邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯对血睾屏障完整性的损伤及机制

目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)破坏睾丸血睾屏障完整性的机制研究.方法 将出生后60 d的SD雄鼠随机分为两组,即玉米油对照组和DEHP暴露组,DEHP的用药剂量为750 mg/kg,采用灌胃的方式给药,每天1次,连续处理30 d,并于最后1次处理后麻醉处死.HE染色观察睾丸的组织病理学改变情况;Western blot检测睾丸组织中构成血睾屏障的关键连接蛋白N-cadberin、β-catenin、occludin和connexin43 (Cx43)的膜蛋白表达水平;MTT检测睾丸支持细胞(Sertoli cell)的活力,活性氧检测试剂盒检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成水平;Western blot检测抗氧化应激蛋白Nrf2以及p-p38的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,DEHP暴露后的睾丸曲细精管结构紊乱,管腔中可见圆形的精子细胞,精子排列失去极性;Western blot结果表明occludin和connexin43的表达明显降低,N-cadherin和β-catenin表达明显升高(P＜0.05);Sertoli细胞随着DEHP暴露浓度的增加,活力显著降低,ROS生成水平明显增加,Nrf2和p-p38的蛋白表达明显增高(P＜0.05).结论 DEHP暴露可通过氧化应激激活p38 MAPK信号通路,破坏血睾屏障完整性,并最终损伤生精功能.     

piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨piwil2诱导的肿瘤样干细胞（piwil2-iCSCs）来源的差异piRNA NU13对肾母细胞瘤细胞（G401）生物学行为的影响。方法RT-qPCR检测G401中piRNA NU13及NOP56的表达情况；通过脂质体转染技术，在肾母细胞瘤细胞株G401中过表达及抑制piRNA NU13，并用RT-qPCR技术验证转染后G401细胞中piRNA NU13的表达量；通过CCK8检测转染后G401细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡能力，划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变；通过双荧光素酶实验检测NOP56与piRNA NU13的结合情况；通过Western blot检测MMP2、MMP9、BAX、Bcl2、NOP56蛋白表达情况。结果在人肾母细胞瘤细胞G401中piRNA NU13表达水平低于肾小管上皮细胞HK2（P < 0.05）；NOP56在G401及肾母细胞瘤组织均高表达（P < 0.05）；在G401中上调piRNA NU13表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭，并促进肿瘤细胞凋亡（P < 0.05）；过表达piRNA NU13可抑制MMP2、MMP9及Bcl2的表达水平，促进BAX表达（P < 0.05）；piRNA NU13与预测靶基因NOP56非直接结合，但可间接调控NOP56的表达。结论piRNA NU13在肾母细胞瘤中低表达，NOP56在肾母细胞瘤中高表达，piNU13可能间接调控NOP56表达从而抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡。     

低氧环境下丙泊酚可增加PC12细胞的凋亡

目的 探讨低氧环境下丙泊酚对PC12细胞株凋亡的影响及机制.方法 将PC12细胞接种于培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为6组:低氧对照组(CH组)、空气对照组(CA组)和氧气对照组(CO组),对照组加入脂肪乳浓度10 μmol/L.丙泊酚低氧组(PH组)、丙泊酚空气组(PA组)和丙泊酚氧气组(PO组),丙泊酚浓度为10 μmol/L.药物处理完毕后分别放人低氧(5％O2),空气和氧气(35％ O2)环境的细胞培养箱培养,8h后流式检测细胞凋亡情况,检测细胞内ROS水平和细胞SOD酶活力.结果 与CA组比较,PA组细胞凋亡增加,活性氧簇(ROS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强;与CH组比较,PH组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与CO组比较,PO组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与PA组比较,PH细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;CO组、CA组和CH组上述各指标差异无统计学意义.结论 低氧环境下丙泊酚可通过氧化应激损伤导致PC12细胞凋亡增加.     

汽车尾气来源PM2.5长期暴露导致大鼠多器官损害

目的：建立Sprague Dawley（SD）大鼠空气细颗粒物（particulate matter 2.5,PM2.5）长期暴露模型,观察PM2.5长期暴露对SD大鼠全身主要脏器的影响。方法：40只SD大鼠（80~94 g,28日龄）随机分配成3组：生理盐水对照组10只,低剂量组[2 μg/100 （g·d）]15只,高剂量组[16 μg/100（g·d）]15只。每天分别给予0.9％的生理盐水或PM2.5颗粒,连续暴露60 d,最后一次暴露24 h后取标本,对肺、心、肝、脾和肾5个主要脏器进行大体观察以及病理学检测。结果：与正常组相比,PM2.5暴露组的体重明显降低（P<0.05）,且肺部外观改变明显,肺脏及心脏组织结构受损,炎症反应明显,肝脏、脾脏及肾脏亦有炎症表现。结论：长期暴露在汽车尾气来源PM2.5污染环境中引起大鼠肺、心、肝、脾、肾炎性损害,肺脏及心脏损害明显。     

Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)/重组CRISPR相关核酸酶9(CRISPR-associated protein 9, Cas9)构建Mafb基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因杂合子（Mafb+/-）F1代小鼠,裂解鼠尾提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳判定基因型结果。使Mafb+/- F1代小鼠与野生型（wild type, WT）C57BL/6J小鼠交配繁殖。将获得的Mafb+/-小鼠间进行交配,获得Mafb基因敲除纯合子（Mafb-/-）雄性胎鼠。免疫荧光验证Mafb-/-胎鼠阴茎组织中Mafb基因表达情况;扫描电镜及石蜡切片HE染色观察Mafb-/-胎鼠阴茎组织形态,免疫荧光检测胎鼠阴茎组织尿道缝处细胞E-Cadhrin和α-SMA的表达情况。结果 成功构建、繁育Mafb+/-小鼠,保持种群数量并得到Mafb-/-雄性胎鼠,PCR法成功鉴定基因型。免疫荧光结果显示Mafb-/-胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于WT型,尿道缝处细胞E-Cadhrin蛋白表达明显降低,α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电镜及HE染色显示Mafb-/-雄性胎鼠为尿道下裂表型。结论 成功构建 Mafb基因敲除小鼠模型,确定其敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型,发现尿道缝处细胞中E-Cadhrin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用提供基础。