一氧化氮合酶激活参与烧伤后Ca~(2 )介导的心肌线粒体损伤

目的 :探讨线粒体一氧化氮合酶 (mtNOS)在严重烧伤早期心肌线粒体损害中的作用。方法 :复制30 %TBSAⅢ°烧伤大鼠模型 ,取正常及伤后 1、3、6、12、2 4h大鼠心肌分离线粒体 ,测其呼吸功能、Ca2 浓度 ([Ca2 ]m)及细胞色素c氧化酶、mtNOS活性。结果 :①伤后 1h心肌线粒体呼吸控制率 (RCR)显著高于正常组 ,但 3、6、12、2 4h明显低于正常组 ,Ⅲ态呼吸速率 (ST3 )变化与RCR平行 ,ST4 仅于伤后 3h明显升高 ;②伤后各时点 [Ca2 ]m 均明显高于正常组 ,尤以 3、6h为甚 ,而mtNOS活性于伤后 3、6、12、2 4h显著高于对照组 ,细胞色素c氧化酶活性于伤后 3、6、12、2 4h显著低于正常组 ;③伤后mtNOS活性与 [Ca2 ]m 呈明显正相关 ,相关系数为 0 8945 (P <0 0 5 ) ,RCR与mtNOS活性呈显著负相关 ,相关系数为 - 0 934 7(P <0 0 5 )。结论 :伤后 [Ca2 ]m 升高激活mtNOS ,可能参与严重烧伤早期心肌线粒体损害。     

严重烧伤早期心肌线粒体磷脂变化及其机制

目的探讨严重烧伤早期心肌线粒体磷脂变化及其发生机制,并分析其在线粒体功能损害中的作用。方法健康成年Wistar大鼠48只,随机分为正常对照组(8只)和烧伤组(40只)。烧伤组采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型。取正常及伤后1,3,6,12,24h大鼠心肌分离线粒体,抽提并测定线粒体磷脂,同时检测线粒体Ca2+浓度(［Ca2+］m)、线粒体磷脂酶A2(mtPLA2)以及质子腺苷三磷酸酶(F0F1-ATPase)、细胞色素c氧化酶活性。结果(1)伤后3,6,12,24h心肌线粒体总磷脂与磷脂酰乙醇胺明显降低,伤后6,12h磷脂酰胆碱显著下降,但伤后6h鞘磷脂明显升高。(2)伤后3,6,12,24h大鼠心肌mtPLA2活性与［Ca2+］m均明显升高,且伤后mtPLA2活性与［Ca2+］m呈显著正相关(r=0.9271,P<0.01)。(3)伤后1h线粒体F0F1-ATPase活性明显升高,但伤后3,6,12,24h线粒体F0F1-ATPase及细胞色素c氧化酶活性均显著降低。结论严重烧伤早期心肌线粒体总磷脂降低,同时磷脂组成发生改变,导致线粒体细胞色素c氧化酶、F0F1-ATPase活性降低。磷脂变化可能与［Ca2+］m升高激活mtPLA2有关。     

大鼠严重烧伤早期心肌线粒体通透性转换孔状态改变及其机制

目的　探讨大鼠严重烧伤早期心肌线粒体通透性转换孔 (PTP)状态改变及其机制。方法　Wistar大鼠 48只随机分为正常对照组、烧伤 1、3、6、12、2 4h组 ( 3 0 %Ⅲ度烫伤 )。所有大鼠处死前 5min均从颈外静脉推注 0 .5mmol L 2 [3H]去氧葡糖 ( [3H]DOG) ,测定伤后各组大鼠心肌线粒体 [3H]DOG、cytc、MDA含量及 [Ca2 + ] m。结果　①大鼠烧伤后 1h心肌线粒体 [3H]DOG及cytc含量与正常对照组无明显差异 ,但 3、6、12、2 4h心肌线粒体 [3H]DOG含量明显高于正常对照组 ,cytc含量明显低于对照组 ,分别是对照组的 68 8%、5 0 .0 %、77.1%、72 .9%。②大鼠烧伤后 3、6、12、2 4h心肌线粒体MDA含量及 [Ca2 + ] m 显著高于正常对照组。③伤后心肌线粒体 [3H]DOG含量与 [Ca2 + ] m 、MDA均呈显著正相关 ,相关系数分别为 0 .85 47、0 .9117(P <0 .0 1)。结论　烧伤后 1h心肌线粒体PTP状态无明显改变 ,但伤后 3、6、12、2 4hPTP开放明显增加 ,线粒体Ca2 + 超载及自由基增加可能是烧伤后PTP开放的重要原因     

