巨噬细胞促进MGC803细胞小鼠肾包膜下移植瘤的生长

目的：观察同种同基因小鼠单核巨噬细胞对胃癌MGC803细胞肾包膜下移植瘤生长的影响.方法：分离小鼠脾单核巨噬细胞,并制备其条件培养基,建立MGC803细胞肾包膜下移植瘤模型;于术后第1天两处理组小鼠分别腹腔注射同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞（CELL组）和同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞的24h条件培养基（CM组）,术后第6天处死小鼠,解剖显微镜下检测小鼠处理前后瘤体积的变化.结果：处理组瘤体体积增长较快,其中以CELL组体积增加最快,CM组、CELL组与对照组比较有显著意义;CM组与CELL组体积差别无显著性意义.结论：同种同基因小鼠脾脏单核巨噬细胞条件培养基及小鼠脾脏单核巨噬细胞腹腔注射能促进MGC803细胞昆明小鼠肾包膜下移植瘤的生长.     

转录因子与血管生成的研究

控制血管生成，不论是正性还是负性，对于多种疾病包括炎症、肿瘤等的治疗是十分有用的。血管生成主要依赖于血管内皮细胞表型的改变。在血管生成过程中，血管内皮细胞有多种不同基因的表达。因此，了解内皮细胞内这些基因的转录调控是非常重要的。     

重组人canstatin真核载体的构建及鉴定

目的 构荧光蛋白和canstatin融合蛋白基因的真核表达载体pEGFP-N1／canstatin，以深化研究血管生成抑制剂canstatin的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性。方法 提取人胚肝总RNA，RT—PCR扩增canstatin基因片断，T—A克隆到pGEM—T中，从pGEM—T／canstatin克隆载体中，将人canstatin cDNA亚克隆入真核表达载体pEGFP-N1，构建含人canstatin cDNA的重组质粒pEGFP-N1／canstatin，通过酶切鉴定出重组体并测序分析。结果 成功构建pEGFP—N1／canstatin真核表达载体，双酶切及测序鉴定显示canstatin基因片断正确插入载体，与Genebank中报道的序列一致。结论 pEGFP—N1／canstatin真核载体的构建为进一步进行canstatin蛋白表达和活性研究以及canstatin用于基因治疗奠定了基础。     

人类胃癌细胞高侵袭亚系的筛选及其生物学特性研究

目的采用Transwell小室筛选胃癌细胞高侵袭亚系并研究其生物学特性。方法利用Transwell小室筛选高侵袭力胃癌细胞亚系,通过HE染色、Western blotting、Transwell小室模型、免疫组织化学法及生长曲线研究亚系的生物学特性。结果利用Transwell小室反复筛选10次,从MKN-28细胞中筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S10。母亚两系细胞形态上无明显差异,但亚系中E—cadherin和TIMP-1蛋白表达同母系相比显著降低（P〈0．05）,显微镜下细胞计数示亚系迁移至膜背面的数量（100．25±0．50／视野）较母系（61．75±2．06／视野）明显增多（P〈0．05）,细胞运动能力明显增强;免疫组织化学结果显示,亚系中NM23-H1的表达明显低于母系（P〈0．05）;亚系体外生长速度快于母系。结论MKN-28S10细胞较MKN-28细胞具有更高侵袭力和更强增生能力。     

LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响

背景：课题组前期构建了CTAR3缺失突变型LMP1（LMP1△232-351）表达载体,初步了解该活性区在LMP1发挥作用中扮演十分重要的角色。目的：观察LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响。方法：采用逆病毒感染方式,建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1（LMP1△232-351）的鼻咽癌干细胞SP18细胞系,通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响,然后选用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞增殖指数。另外,利用Western-blot检测细胞中JAK3蛋白的磷酸化水平。结果与结论：①与SP18-LMP1细胞比较,SP18-LMP1△232-351细胞生长速度减慢,增殖指数降低（P〈0.01）。②在SP18-LMP1△232-351细胞中JAK3的磷酸化水平低于SP18-LMP1细胞。结果说明LMP1-CTAR3可能通过影响SP18细胞中JAK3的磷酸化,下调细胞的增殖指数,降低促细胞增殖的能力。     

高侵袭力人胃癌细胞亚系MKN-28s的建立

目的以穿透人工基底膜的能力大小为依据筛选具有体外高侵袭能力的胃癌细胞亚系。方法用体外培养法收集扩增能侵袭穿透人工基底膜的胃癌细胞亚系;比较母亚两系的侵袭能力;流式细胞术检测母亚两系细胞周期;免疫组织化学SP法观察母亚两系细胞Flt-4蛋白表达情况。结果从母系MKN-28中成功筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S;显微镜下细胞计数示亚系侵袭至膜背面的数量较母系明显增多（P〈0.05）,细胞侵袭力增强;亚系中Flt-4蛋白表达同母系相比显著增高;亚系增殖指数（PI）高于母系。结论MKN-28S细胞较MKN-28细胞具有更强体外侵袭力和增殖能力。     

Preparation,purification and characterization of the polyclonal antibody against α1-AT

Objective To prepare the polyclonal antibody against α1-antitrypsin(α1-AT)by immunizing rabbits with α1-AT,and to purify and characterize the antibodies produced from rabbits in order to establish the production process of the polyclonal antibody against α1-AT.Methods The healthy rabbits were routinely immunized with α1-AT to prepare polyclonal antibody against α1-AT.The serum antibody titers were determined by ELISA.The rabbits with qualified antibody titers were killed to collect blood.The antisera,obtained by centrifugalizing the whole blood,were purified by caprylic acid-ammonium sulfate precipitation and protein A affinity chromatography.The purified polyclonai antibodies were analyzed by 15%SDS-PAGE,and antibody titers weIe measured by ELISA.Results ELISA assay showed that the titers of antisera were over 105.The polyclonal antibodies,purified by caprylic acid-ammonium sulfate precipitation and protein A affinity chromatography,had good purity and immunological activity.Conclusion The production and purification processes of polyclonal antibody against α1-AT are successfully established.     

抗α1-抗胰蛋白酶多克隆抗体的制备、纯化和鉴定

目的 用α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)免疫家兔以产生多克隆抗体,并对产生的抗体进行有效地纯化和效价鉴定,建立抗α1-AT多克隆抗体的生产工艺.方法 按照常规方法免疫健康家兔进行抗α1-AT多克隆抗体的制备,用ELISA检测血清抗体效价.处死抗血清效价合格的家兔,取血、离心,获取抗血清.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法对抗血清进行纯化,纯化的多克隆抗体经15%十二烷基硫酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯度后,用ELISA测定效价.结果 ELISA检测表明,家兔产生的抗α1-AT多克隆抗体效价大于105.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法进行纯化获得了纯度高、活性好的抗α1-ATT多克隆抗体.结论 成功建立了抗α1-AT多克隆抗体的生产和纯化工艺.     

用改良ABC—ELISA方法检测人体液中凝集素受体的研究

应用改良ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ方法检测９０例正常人唾液中的刀豆凝集素（Ｃｏｎ Ａ）和花生凝集素（ＰＮＡ）受体。结果表明，正常人唾液中ＣｏｎＡ、ＰＮＡ受体含量较丰富，且性别、年龄组间无明显差别。检测其中部分人血清中ＣｏｎＡ、ＰＮＡ受体，发现血甭中ＣｏｎＡ受体含量较唾液中更为丰富，其比值为２．６：１，而血清中ＰＮＡ受体为阴性。本研究的目的在于阐明凝集素受体在人体液中的分布情况以及它们与细胞间的关系，为进一