PD-L2在小鼠未成熟树突状细胞上的表达及其生物学意义

目的探讨PD-L2分子在小鼠未成熟DCs上的表达及其在T细胞活化中的作用。方法采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DCs,采用FITC-Dextran吞噬实验和3H-TdR掺入试验鉴定未成熟DCs;采用流式细胞术检测未成熟DCs和经抗原负载及TNF-α刺激成熟的DCs上PD-L2、CD80和CD86的表达;混合淋巴细胞反应(MLR)和抗PD-L2单抗阻断试验分析未成熟DCs表达的PD-L2分子对T淋巴细胞的共刺激效应;3H-TdR掺入试验检测未成熟DCs对T淋巴细胞的促增殖效应;ELISA测定各组MLR反应上清中IL-2的分泌水平。结果经GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导5～6d天的DCs抗原吞噬能力最强,且CD80和CD86的表达为中等水平,刺激T细胞增殖能力较TNF-α作用48h的DCs显著低下,其可视为未成熟DCs,未成熟和成熟DCs均表达PD-L2分子,但未成熟DCs的表达较为低下,且未成熟DCs表面PD-L2分子可抑制T细胞的增殖,抑制T细胞分泌IL-2。结论PD-L2分子表达在未成熟DCs可通过下调T细胞分泌IL-2介导未成熟DCs免疫不应答效应。     

激发型CD40单抗5C11对白血病细胞来源树突细胞的诱导作用及生物学特性

目的　探讨激发型CD40 单抗 5C11对白血病细胞来源的树突细胞 (DC)的诱导作用及其生物学特性的影响。方法　激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合诱导白血病细胞分化为DC ,通过显微镜形态分析 ,流式细胞仪表型分析 ,活细胞计数 ,IL 6、IL 12ELISA定量检测及混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验等细胞生物学、免疫学方法对其进行研究。结果　白血病患者外周血或骨髓的白血病细胞 ,在经激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合培养后 ,能诱导成为大量成熟的DC ;形态学观察呈现典型的DC特征 ;流式细胞仪检测证实细胞表面上调性表达CD40 、CD80 、CD83 、CD86等分子 ;白血病细胞分化为DC后 ,IL 6分泌量减少 ,IL 12分泌量增加 (P <0 .0 5 ) ;同种异体混合淋巴细胞反应也显示 ,诱导的DC具有很强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,这种增殖的T细胞对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论　激发型CD40 单抗 5C11联合细胞因子能诱导白血病细胞分化为功能性DC。这可能在白血病的过继免疫疗法中具有潜在的应用价值。     

可溶性共刺激分子程序性死亡因子1表达与颈动脉粥样硬化斑块形成的相关性

目的探讨血清可溶性共刺激分子程序性死亡因子1（sPD-1）与颈动脉粥样硬化（CAS）斑块的相关性。 方法选择2016年1月至12月在上海市华东疗养院接受体检的69例CAS斑块患者作为CAS组,另外选择72名非CAS斑块者作为对照组,应用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象的血清sPD-1的浓度。采用t检验比较2组受检者血清sPD-1的差异,采用Pearson或Spearman法分析血清sPD-1与临床各指标［年龄、性别、吸烟、饮酒、体质量指数（BMI）、腰臀比、收缩压、舒张压、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、糖化血红蛋白（HbA1c）、脂蛋白a、空腹血糖］的相关性以及CAS组中斑块Crouse积分与各指标的相关性,采用二元Logistic回归对CAS斑块行危险因素分析;使用ROC曲线分析sPD-1预测CAS斑块形成的诊断价值。 结果CAS组sPD-1水平高于对照组［（1.26±1.01）μg/L vs （0.64±0.49）μg/L］,差异具有统计学意义（t=4.598,P<0.001）;sPD-1与BMI、腰臀比、三酰甘油、空腹血糖、HbA1c呈正相关（P<0.05）,与HDL-c、脂蛋白α呈负相关（P<0.05）;斑块Crouse积分与年龄、SBP呈正相关（P<0.05）,与TG呈负相关（P<0.05）;年龄、性别、饮酒、LDL-c、舒张压sPD-1是CAS斑块形成的危险因素;ROC曲线分析显示sPD-1对于颈动脉粥样硬化斑块形成有中等诊断价值（P<0.05）。 结论sPD-1可能在CAS斑块的形成、发展的炎症过程中发挥作用,sPD-1对预测CAS斑块形成有诊断价值。     

CD133、TROP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究初探

目的:探讨肿瘤干细胞标志物CD133?人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP-2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义?方法:用免疫组化?免疫荧光法检测CD133?TROP-2在NSCLC中的表达,激光共聚焦显微镜观察其定位和共定位?结果:①CD133?TROP-2在NSCLC组织中的阳性表达率分别为30.00% 和41.25%,均明显高于癌周正常肺组织及肺良性病变组织(P < 0.01);②细胞分化程度越低,CD133表达阳性率越高(P = 0.024);③CD133?TROP-2在有淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P < 0.05),TROP-2的阳性表达率随着TNM分期的升高而升高(P < 0.05);④CD133?TROP-2在NSCLC中的表达具有密切相关性(P < 0.001),且两种蛋白有共定位现象?结论:CD133?TROP-2的阳性表达均与NSCLC的侵袭?转移密切相关,初步证实二者在NSCLC组织中存在共定位关系,CD133联合TROP-2或许能成为 NSCLC 的肿瘤干细胞筛选标记物?     

人CD83基因转染细胞株的构建及其功能初步研究

目的构建人CD83全长编码基因转染293细胞,并探讨其对单核细胞的作用。方法 RT-PCR方法从成熟人树突状细胞(DC)扩增出CD83 cDNA,插入pIRES2-EGFP载体,脂质体转染293细胞,筛选出稳定表达目的基因细胞株;从人外周血单个核细胞(PBMC)中磁珠分选单核细胞,LPS刺激的同时加入293/CD83细胞或293/mock,24 h后检测细胞活化状态以及培养上清中TNF-α水平。结果经流式细胞术反复检测绿色荧光蛋白(GFP)报告基因及CD83表达水平,筛选获得获得一株稳定表达膜型CD83分子的基因转染细胞株293/CD83;体外实验显示293/CD83可促进LPS刺激的单核细胞活化水平和TNF-α分泌量。结论成功构建表达人CD83分子的293细胞株,293/CD83对LPS刺激的单核细胞有协同刺激作用。