天然角蛋白自身反应性B细胞亚群及功能的分析

目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚群。将脾脏和腹腔淋巴细胞体外培养后,用ELISA分析AKautoAb的滴度,用ELISPOT法分析分泌AKautoAb的B细胞数。结果:腹腔中几乎所有结合角蛋白的B细胞均为B-1a细胞,脾脏中结合角蛋白的B细胞以边缘带B细胞为主。腹腔细胞中分泌AKautoAb的细胞数显著多于脾细胞,其培养上清中AKautoAb的滴度显著高于脾细胞。结论:角蛋白反应性B细胞存在于3个成熟B细胞亚群:B-1细胞、滤泡B细胞和边缘带B细胞,其中CD5 的B-1a细胞具有活跃的分泌AKautoAb的能力。     

环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外周血Th细胞亚群免疫调节的作用

目的:探讨环磷酰胺(CY)和环孢素A(CsA)对SLE患者外周血Th细胞亚群的免疫调节作用.方法:以10例重度活动的SLE患者和6例正常对照的PBMC为研究对象,将细胞悬液分为空白组、植物血凝素(PHA)刺激组、PHA CY组、PHA CsA组、CY组和CsA组分别给药,体外细胞培养24 h后,利用三色流式细胞术检测CD4 IL-10 T细胞、CD4 IFN-γ T细胞比例和CD8 IL-10 T细胞、CD8 IFN-γ T细胞等比例,同时记录相应细胞的荧光强度.结果:CsA促进静息和活化状态下PBMC培养中表达CD4 IL-10 T细胞比例增加,同时CD4 T细胞表达IL-10荧光强度增强.CY虽然促进SLE PBMC培养中表达CD4 IL-10 T细胞比例增加,但对CD4 T细胞表达IL-10的荧光强度无明显增强.CsA抑制PBMC培养中表达CD8 IL-10 T细胞的比例,同时CD8 T细胞表达IL-10的荧光强度减弱.而CY虽然抑制SLE PBMC培养中表达CD8 IL-10 T细胞的比例,但CD8 T细胞表达IL-10的荧光强度却是减弱的.CsA对活化状态下正常对照和SLE PBMC培养中表达CD4 IFN-γ T细胞比例的抑制作用优于CY,且CY对SLE患者PBMC培养中CD4 T细胞表达IFN-γ荧光强度抑制作用也是减弱的.CsA和CY均可抑制活化状态下,正常对照PBMC和静息状态下SLE PBMC培养中表达CD8 IFN-γ T亚群细胞的比例,且CY的抑制作用优于CsA.但CY对SLE PBMC培养中CD8 T细胞表达IFN-γ荧光强度的增强作用不如CsA.结论:CsA和CY均能使CD4 T细胞受抑,CD8 T细胞上升.但CsA对T细胞活化,炎症相关细胞因子表达启动的反应更为敏感,免疫调节作用更为显著.     

河南省幼师学生心理健康状况调查分析

目的 了解河南省幼师学生的心理健康状况，为提高幼师的心理素质提供依据。方法 对来自河南南阳一师，洛阳一师，郑州幼师3所学校的580名幼师女生进行症状自评量表（SCL-90）测定。数据经t检验，q检验和卡方检验。结果 幼师在校生中有63.81%学生存在心理健康问题。11.43%学生有明显心理障碍，突出表现为强迫，人际敏感，偏执，敌对，抑郁，不同年级学生心理健康状况存在明显差异。结论 提示幼师学生存在不同程度心理健康问题。学校心理卫生和教育工作者必须予以重视，进行干预。     

用压力容积关系测量颅内顺应性的一种方法

为建立用压力-容积关系测量颅内顺应性的方法,选用12条狗安置硬膜外球囊,通过恒速注液和抽液改变球囊内液量,从而改变颅内容积和颅内压,由压力传感器持续记录脑室内压力,分别用二次抛物线、幂指数、对数关系式对颅腔的P-V实验数据进行拟合,从而求得各关系式的系数.通过对系数的分析研究颅内顺应性.结果表明(1)二次抛物线关系式中的系数满足线性关系;(2)指数关系比抛物线关系拟合得更好,压力较高时更是如此;(3)简化的对数关系式在压力较高时可以近似拟合容积压力关系;(4)在一定范围内,颅内顺应性对应变率不敏感.     

