氟中毒小鼠肝纤维化形态学观察

目的探讨氟中毒对肝纤维化的影响及其意义,并具体观察氟中毒对肝脏的形态学变化,了解其作用机制。方法采用C57小鼠氟化钠染毒模型,分为A、B、C 3个组,其中A组为实验组,根据饮水中含氟浓度分空白组(0 mg/L)、低剂量组(25 mg/L)、中剂量组(50 mg/L)、高剂量组(100 mg/L),普通饲料喂养6个月;B、C两组为干预组,时间为6个月,B组,前阶段喂养正常饲料,后38 d将亚硒酸钠加入饲料中,浓度为3 mg/kg;C组,前十周喂养正常饲料,第十一周开始喂养高脂、高糖饲料,饮水不变,喂养3 w高脂、高糖饲料。6个月后,取小鼠肝脏,分别使用HE染色和Masson胶原纤维特殊染色病理组织学检查,观察肝纤维化程度。结果 A、B和C组小鼠随着饮水含氟浓度的增加,其HE染色切片均显示肝细胞水肿加重;在相同含氟浓度的条件下A、B和C组小鼠中细胞水肿表现程度为:C组比A组严重,A组比B组严重;而Masson染色切片显示,A、B和C组实验小鼠随饮水含氟浓度的增加,汇管区和血管内皮的纤维结缔组织增生明显,肝脂肪细胞数量也逐渐增加;在相同含氟浓度的A、B和C组小鼠中:C组的纤维结缔组织增生和肝脂肪细胞数量增加最明显,其次A组比B组明显。结论氟中毒可以诱导肝脏发生纤维化,其中汇管区最为明显,其他部位也可见到纤维结缔组织增生,其中血管内皮纤维结缔组织增生也较为明显,而且随着饮水含氟浓度升高,其诱导肝脏发生纤维化的能力加大。     

细粒棘球蚴囊液对肝细胞表面TLR4表达的调节

Objective To explore the signal transduction pathway of cyst fluid of Echinococcus granalosus in anti-parasite mechanisms through investigating the effect of cyst fluid on the expression of Toll-like receptor(TLR) in cells. Methods Changes of TLR4 and TGF-β1 expression of 7404 liver cells were detected by quantitative PCR. Results After treatment with increasing concentration cyst fluid the expres-sion of TLR4 was reduced. TGF-β1 expression of liver cells increased with the dose. TLR2 expressions in each group were very low. Conclusion Cyst fluid can increase the expression of TLR4, suggesting that the TLR4 signal transduction pathway involve anti-cyst fluid of Echinococcus granulosus. High concentrations of cyst fluid contribute to TGF-β1 expression which plays a role in immune evasion.     

氟影响成骨细胞转化生长因子超家族成员表达的传导通路

背景:氟中毒骨转换过程中转化生长因子β家族成员参与了骨转换过程,但是机制不清楚.目的:观察氟对体外培养成骨细胞中转化生长因子β1,骨形态发生蛋白2 和SMAD4 信号转导通路的影响.方法:体外培养人成骨细胞,按染氟(NaF)剂量将成骨细胞分为0(对照),0.625,1.25,2.5,5,10,20,40,80,160 mg/L组进行实验观察.结果与结论:氟对成骨细胞增殖影响与转化生长因子B1,骨形态发生蛋白2 表达有密切的关系.当氟质量浓度为0.625 mg/L时,氟化物产生的效应主要通过转化生长因子B1,骨形态发生蛋白2,SMAD4 信号转导通路调节.当低于或超过此剂量时,氟化物产生的效应与信号转导通路关系不大,可能存在转化生长因子β1 及骨形态发生蛋白2 其他传导通路的调节.     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

香烟烟雾提取物对A549的活性及TNF-α的影响

目的：观察香烟烟雾提取物（CSE）对肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）的损伤及肿瘤坏死因子（TNF-α）的影响。方法：体外培养A549，加入不同浓度的CSE，应用倒置显微镜、MTT法和ELISA法观察A549细胞形态、活性和TNF-α水平的变化。结果：与对照组相比，A549细胞的镜下形态和结构随CSE浓度和时间发生明显改变；MTT示各组间细胞活性差异具有统计学意义（P〈0．01）；各CSE组TNF-α水平的变化具有时间依赖性，其中5％和10％CSE组TNF-α水平上升，而20％CSE组下降（P均〈0．01）。结论：CSE可导致A549形态改变和活性下降，其损伤可导致TNF-α水平变化。     

泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究

目的 构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒，获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白，为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。方法 用DNAman软件设计引物，分别在引物5’端和3’端添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点，以pMD18-T／Em18原核表达质粒为模板，PCR扩增Em18基因片断，经酶切，克隆人原核表达载体pET-41a( )，构建原核表达质粒pET41a-Em18；转化大肠埃希菌BL21(DE3)，酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经IPTG诱导表达rEm18-GST重组蛋白和GST重组蛋白，用谷光甘肽-Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化，通过SDS-PAGE和Western blot试验分析鉴定。结果 测序表明构建的pET41a-Em18原核表达质粒均为正确连接，插入Em18基因片断为486bp。SDS-PAGE检测表明Em18基因以rEm18-GST重组蛋白的方式得到成功表达，在相对分子质量单位50ku处有表达条带；Westernblot分析显示，rEm18-GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别，具有良好的抗原性。结论 成功构建了pET41a-Em18原核表达质粒，获得的rEm18-GST重组蛋白具有生物活性和抗原性，有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。     

