重庆麻鸭乙型肝炎病毒基因组克隆及序列分析

目的 克隆重庆麻鸭乙型肝炎病毒(DHBV)全基因组并进行序列分析。方法 从自然感染DHBV的重庆麻鸭血清中提取DHBV基因组DNA,以聚台酶链反应扩增DHBV基因组DNA,克隆人PGEM—T载体,鉴定后行测序分析。结果 序列分析表明,重庆麻鸭HBV基因组全长3024 bp,由P、S/PreS及PreC/C基因组成。该DHBV株与GenBank中公布的HPUS5CG(M32990)同源性最高(94.9％),与DHBVCG(X74623)同源性最低(89.8％),其各个开放读码框起止位点与HPUGA相同,DNA和蛋白质序列中含有与基因调控和蛋白质功能相关的保守区。结论 成功克隆重庆麻鸭HBV全基因组,序列分析为进一步研究提供了有益的信息。     

HBV DNA转染原代鸭肝细胞初步观察

目的：通过观测人HBV DNA在非哺乳动物－－鸭肝细胞中的复制和表达水平，探讨人HBV感染与复制的跨种属特异性，为建立人HBV DNA转染跨种属肝细胞模型奠定基础。方法：获取线性HBV DNA并电转染原代鸭肝细胞，电转后48h采用IMX系统检测鸭肝细胞中HBsAg表达水平，用Southern blot-ting和dot blotting检测HBV DNA复制情况。以单纯电击肝细胞为对照。结果：转染组原代鸭肝细胞裂解液中HBsAg为9．10（P／N值≥2．1为阳性），HBeAg为阴性；上清液中二者均为阴性。转染组原代鸭肝细胞裂解液dot blotting呈强阳性；转染组肝细胞总DNA Southern blotting显示约4.0kb以下分子涂抹带，为游离复制型HBV DNA，包括rcDNA,cccDNA与ssDNA等复制中间体，未见整合型HBV DNA－－高分子区（4.0-24.0kb)涂抹带，对照上述指标均为阴性。结论：人HBV DNA能在原代鸭肝细胞中复制和表达，可能为肝细胞内环境依赖性，无严格种属特异性限制。     

原代鸭肝细胞的原位灌流分离法

目的：探索优化的原代鸭肝细胞分离方法，为鸭肝细胞在体外研究中的应用奠定基础。方法：分别采用胶原酶（Ⅰ型与Ⅳ型）经门静脉或胆总管原位灌注分离鸭肝细胞，观测肝细胞产量、存活率及其形态。结果：1．经门静脉原位灌流分离鸭肝细胞效果明显优于经胆总管灌流法；2．右心室为灌流液流出道分离鸭肝细胞效果明显优于经下腔静脉流出道分离法；3．Ⅰ型胶原酶与Ⅳ型胶原酶灌流分离鸭肝细胞效果相当。结论：采用Ⅰ型或Ⅳ型胶原酶经门静脉 －右心室原位灌流分离鸭肝细胞为一较好的方法，有利于鸭肝细胞为模型的体外研究工作的开展。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的研究进展

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的非甲-非乙型肝炎,是慢性肝病的主要原因之一.HCV编码至少10种成熟蛋白,而非结构蛋白5A(NS5A)是其重要蛋白之一.磷酸化的NS5A与病毒的复制密切相关,参与病毒的产生和释放,并且能够通过病毒和宿主细胞的相互作用,干扰细胞内重要信号通路,影响细胞周期和免疫系统,最终促使HCV相关慢性肝病的发生与发展.本文就NS5A的生物学功能及其作用机制的研究进展作一综述.     

鸭乙型肝炎病毒体液免疫血清学指标的系统建立与应用

目的：建立简便,特异的鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及免疫血清学检测系统。方法：制备、纯化检测所需同的抗DHVB前S区单克隆抗体腹水,DHBsAg和rDHBcAg , 对随机筛选的80份感染血清及实验感染1日龄重庆麻鸭系列血清分别进行DHBsAg 和抗－DHBc,抗－DHBs检测。结果：PCR方法检测出阳性66份,阴性14例,选用PCR阳性的66份标本,经HDBsAg ELISA检测出58份阳性,斑点杂交检出阳性份数为62份。与DHBVRCR相比较,灵敏度分别为87．9％和93．9％,而8只实验感染鸭仅2只在感染后第3周血清抗－DHBc阳性,抗体效价为1：10,至第4周一已为阴性,抗－DHBs则在所有标本均为阴性,结论：DHBV感染及免疫血清学酶联免疫方法的建立,为进一步研究DHBV感染后腹制规律及体风免疫应答状况奠定了基础。     

