从肺论治神经性皮炎

神经性皮炎又称单纯性苔藓,是以阵发性瘙痒和皮肤苔藓化为主症的慢性皮肤炎症。目前治疗效果不理想,且易复发。中医认为本病多因感受风热之邪,久病血虚风燥,每因肝郁化火加重或复发,治疗个体差异较大。余近年在“肺主气,外合皮毛”的理论指导下,认为本病与肺气的宣发功能?..     

细粒棘球蚴（CE）重组抗原B（rAgB）的制备及其免疫印迹检测的初步探讨

目的：包虫病在我区发病率相当高，是牧区常见的一种人畜共患寄生虫病。目前国内，用血清学方法诊断细粒棘球蚴病所用抗原B均为自然抗原，自然抗原必需从患病动物脏器的囊液内提取，其不仅获得途径困难、数量有限，而且容易污染环境并且所获抗原成分不纯。因此，人工合成rAgB并应用于临床检测具有深远意义。方法：（1）构建重组体：用基因工程的方法构建融合质粒pMalAgB(rAgB.MBP），pMAL-c2X作为表达目的基因的载体，rAgB.MBP为重组抗原B及麦芽连接蛋白的基因，rAgB基因序列为有意义片段，MBP基因是淀粉柱亲和纯化所必需的；再转染宿主菌JM109，得到重组体JM109－pMalAgB(rAgB.MBP)；（2）目的基因的诱导表达：JM109－pMalAgB(rAgB.MBP）接种于含氨苄青霉素和葡萄糖的LB培养基中37℃气浴振荡器内过夜培养，次日以4％接种量转入含氨苄青霉素和葡萄糖的LB培养基中37℃气浴振荡器内培养至OD600为0.5－0.7时，加IPTG诱导（终浓度为0.3mM）3h，得到融合蛋白；（3）采用亲合层析法纯化抗原，直链淀粉树脂作为亲和柱子填充料；（4）免疫印迹Westren-Blot法检测血清。结果：（1）经过诱导表达、纯化，获得了人工合成的具有生活活性的蛋白质－rAgB；（2）rAgB应用免疫印迹法（Western-Blot）检测血清，其敏感性为91.6％（44／48）；特异性为93.8％（30／32），其中10例泡球蚴（AE）病人及10例肿瘤病人血清均无交叉反应。结论：用基因工程的方法构建重组体JM109－pMalAgB（rAgB.MBP），经过诱导表达、纯化，获得的rAgB具有较好的生物活性，抗原成分较纯，并且可在实验室按需合成。为诊断细粒棘球蚴病提供了一种新的人工合成优质抗原的途径；同时，rAgB用于Western-Bolt法检测包虫病患者有较高的敏感性和特异性，可用于临床诊断指标之一。     

nNOS对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 应用神经型一氧化氮合酶nNOS基因缺失小鼠,探讨nNOS对心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 野生型C57小鼠和nNOS基因缺失小鼠分别经过冠状动脉左前降支缺血30 min再灌注3 h,观察TUNEL染色和caspase-8,-9,-3的活性变化,并用Westem blot法观察磷酸化p38激酶和胞外信号调节激酶(ERK)的表达情况.结果 心肌缺血30 min再灌注3 h后,与假手术组相比,TUNEL阳性细胞数增加,caspase-8,-9,-3活性增强,差异有统计学意义(P＜0.05).野生组与基因缺失组相比,凋亡细胞数增多,caspase活性增强,差异具有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示野生型小鼠缺血再灌注损伤后磷酸化p38和ERK激酶活性增强,而基因缺失组p38激酶活性降低,ERK活性不受影响.结论 nNOS具有加重心肌缺血再灌注损伤的作用,其作用可能为p38介导.     

cDNA微阵列分析BALB/c小鼠肝脑组织中差异性表达基因的研究

目的分析BALB/c小鼠肝、脑组织差异基因表达谱。方法TRIZOL法提取总RNA,反转录cDNA,采用36K小鼠全基因组寡核苷酸芯片,运用荧光双交换方法分析BALB/c小鼠肝脑组织中mRNA转录本含量。经芯片扫描、图像采集后,运用MAS2.0软件对差异基因进行基因功能分析(GO)和KEGG通路分类。结果基因芯片结果表明与脑组织相比,在肝组织中共发现差异表达基因6 132个,其中包括上调基因2 974个,下调基因3 158个,GO分析上述差异表达基因主要涉及代谢、细胞信号转导、DNA结合与转录、细胞周期、细胞骨架、细胞粘附和发育等。KEGG信号通路分析显示:上调差异基因中71个通路的改变差异具有统计学意义(P0.05),下调差异基因中有80个通路的改变差异具有统计学意义(P0.05)。结论小鼠肝与脑组织基因表达谱的差异涉及多个基因表达调控途径,研究这些基因分子功能有助于深入了解各组织独特的功能表达系统。     

