粒细胞集落刺激因子动员的小鼠异基因骨髓移植的实验研究

大量的实验室和临床证据表明 ,供体来源的免疫活性细胞介导的移植物抗白血病 (GVL)效应是骨髓移植 (BMT)治疗白血病疗效卓著的决定因素 ,而急性移植物抗宿主病(aGVHD)仍然是移植相关死亡的主要原因。采用同基因骨髓移植物中混合一定量的异基因成分骨髓细胞进行混合骨髓移植 (MBMT) ,可降低GVHD的发生并增强GVL效应[1 ,2 ] 。采用G CSF动员的异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)时 ,重度aGVHD发生率降低 ,其原因之一是动员剂G CSF改变了T淋巴细胞功能[3] 。我们探讨了G CSF动员供髓鼠进行MBMT ,以增强GVL效应而不增加G…     

B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因在293T细胞表达

本研究目的是构建含有人凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因的慢病毒载体,观察其在293T细胞中的表达情况。用限制性内切酶法获得B区缺失的人凝血因子Ⅷ基因(BDDhFⅧcDNA)片段,将其克隆至慢病毒载体pXZ208,构建了慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ;用限制性内切酶法鉴定载体的连接方向,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒pXZ208-BDDhFⅧ分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,包装后感染293T细胞,并以pXZ171作为对照。在感染后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BDDhFⅧ基因的转录,一期法检测细胞培养上清FⅧ的活性,流式细胞仪(FCM)检测载体的感染效率,PCR检测BDDhFⅧ基因的整合。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,其基因转导染效率达到了59.57%。RT-PCR法能够检测到BDDhFⅧ转录的mRNA。感染后24、48、72小时检测到细胞上清中FⅧ活性(FⅧ∶C)分别为12%、43%、87%。PCR法扩增出了534bp的特异性片段。结论:成功构建的慢病毒表达载体pXZ208-BDDhFⅧ,在体外可以有效感染293T细胞并表达有活性的FⅧ,提示基因治疗可应用于血友病A。     

免疫性血小板减少症患者白介素-22及相关CD4~+ T细胞亚群的表达

本研究通过检测初治的成人免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中白介素-22(IL-22)及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在ITP发病机制中的作用。以我院住院治疗的40例新诊断的急性ITP患者及40例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其相关性。结果表明,新诊断的ITP患者血浆中IL-22的含量为(364.12±94.22)pg/ml,显著高于健康对照者(P<0.001);ITP患者外周血Th1细胞比例为(18.92±6.03)%,Th22细胞比例为(2.28±0.51)%,显著高于健康对照者(P<0.05);且ITP患者血浆IL-22水平与Th1和Th22细胞比例之间存在正相关(Th1:r=0.42,P=0.022;Th22:r=0.40,P=0.030);而ITP患者Th17细胞比例与健康对照者比较无明显差异,且与IL-22水平无相关性。结论:成人ITP患者外周血中IL-22水平明显升高,且与Th1、Th22细胞比例之间密切相关,提示IL-22与Th1和Th22细胞在ITP的发病中可能起着协同作用,而Th17细胞可能与ITP的发病无关。     

昆明山海棠提取物对移植物抗宿主病小鼠T细胞亚群的影响

[目的]观察昆明山海棠(THH)提取物对移植物抗宿主病(GVHD)小鼠外周血T细胞亚群(CD3+CD4+、CD3+CD8+)的影响,探讨THH对GVHD的预防作用及机制.[方法]BALB/c受鼠(H-2d)清髓性预处理后输注C57BL/6供鼠(H-2b)骨髓细胞和脾细胞混合液,随机分4组:模型对照组、环孢素A(CsA)组(剂量为10 mg·kg-1·d-1)、THH组(剂量为400 mg·kg-1·d-1)、THH+CsA联合用药组(联药组,剂量为THH 100 mg·kg-1·d-1+CsA 5 mg·kg-1·d-1).观察移植后受鼠GVHD发生及存活情况以及嵌合体植入情况;采用流式细胞术测定受鼠外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+ T细胞百分率.[结果]①CsA组、THH组、联药组受鼠生存时间均长于模型对照组(P＜0.01);②CsA组、THH组、联药组受鼠GVHD临床表现和病理改变均较模型对照组轻;③模型对照组、CsA组、THH组、联药组受鼠骨髓细胞上异基因H-2b百分率均＞95%;④与模型对照组比较,CsA组、THH组、联药组受鼠移植后外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞百分率均下降(P＜0.05),CD4+/CD8+细胞比值均上升(P＜0.05),联药组变化最显著(P＜0.05).[结论]THH可通过调节CD4+/CD8+细胞比值,抑制T淋巴细胞免疫反应而预防小鼠GVHD,THH和CsA小剂量联合用药可能有协同作用.     

我院呼吸内科抗菌药物使用调查分析

目的：了解医院呼吸内科抗菌药物使用情况。方法：抽取2011年6月～11月出院患者病历100份,统计分析抗菌药物使用情况。结果：抗菌药物使用率92.00%,其中单用36.95%,联合用药63.05%,更换使用29.35%,共涉及8类16种,使用频率最高的是头孢菌素类,使用疗程3～29d。结论：我院呼吸内科的抗菌药物使用存在一些问题,需进一步提高合理用药水平。     

抗原负载的树突状细胞介导的抗慢性粒细胞白血病作用

目的：研究慢性粒细胞白血病（CML）细胞冻融抗原(CLA)负载的树突状细胞（DC）对特异性抗白血病T细胞的作用。方法：将健康人外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA负载,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共同培养,应用乳酸氢酶释放法观察其对自身CML细胞杀伤活性,与未负载的DC与CIK共培养组、CIK组分别进行比较。结果：DC经抗原负载后介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞杀伤活性明显增强。结论：用CLA负载可进一步提高DC介导的特异性抗白血病T细胞对CML细胞的杀伤活性。     

混合骨髓移植

混合骨髓移植(MBMT)可诱导形成混合嵌合体,减轻移植物抗宿主病,同时保留移植物抗白血病效应,是治疗多种血液病和诱导特异性移植耐受的一种有效手段.本文对MBMT作用特点和机制以及临床应用等方面进行综述.