DHBV感染鸭特异免疫应答比较

目的 研究嗜肝病毒感染病毒清除向慢性化转变的免疫机理。方法 通过接种不同龄鸭、不同感染方案建立DHBV急性、慢性感染组及免疫组模型,并检测各组病毒复制及特异体液和细胞介导免疫反应。结果 成年鸭接种DHBV导致一过性病毒血症的形成,感染后抗－DHBs和抗-DHBc的水平比慢性感染组高（P＜0．05）,而免疫组抗－DHBs、抗－DHBc的水平又比急感染组高（P＜0．01）。特异细胞介导免疫反应（CMI）的分析提示急性感染组感染后10d外周血单个核细胞（PBMC）对特异抗原的体外增殖反应强于慢性感染组,但在感染5周内快速下降。而免疫组CMI与急性感染组比差异无显著意义。结论 感染宿主免疫应答特别是特异免疫反应是决定感染转归的重要因素。     

泛昔洛韦治疗乙型肝炎相关疾病研究进展

本文就近两年泛昔洛韦用于治疗慢性乙型肝炎、肝移植术后预防乙型肝炎病毒（HBV）再感染的相关进展、长期治疗后出现的耐药突变以及其他核苷类似物的交叉耐药等问题作了综述。     

糖尿病血液流变性改变与微血管病变关系的研究进展

糖尿病的血液流变性改变主要表现为高粘滞综合征（Blood Hyperviscosity Syndrome，BHS），BHS指由一种或多种血液粘滞因素升高而引起的血液流变性异常，主要变化表现在：血细胞和血浆两个方面。血细胞的变化为红细胞比积增加、聚集性增强、变形能力降低；血小板粘附性增高、聚集性增强。血浆的变化为纤维蛋白原水平升高和高脂血症。     

生物信息学预测小鼠转铁蛋白受体B细胞表位

目的：预测小鼠转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）的B细胞表位,为构建以TfR抗体为脑转运载体的疫苗提供基础。方法：以小鼠转铁蛋白受体基因序列为基础,按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,按Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测其表面可能性以及按Jameson-Wolf方法预测其抗原指数。结果：Chou-Fasman和Gamier-Robson方法发现90 - 110, 120 - 145, 160 - 180, 240 - 250, 265 - 275, 290 - 304, 336 - 350, 375 - 383, 426 - 435, 504 - 517, 590 - 602, 613 - 630, 710 - 718这些区域可能为α螺旋的中心区域。用Kyte-Doolittle、 Emini、 Jameson-Wolf方法分别对小鼠TfR的B细胞表位进行预测,结果显示其共有区域为30 - 50, 100 - 115, 145 - 157, 310 - 320, 355 - 360, 440 - 445, 510 - 535, 655 - 660, 690 - 695, 705 - 710。根据抗原表位设计原则筛选出5段符合要求的抗原表位氨基酸序列：DGDNSH, AETEETDKS,NTYTP,MDKNKF,KHPVDGKSLYRDSNWISKV,它们可能为小鼠转铁蛋白受体的B细胞优势表位区域。结论：该结果有助于确定小鼠转铁蛋白受体的B细胞表位以及构建药物-载体复合物,发挥其脑药物转运载体的功能。     

宫——腹腔镜联合诊治难治性多囊卵巢综合征合并不孕

目的 探讨宫-腹腔镜联合诊治难治性多囊卵巢综合征(PCOS)合并不孕的必要性和疗效.方法 采用宫-腹腔镜联合诊治54例符合难治性PCOS的不孕患者,术中先行宫腔镜诊治,以病理结果 为金标准.并在腹腔镜下行双侧卵巢打孔术(LOD),观察术后月经,排卵、妊娠、流产情况,比较手术前后血清FSH(卵泡刺激素)、LH(黄体生成素)和T(睾酮)、E2(雌二醇)水平以及卵巢体积、窦卵泡数的变化.结果 54例患者中子宫内膜增生过长3例,内膜息肉2例,小黏膜下肌瘤1例,内膜不典型增生1例,宫腔粘连2例,子宫不全纵隔1例.行宫腔镜下输卵管插管疏通术6例.术后血清LH,LH/FSH和T以及卵巢体积、窦卵泡数均明显下降,差异有显著性(P＜0.01).术后月经明显改善,排卵率90.74%(49/54),妊娠率62.9%(34/54),流产率11.76%(4/34).结论宫-腹腔镜联合可同时诊断和治疗与不孕相关的多重病变,全面评估自然受孕的机会,指导选择个体化的辅助受孕策略;LOD可恢复难治性PCOS的卵巢生理功能,提高自然排卵率和对克罗米芬的敏感性,从而提高妊娠率和降低流产率.宫-腹腔镜联合是诊治难治性PCOS合并不孕的微创有效手段.