人类8型疱疹病毒开放读码框73C基因原核

目的构建人类8型疱疹病毒（HHV-8）基因开放读码框（ORF）73c重组原核表达质粒并诱导表达，获得HHV-8潜伏态相关核抗原重组蛋白，并对其免疫活性进行初步鉴定。方法软件设计引物，分别在引物两端添加特异的酶切位点，以pGEM-Teasy／ORF73质粒为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增ORF73C基因序列，克隆人原核表达载体pET-28a（＋），构建原核表达质粒pET28a-ORF73c；转化E.coli DH5α，经酶切、测序鉴定其插入序列的正确性，转入E.coli BL21（DE3），并诱导表达，以多聚组氨酸亲合层析柱纯化，凝胶蛋白电泳、Western印迹方法行表达蛋白的分析和抗原特异性免疫鉴定。结果测序结果表明构建的pET28a-ORF73C原核表达质粒连接正确，插入的ORF73c基因片段为453bp。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）表明ORF73c基因成功表达，在相对分子质量20000处有表达条带；Western印迹分析显示重组蛋白能被卡波济肉瘤患者阳性血清识别，具有良好的抗原性。结论成功构建了pET28a-ORF73C原核表达质粒，获得的纯化HHV-8潜伏态相关核抗原蛋白与卡波济肉瘤患者血清具有特异性识别，显示其作为检测抗原的可能，但其敏感性和特异性则有待进一步的验证。     

泡球蚴组织体外培养的生长发育观察

目的 观察体外培养泡球蚴的生长发育特性。 方法 在肝癌细胞系条件下体外培养泡球蚴，用光学显微镜定期观察其数量、大小及形态变化，并绘制囊泡生长曲线。用电子显微镜观察囊泡形态结构。 结果 体外培养后泡球蚴增多，至22 d其数量相当于开始培养第3～4天的6～7倍；囊泡具有出芽生殖能力。起初均为小囊泡，随时间增加，囊泡的直径也增加，在第22天时约30%为大的囊泡，70%为小的囊泡。发现介于原头蚴与囊泡之间的形态。 结论 肝癌细胞系体外培养的泡球蚴，生长发育较好且数量增加，可获得纯度较高的分泌或排泄抗原，该方法可为泡球蚴生物学及相关实验研究提供充分实验材料。     

新疆哈萨克族食管癌组织中乳头瘤病毒16型E6E7基因的研究

为了解HPV16感染后E6E7基因变化在哈萨克族食管癌发病中的作用 ,以及HPV16E6E7基因与食管癌病理组织分级的关系 ,采用聚合酶链 (PCR)技术 ,检测 82例食管癌及癌旁正常食管粘膜组织中HPV 16E6E7基因差别。食管癌、癌旁正常粘膜组HPV16E6E7基因的检出率分别为 3 4. 15 % ( 14 /4 1)和 19. 5 1% ( 8/4 1) ,63 . 41% ( 2 6/4 1)和48. 78% ( 2 0 /4 1) ,差别均无显著性 (P >0 . 0 5 )。然而 ,在食管癌组织的高分化组、中低分化组中HPV16E6E7的检出率分别为 7. 69% ( 1/13 )和 46. 43 % ( 13 /2 8) ,3 8. 46% ( 5 /13 )和 75 % ( 2 1/2 8) ,差别均有统计学意义 (P <0 .0 5 )。提示HPV16E6E7基因与哈萨克族食管癌的发生及癌组织分级密切相关。     

过量氟引起成骨细胞内质网应激信号通路的基因差异表达

目的：观察人成骨细胞在过量氟作用下未折叠蛋白反应（UPR）信号通路的差异基因表达,探索在氟中毒条件下成骨细胞内质网应激的作用。方法体外培养人成骨细胞染氟模型,用不同浓度的氟干预24 h后M T S法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,用UPR信号通路PCR Array芯片检测通路中相关基因表达的情况,并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛋白表达。结果在氟化钠浓度为0、5、10、20、40、80 mg/L 时,细胞存活率分别为（100．6785±2．8303）％、（105．3934±2．5384）％、（106．1257±2．0483）％、（77．9773±2．5443）％（与对照组比较 P＜0．05）、（30．2377±0．6327）％（与对照组比较 P＜0．05）。流式细胞仪检测,凋亡率分别为5mg/L组4．8％,10mg/L组13．8％,20mg/L组37．0％,40mg/L组58．9％,80 mg/L组63．2％（P＜0．05）。PCR芯片检测发现1个基因表达下调,14个基因表达上调。Western blot结果显示, BIP、ATF4、CHOP、IRE1均呈现出不同程度的随氟剂量增加蛋白表达逐渐上调。XBP1在NaF 5～20 mg/L表达逐渐增强,在40与80 mg/L时表达减弱。结论氟化钠可以通过PERK和IRE1途径引起成骨细胞内质网应激,并且可以引起成骨细胞凋亡。