哮喘患儿IL-4近侧启动子区克隆和多态性分析

目的：对哮喘症患儿白细胞介素-4(IL-4)近侧启动子区进行克隆并分析其DNA序列的多态性。方法：对40名有明显家族及过敏史哮喘患儿和１０名正常儿童，以多聚酶链式反应（PCR）结合单链构象多态性（SSCP）扩增、筛选IL-4近侧启动子片段，进一步构建正常对照和异常条带PCR产物的重组质粒pIL-4-Jx2，并用双脱氧链终止法对重组质粒进行序列测定。结果：在对40名患儿SSCP分析中发现了7组异常条带。DNA测序结果显示有４外变异位点于已知的调控元件之内或毗邻位点，１名病人-229位C被A所替代，该变异恰好位于IL-4正性调节元件-I(PRE-I)之内；２名病人负性调节元件-Ⅱ（NRE-Ⅱ）毗邻C被T所替代，TATA框前增加1个G；1名病人STAT-6元件附近缺少了ATTTT五碱基核苷酸。结论：过敏性哮喘患儿IL-4近侧启动子区DNA序列存在多态性，这可能与IL-4基因异常表达及哮喘的发病有关。     

抗人角蛋白全IgG基因真核表达载体的构建及表达

目的：构建抗角蛋白抗体基因的真核表达载体，并在CHO(dhfr^-)细胞中表达。方法：从含抗角蛋白抗体基因的原核Fab表达载体中，扩增VH及VL基因。以回收的PCR产物为模板，用重叠PCR扩增带有前导序列的VH、VL基因。经XbaⅠ/BamHⅠ和XhoⅠ/HindⅢ酶切后，分别插入真核表达载体pWD中，构建重组载体pWDkH。经PCR和测序鉴定正确后，用lipofectAMINE2000转染CHO(dhfr^-)细胞。取培养上清检测抗人角蛋白全IgG的表达。结果：构建了抗人角蛋白基因的真核表达载体pWDkH，并在CHO(dhfr^-)细胞中表达：结论：在CHO(dhfr^-)细胞中成功地表达了具有抗原结合活性的抗人角蛋白IgG，为其临床应用奠定了基础。     

人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究

目的　研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法　以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果　 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论　人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。     

健骨益肾汤促进个性化3D打印脊柱CLIF术后恢复的临床研究

目的：研究健骨益肾汤对个性化3D打印脊柱微创猫眼侧方腰椎融合术（CLIF）术后恢复的影响。方法：选取2019年1月至2020年1月在河南省洛阳正骨医院接受CLIF术治疗的50例腰椎退行性侧弯患者,将其中单纯手术治疗的24例患者纳入对照组,将其中于CLIF术后应用健骨益肾汤治疗的26例患者纳入观察组。比较两组患者临床指标、临床症状评分,术前、术后2周、术后1个月及预后（术后1年）观察两组患者的腰椎Oswestry功能障碍指数问卷表（ODI）评分的变化情况,术后1年的矫正效果。结果：观察组患者术后引流量少于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;观察组患者术后下肢麻木、腰部疼痛、步行障碍、感觉障碍评分均低于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;术后2周、术后1个月,观察组患者ODI评分均低于对照组,差异具有统计学意义（P <0.05）;两组患者预后侧凸Cobb角度、骨盆倾斜角度、腰椎前凸角度、矢状面轴向距离、冠状面平衡均低于术前,差异具有统计学意义（P <0.05）,两组患者术前、预后各项指标组间比较,差异无统计学意义（P> 0.05）。结论：健...     

动脉灌注化学药物治疗晚期直肠癌11例临床观察

直肠癌的发病率有逐年上升趋势 ,就诊时以Ｂ、Ｃ期的直肠癌患者为主。我院自 1999年 1月～ 2 0 0 1年 4月 ,采用肠系膜下动脉灌注化学药物治疗晚期直肠癌替代全身化疗 ,取得了较好疗效 ,现报告如下。1　临床资料1.1　本组 11中男 4例女 7例 ,年龄 5 5～ 78岁 ,平均 64岁 ,临床表现有大便带血 10例 ,腹痛、腹胀 8例 ,便秘 9例 ,全组病例均有不同程度的贫血 ,ＣＴ扫描和术中检查 ,全组伴有盆腔淋巴结转移 ,6例肝脏转移 ,转移癌 3ｃｍ× 2ｃｍ× 2ｃｍ～ 6ｃｍ× 6.5ｃｍ× 8ｃｍ。肿瘤按Ｄｕｋｅｓ分期 ,11例均为Ｃ期 ,病理组织学类型 :乳头状…     

支气管哮喘患者白细胞介素-4近侧启动子区克隆和序列分析

目的 探讨哮喘患者白细胞介素-4（IL-4）过度表达的可能调控机制。方法 选取4例有明显家族史的过敏性哮喘患儿和1例正常儿童,采用聚合酶链反应（PCR）扩增IL-4近侧启动子片段,PCR产物经XbaI、HindⅢ限制性内切酶进行双酶切后,回收酶切片段,再与经过相同双酶切的载体Jx2相连接,制备重组质粒,然后经转化、筛选、酶切鉴定得到重组质粒pIL-4-Jx2,最后采用双脱氧终止法对重组质粒进行序列测定。结果 （1）正常儿童IL-4近侧启动子序列与基因库序列相同。（2）1例患儿-229位C被A所替代。该变异恰好位于正性调节元件-I之内,结论 过敏性哮喘患者IL-4近侧启动子区DNA片段被成功克隆,并发现1例患者IL-4调控元件内一未曾报道过的变异位点,这有助于对哮喘者IL-4基因异常表达调控机制的研究。