由两种不同浊点的表面活性剂组成的浊点系统中对3,5-二(三氟甲基)苯乙酮进行生物转化,以生产3,5-二(三氟甲基)苯乙醇.分别考察了浊点系统对细胞生长和转化过程的影响.在细胞培养阶段表面活性剂Triton X-114(TX-114)能够大大提高细胞对毒性底物的耐受能力.表面活性剂浓度5％,底物浓度6μl/ml时,浊点系统的产物浓度为5.47 mg/ml,转化率为80.5％,分别比两相系统提高91.3％和78.1％.细胞经4次循环使用,活性仍保持80％以上.     

编码精子赤道段蛋白的质粒DNA免疫影响小鼠生育功能

目的 探讨编码小鼠精子赤道段蛋白(mESP)的DNA疫苗免疫避孕功能.方法 构建PcDNA3.1/mESP真核表达质粒,表达mESP蛋白N-端片段.将纯化后的质粒直接肌肉注射免疫8只BALB/c雌性小鼠,以空载质粒pcDNA3.1免疫作为对照组.通过RT-PCR检测重组质粒在小鼠体内的表达情况.通过ELISA和双重免疫...     

重组人血管内皮抑制素的双抗体夹心ELISA特异性定量检测

建立了特异性检测重组人血管内皮抑制素(1)的双抗体夹心ELISA法,可区别内源性endostatin和1.1在7.8～1 000ng/ml浓度范围内线性良好,批内、批间RSD为3.9%～5.3%和4.4%～7.1%,平均回收率为97.70.     

酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的　构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法　应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%琼脂糖电泳比较大小 ,筛选重组子。结果　SDS PAGE显示重组菌S 腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为 4 2KDa ,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的 4 2 % ,酶活达到 14 .1U/g湿菌体 ,比宿主菌酶活提高 15 .7倍。结论　酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达 ,重组菌已具有初步的工业化应用价值     

超声引导细针穿刺活检——组织学与细胞学检查的对比研究

本所自1980年开展了超声引导下细针穿刺细胞学检查,1986年进一步开展了超声引导下细针穿刺组织学检查。通过对106例可疑胸腹部占位性病变,每例同时作细针组织学和细胞学活检,以对比这两种方法的诊断价值。兹将结果和初步经验报告如下。 仪器与操作方法 超声仪;ALOKA-SSD650实时灰阶超声仪,引导穿刺用3.5MHz的机械扇扫探头,配有附加导     

环氧合酶-2对人肝癌细胞增殖和凋亡的调节作用

目的:观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在肝癌细胞中表达,探讨COX-2抑制剂celecoxib对肝癌细胞增殖和凋亡的作用．方法:免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究COX-2在肝癌细胞株中表达;MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响;透射电镜及流式细胞仪观察 celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响及MDR1／P-gp表达的变化;用RTPCR 方法检测Survivin mRNA药物处理后表达的变化．结果:celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈时间和剂量依赖性．celecoxib作用HepG2 48 h抑制率为70．98％±0．67％(200 μmol／L)、 47．93％±1．08％(100 μmol／L);Bel-7402为 57．29％±0．67％(200 μmol／L)、43．84％± 0．86％(100 μmol／L);同样浓度但作用20 h, HepG2为45．51％±1．35％(200 μmol／L), 14.35％±1．55％(100 μmol／L);Bel-7402则为34．35％±0．63％(200 μmol／L),15．35％± 0．88％(100 μmol／L),不同浓度以及不同作用时间相比均有显著差异(P<0．01);100 μmol／L celecoxib作用24,48,72,96 h的肝癌细胞凋亡率分别为12．2％±2．44％,4．0％±1．67％,20．4％±4．38％,57．9％±5．74％(HepG2)和3．0％± 1．05％,18．5％±3．51％,29.3％±3．25％,48．4％±4．77％(Bel-7402),与对照组相比有显著差异(P<0．01);细胞周期分布改变,G0／G1期细胞比例增加,24,48,72 h分别为:44．17％±1．01％,59．60％±0．61％,62．7％±1．22％ (HepG2)和47．80％±0．41％,58．60％±0．46％, 78．40％±1．95％(Bel-7402),与对照组比较有显著差异(P<0．01);对照组PCNA蛋白表达呈强阳性( ),经药物处理后表达减弱,并随时间延长而显著;HepG2中COX-2蛋白表达明显弱于Bel-7402,药物处理后表达也不同．Survivin在肝癌细胞株中呈高表达状态, celecoxib作用48 h mRNA表达降至零,而72 h 后表达水平又有上升;两株肝癌细胞中经 celecoxib处理后,MDR1／P-gp表达有降低的趋势(Bel-7402),或是基本上不受影响(HepG2)．结论:COX-2抑制剂celecoxib体外对肝癌细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖,并诱导凋亡,使细胞周期阻滞于G1／S期．COX-2与P-gp,Survivin表达密切相关．     

rIL－2逆转扩张型心肌病NK细胞活性的研究

本文检测了扩张型心肌病（ＤＣＭ）、冠心病（ＣＨＤ）和正常人（ＮＣ）的自然杀伤细胞（ＮＫ）数目及活性。结果发现ＤＣＭ患者ＮＫ数目与ＣＨＤ及ＮＣ组比较无统计学差异（Ｐ＞０．０５），而ＮＫ活性低于其它二组（Ｐ＜０．００１）。经重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）温育ＮＫ后，ＮＫ活性明显升高（Ｐ＜０．００１），同时ＮＫ活性与ＤＣＭ病情严重程度有关，提示ＮＫ在ＤＣＭ发病中有意义，并可作为判断ＤＣＭ病情严重程度的指标。     

固定化酵母细胞生产1，6－二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株，改变通透性后的酵母细胞，在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞，用卡拉胶固定化后，装入酶反应柱，连续生产ＦＰＤ，柱反应可稳定在１０天以上，转化率维持在２０％以上。     

中、老年直肠癌患者扩大根治术的临床评价

目的 探讨中、老年直肠癌患者直肠癌扩大根治术的可行性,并分析各组淋巴结的转移规律.方法 接受保留盆腔自主神经的直肠癌扩大根治术97例,其中传统开腹直肠癌扩大根治术85例,腹腔镜辅助下的直肠癌扩大根治术12例,清除淋巴结以常规病理学方法(HE染色)观察.结果 97例患者中有39例发生淋巴结转移,有10例发生了侧方淋巴结转移,共取出淋巴结2 036枚,平均清除淋巴结21.0枚,转移淋巴结169枚,总淋巴结转移率为40.2%(39/97),侧方淋巴结转移率10.3%(10/97).结论 直肠癌的淋巴转移以肿瘤旁直肠系膜转移为主,肠系膜下动脉根部及侧方淋巴结转移率低.中、老年直肠癌患者中分化较差及T3、T4的患者侧方淋巴结转移的可能性明显增加,TME基础上加行侧方淋巴结清扫,无论是传统开腹扩大根治术还是腹腔镜辅助下的扩大根治术对于老年患者都安全可行,并不增加并发症的发生率.