浅谈医科学生的法律教育

随着卫生法律制度的逐步完善和患维权意识的日益增强，医疗纠纷数量急剧增加，医院与医生面临严峻的法律挑战。医科学生作为未来医疗卫生事业的生力军，在大学时代接受专门的卫生法律教育势在必行。卫生法律课程应作为医科学生的必修课，纳入我国的医学教育体系。组织经验丰富的医学与法学专家共同编写全国通用教材及相应的教学大纲是当前医学院校开展卫生法律教育的主要任务。建立良好的卫生法律师资队伍、紧密结合医疗纠纷案例进行教育、加强相关人素质教育是卫生法制教育的关键。     

二氮嗪对严重烧伤大鼠心肌损害的保护作用及其机制

目的 探讨二氮嗪对严重烧伤早期心肌损害的保护作用及其机制。方法 健康成年Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、烧伤组和烧伤二氮嗪处理组(n=8)。烧伤组、烧伤二氮嗪处理组大鼠造成30％TBS AⅢ度烧伤，伤后30min经腹腔补液，烧伤二氮嗪处理组同时于颈外静脉推注二氮嗪(剂量10mg／kg)。烧伤组和烧伤二氮嗪处理组动物于伤后6h抽血并活杀，测定线粒体K^ 内流、呼吸功能、Ca^2 浓度([Ca^2 ]m)、MDA及血清LDH、CK。结果 二氮嗪处理组线粒体K^ 内流速率明显高于正常组与烧伤组，且线粒体呼吸控制率(RCR)、Ⅲ态呼吸速率(ST3)明显高于烧伤组，而[Ca^2 ]m、MDA含量显著低于烧伤组，Ⅳ态呼吸速率(ST4)与正常对照组无显著差异；同时二氮嗪处理组血清CK、LDH显著低于烧伤组，分别是烧伤组的63．7％和52．0％。结论 二氮嗪可减轻严重烧伤早期心肌细胞损害，其机制可能与开放线粒体K^ 通道，抑制线粒体Ca^2 超载及减少自由基产生有关。     

内皮细胞在瘢痕增生中的作用

目的:在创面愈合过程中,内皮细胞通过成血管作用、分泌多种细胞因子、参与细胞外基质的调控来直接或间接地促进了瘢痕的形成。通过探讨内皮细胞在瘢痕增生中的作用来寻找瘢痕增生防治的新途径。资料来源:应用计算机检索Medline1995-01/2004-09的瘢痕增生的相关文章,检索词为“hypertrophicscar,endothelialcell,VEGF,TGF,ma-trixmetalloproteinase”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊网专题全文数据库1994-01/2004-12的瘢痕增生的相关文章并限定文章语言种类为中文,检索词为“瘢痕增生、内皮细胞、内皮细胞生长因子、血管生成、缺氧”。资料选择:对资料进行初审,选取与内皮细胞在瘢痕增生中作用相关的文章。资料提炼:共收集到17篇文章,其中9篇关于瘢痕增生机制研究,5篇关于内皮细胞成血管作用,2篇关于缺氧与血管生成,1篇关于无瘢痕愈合。资料综合:综合上述文献,从成血管作用、细胞生长因子分泌以及细胞外基质调控3方面阐述内皮细胞对瘢痕增生的作用。结论:瘢痕增生是烧、创伤后创面异常愈合反应的结果,以过量的组织纤维化和胶原蛋白沉积为特征,是现代医学上仍未解决的难题。抑制血管内皮细胞的增殖,改善瘢痕血管的病理状态,可望成为防治瘢痕增生的新途径之一。     