RNA干扰PKM2对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响

目的将靶向PKM2的siRNA转染食管癌细胞株Eca109,观察转染后细胞内PKM2基因的表达变化及其对Eca109细胞增殖和周期的影响。方法将人工合成的针对PKM2基因的siRNA片段通过Lipofectamine 2000转染食管癌细胞株Eca109;实验分为实验组、空白对照组和阴性对照组,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantita-tive PCR,qRT-PCR)和Western blot法检测各组细胞中PKM2的mRNA和蛋白质的表达量,并用MTT法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果与空白对照、阴性对照比较,实验组细胞中PKM2 mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),Eca109细胞转染PKM2 siRNA后,增殖能力减弱,细胞周期被阻滞在G0/G1期。结论 PKM2对Eca109细胞的生长起促进作用。     

实时荧光定量PCR检测多房棘球蚴感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因方法的建立

目的 建立多房棘球蚴(泡球蚴)感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因(Serpina3g)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的检测方法及与常规RT-PCR检测方法的比较.方法 肉眼直视下肝脏穿刺注射100 μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,3个月后将小鼠处死,Trizol法提取肝脏总RNA,反转录获得cDNA.依据Serpina3g的编码基因(NM_009251)保守序列,通过Primer 5软件设计定量引物,以β-actin作为内参.以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品(1×10~2～1×10~6 pg),利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因,然后根据cDNA浓度与循环值(Ct)的线性关系,绘制标准曲线,确定RT-qPCR检测的最佳条件和重复性;并将RT-qPCR结果与常规RT-PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较.结果 筛选出Serpina3g基因定量引物,最佳退火温度为56.4℃;RT-qPCR无非特异性扩增,标准品及样品熔解温度均在80.5℃,熔解峰单一;标准曲线斜率为-2.833(效率),相关系数r=0.996;5个不同梯度的样本(1×10~2-1×10~6pg)重复检测5次均为阳性,变异<5%;mRNA检出限为1×10~2 pg,总RNA在1×10~2～1×10~6 pg内均可以进行扩增;常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10~6 pg.结论 成功建立了小鼠源Serpina3g的PT-qPCR检测方法,在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT-PCR.     

细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性

目的 利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白（rAgB）,并分析其免疫反应性。 方法 将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a（+）中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱（GST-sepharose 4B）纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹（Western blotting）分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。 结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量（Mr）为40 800,纯化蛋白含量为78.4%。Western blotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%（95/120）和51.1%（23/45）,但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2％（95/120）和81.0%（98/121）,均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103）和特异性（76.9%,30/39）。 结论 重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。     

新疆地区原发性肝癌肿瘤同时性转移基因差异表达

目的：研究新疆地区原发性肝癌肿瘤同时性转移原发灶和转移灶的基因差异表达。方法：选取新疆医科大学第一附属医院2018年1月 ~ 2021年5月收治的首次出现同时性转移的原发性肝癌患者21例，采用下一代测序技术（NGS）研究其原发灶和转移灶中突变基因的表达，以及所涉及的通路和药物作用靶点，分析其突变基因与临床特征的关系；并用Kaplan-Meier单因素生存分析统计患者基因突变与临床特征及总生存期间的相关性。结果：原发性肝癌标本中原发灶和转移灶共同显示出突变率最高的10种基因：MUC16（43%）、TTN（36%）、ZAN（29%）、MYO18B（29%）、DNAH7（29%）、DNAH10（29%）、DMLX2（29%）、DCC（29%）、CSMD1（29%）、CDLSR2（29%），转移灶和原发灶突变基因差异无统计学意义（P ＞ 0.05），且基因变异的分类主要为错义突变，以单核苷酸多态性（SNP）最多见。在碱基突变的统计中，C ＞ A替换发生率最高，C ＞ T替换的发生频率次之。原发性肝癌患者TTN基因突变与性别、族别、分化程度有关（P ＜ 0.05）；MYO18B基因突变与族别有关（P ＜ 0.05）；TTN基因突变是原发性肝癌患者预后的独立预测基因；共筛选出10个原发灶和转移灶中突变基因的共同药物作用靶点，分别为可成药基因组、丝氨酸/苏氨酸激酶、离子通道、肿瘤抑制因子、酪氨酸激酶、DNA修复因子、复杂转录因子、转录因子结合位点、肿瘤治疗靶点基因组、ABC转运体。结论：原发性肝癌同时性转移异质性不明显。本研究筛选出原发性肝癌少见基因突变、与临床预后相关的基因突变以及药物作用靶点和基因突变所涉及的通路，为原发性肝癌的诊断、潜在的治疗靶点及相关的分子机制研究提供参考。     