内皮抑素重组腺病毒表达载体构建及对内皮细胞增殖的影响

背景:烧创伤后创面愈合多伴有瘢痕增生,内皮细胞在瘢痕增生中具有重要作用,抑制内皮细胞的生长可以在一定程度上减轻瘢痕增生。目的:构建含有人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并观察与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变。设计、时间及地点:观察对照实验,于2006-09/2007-05在解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所国家重点实验室完成。材料:pAdTrack-CMV及pAdEasy-1购自美国Stratagene公司;293细胞及大肠杆菌Ecoli.DH5α由本室保存。方法:以人胎肝组织mRNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应及聚合酶链反应获得内皮抑素基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES。经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆。脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经聚合酶链反应鉴定及上清中内皮抑素含量检测后,感染角朊细胞,采用套皿法与内皮细胞共培养。并与未转染的角朊细胞进行对照观察。主要观察指标:pAd/hEnd的同源重组及其鉴定,Ad/hEnd的产生与鉴定,转染293细胞后内皮抑素的表达,Ad/hEnd的纯化与滴度测定,培养液中内皮抑素含量,内皮细胞凋亡百分数及内皮细胞抑制率测定。结果:①成功获取了Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012PFU/L。②感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌内皮抑素,连续培养3d后,培养液中内皮抑素含量可达226μg/L。③与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与细胞抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。结论:与内皮细胞共培养时,转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌内皮抑素促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖。     

延迟快速血定安复苏对烫伤犬血流动力学及酸碱平衡的影响

目的：探讨延迟快速血定安复苏对烫伤犬血流动力学及酸碱平衡的影响。方法：复制４０％体表面积（ＴＢＳＡ）Ⅲ度犬烫伤延迟快速复苏（伤后６小时）模型,实验分为烫伤不补液对照组（ＢＣ组）、延迟血浆复苏组（ＤＰ组）和延迟血定安复苏组（ＤＧ组）,观察其股动脉血压（ＢＰ）、心排血量（ＣＯ）、肺动脉契压（ＰＡＷＰ）、动脉血ｐＨ及血浆乳酸含量的变化。结果：①ＢＣ组伤后１２～３６小时内动物全部死亡,ＤＰ、ＤＧ２组均存丰     

NO在外源性高浓度Ca2+损伤心肌线粒体中的作用

目的：探讨一氧化氮在外源性高浓度Ca²⁺损伤心肌线粒体中的作用。方法：正常心肌线粒体分为单纯L-精氨酸（L-Arg）组、Ca²⁺损伤组和左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）保护组,分别于含有20 μmol/L EDTA、100 μmol/L CaCl₂以及1 μmol/L L-NAME+100 μmol/L CaCl₂的反应介质中孵育,然后测定线粒体活力、膜电位以及NO含量。结果：Ca²⁺损伤组线粒体活力、膜电位明显下降,而NO^-₂/NO^-₃含量升高,且线粒体活力、膜电位与NO₂^-/NO₃^-含量呈显著负相关（r=-0.5297,P<0.01;r=-0.6041,P<0.01）;L-NAME保护组线粒体活力与膜电位均明显高于Ca²⁺损伤组,但仍低于L-Arg组,而NO₂^-/NO₃^-含量低于Ca²⁺损伤组,且与L-Arg组无明显差异。结论：外源性Ca²⁺可激活线粒体一氧化氮合酶,使NO生成增多,后者在线粒体活力与膜电位降低中起重要作用。     

内皮抑素重组腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖特性的影响

目的构建含有人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并探讨与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.方法以人胎肝组织mRNA为模板,通过RT-PCR及PCR获得ES基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经PCR鉴定及上清中ES含量检测后,感染角朊细胞,并采用套皿法与内皮细胞共培养,测定培养液中ES含量、内皮细胞凋亡及细胞抑制率.结果成功获取Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012 pfu/L.感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌ES,连续培养3 d后,培养液中ES含量可达226 ng/ml;与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与抑制率分别为(32.7±7.1)%、(60.5±8.3)%,均显著高于对照组[(7.3±2.0)%、(13.8±1.6)%],(P＜0.01).结论与内皮细胞共培养时,转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌ES促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.