卵巢原发性鳞状细胞癌1例

卵巢原发性鳞状细胞癌１例首都医科大学附属北京友谊医院（１０００５０）妇产科贺昕红病理科卢晓梅患者７３岁，住院号３４７７７２。绝经２３年，２个月前始阴道流水，偶呈粉红色，无异味，伴下腹坠感。１９９３年２月１７日在当地医院检查发现盆腔肿物，于３月１５日入...     

新疆不同民族食管癌血浆代谢组学差异分析

Objective To investigate the metabonomic variation between patients with esophageal cancer (EC) and healthy controls, and to analyze the variation between patients with EC. Methods 1H-MR and orthogonal partial least-squares discriminant analysis (OPLS-DA) was performed on 108 plasma specimens from EC patients and 50 health controls, and the metabonomic variation between patients with EC and healthy controls analyzed. Results OPLS-DA analysis might correctly separate all plasma specimens from health controls and patients with EC ,leucine(0. 0043±0. 0006,0. 0040±0. 0006) ,alanine(0. 0039±0. 0007,0. 0033±0. 0006), isoleucine (0. 0067±0. 0010,0. 0063±0. 0009), valine (0. 0037±0. 0005,0. 0035±0. 0006) ,glycopretein(0. 0123±0. 0043,0. 0102±0. 0022), lactate(0. 0342±0. 0113,0. 0258±0. 0085), acetone (0. 0027±0. 0023,0. 0017±0. 0008), acetate (0. 0007±0. 0001,0. 0006±0. 0001),choline(0.0035±0.0006, 0.0029±0.0007), isobutyrate (0.0020±0.0004, 0.0018±0.0003),unsaturated lipid (0. 0072±0. 0013,0. 0059 + 0. 0018), VLDL (0. 1209±0. 0589,0. 0879±0. 0269), LDL (0. 0885±0. 0328,0. 0785±0. 0288), 1-methylhistidine(O. 0005±0. 0001,0. 0004±0. 0005)decreased in EC patient' s plasma with statistical significance (r total>0. 27, P<0. 05), dimethylamine (0. 0004±0. 0001,0. 0005±0. 0001), α-glucose (0. 0079±0. 0013,0. 0081±0. 0016), β-glucose (0. O139±0. 0024,0. 0142±0. 0029) ,citric acid (0. 0044±0. 0008,0. 0106±0. 0058) increase in the EC patient's plasma (r total<-0. 27 ,P<0. 05). There were clear variation between Han and Kazak patients,alanine(0. 0031±0. 0005,0. 0029±0. 0004), glutamine (0. 0010±0. 0001,0. 0009±0. 0001), tyrosine (0. 0009±0. 0001,0. 0008±0. 0001), 1-methylhistidine (0. 0005±O. 0001,0. 0004±0. 0001) increased in the Han patients (r>0. 35, P>0. 05), carnitine (0. 0028±0. 0006) was higher in Kazak patients than in Han patients (0. 0025±0. 0004), which had statistical siginificance (r=-0. 40, P<0. 05). Unsaturated lipid (0. 0059±0. 0018,0. 0047±0. 0011), isoleucine (0. 0062±0. 0011,0.13058±0. 0007), alanine (0.0032±0. 0007, 0. 0028±0. 0004) ,glycoprotein (0. 0096±0. 0019,0. 0086±0. 0011) ,glutamine (0. 0011±0. 0001,0. 01309±0. 0001) ,tyrosine(0. 0009±0. 0001, 0. 0008±0. 0001), 1-methylhistidine (0. 0005±0. 0001, 0. 0004±0. 0001)were increased in Uygnr patients as compared with Kazak patients, having statistical significance (r>0. 33 ,P<0. 05), carnifine (0. 0027±0. 0005) was higher in Kazak patients than in Uygur patients (0.0025±0.0004)(r=-0.36,P<0.05). Conclusion The results indicate that1H-MR spectra of plasma analyzed by OPLS-DA statistical methods might completely separate the EC patients from health controls. The metabonomic approach should be helpful in screening of EC patients.