应用SELDI-TOF-MS技术结合WCX纳米磁珠筛选原发性胆囊癌患者血清蛋白指纹图谱的变化

目的:应用蛋白质组学技术分析筛选胆囊癌患者外周血清中生物标记蛋白,初步探讨其对胆囊癌早期诊断的意义。方法:应用表面加强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,对45例胆囊癌患者及50例对照者(健康体检者)外周血清蛋白质进行检测,应用蛋白质芯片软件对蛋白质谱进行分析,建立诊断模型,并进行模型验证。结果:胆囊癌患者外周血清蛋白质表达谱与对照组相比,(5913Da,6181Da,13752Da)3个蛋白质荷比峰(M/Z)具有显著性差异,结果表明,该方法的灵敏度为86.7%,特异性为93.3%,这3个蛋白质峰数据建立蛋白质谱模型,用样本进行盲法测试。其敏感性为80%,特异性为90%。结论:应用SELDI-TOF-MS技术可有效筛选胆囊癌患者血清中特异性蛋白标记物,为胆囊癌患者的诊断提供了一条可靠的高灵敏度及特异性的方法。     

应用SELDI-TOF-MS技术分析少精子症患者精浆中的差异表达蛋白

目的:用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析少精子症患者和正常对照组精浆蛋白质指纹图谱的变化,建立能鉴别少精子症患者和正常对照组精浆标志物的诊断模型。方法:收集33例少精子症和31例正常对照的精浆,用CM10(弱阳离子交换芯片)蛋白质芯片和SELDI-TOF-MS检测蛋白质指纹图谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理,建立区分少精子症患者与正常对照组精浆中蛋白质指纹图谱差异表达模型,并用此模型对33例少精子症患者及31例正常对照组进行盲法交叉验证。结果:在相对分子质量2000~20000范围内,共检测到185种有差异的蛋白峰,其中23种有统计学意义(P<0.05)。建立了由3种差异蛋白质组成的少精子症诊断模型,其敏感性为90.9%(30/33),特异性为93.5%(29/31),双盲法验证结果其敏感性为87.9%(29/33),特异性为90.3%(28/31)。结论:用SELDI-TOF-MS技术初步建立的区分少精子症与正常对照精浆蛋白质差异表达模型可以区别少精子症和正常对照。     

应用SELDI技术检测反义寡核苷酸作用前后胃癌细胞培养液中的差异蛋白

目的：利用针对人端粒酶RNA（hTR）的反义寡核苷酸（ASODN）和正义寡核苷酸（NODN）作用于人胃癌细胞SGC7901,比较ASODN和NODN作用后细胞培养液蛋白的变化。方法：利用SELDI技术检测差异蛋白的表达变化。对照组为未加任何处理因素的SGC7901细胞。结果：SELDI技术检测发现,ASODN作用组有31个差异蛋白分子低表达,10个差异蛋白分子高表达。NODN作用组有25个差异蛋白分子低表达,16个差异蛋白分子高表达。所有差异蛋白分子量均〈10000KDa。ASODN作用组中有6个低表达蛋白在NODN作用组高表达,分子量分别为4180.7KDa、4825KDa、7925.2KDa、8138KDa、8605.1KDa、8935.3KDa。结论：ASODN和NODN作用SGC7901细胞后细胞培养液中所表达的差异蛋白十分相似。     

血清蛋白质谱模型对胃腺癌诊断的应用性研究

[目的]探讨用蛋白质芯片技术筛选胃腺癌患者血清蛋白质表达谱，寻找血清中的标志性蛋白。[方法]采用蛋白质生物芯片表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI）技术，运用SAX2（Strong Anionic Exchanger）蛋白质芯片检测胃腺癌患者，胃炎患者和健康者血清，建立诊断模型，然后进行单盲模型验证。[结果]发现5910Da,5084Da和8691Da的三个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和健康组比较中具有显著性差异。5910Da,6440Da的两个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和胃炎组中比较具有显著性差异。[结论]建立了胃腺癌的血清蛋白指纹质谱，为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础，建立了以5910Da,5084Da,8691Da和6440Da四个蛋白质峰为模型区分胃腺癌与非胃腺癌的血清蛋白表达质谱诊断模型，为胃腺癌的临床诊断提供了一条崭新的途径和方法。     

蛋白质组学技术在胃癌诊断中的应用及临床意义

目的应用SELDI蛋白质芯片检测胃癌患者血清蛋白质指纹图谱，筛选候选肿瘤标志物以建立诊断模型，并探讨其诊断早期胃癌的临床意义。方法表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱（SEL-DI-TOF-Ms）技术及其配套蛋白质芯片检测40例胃癌患者和30例健康人的血清蛋白质组图谱，运用判别分析处理数据筛选标志物并建立诊断模型。结果8592m／z、13725m/z,8678m/z等3个蛋白质峰组合所构建的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果，灵敏度为90％（36／40），特异性为86．5％（26／30）。结论SELDI蛋白质芯片技术在胃癌的诊断尤其是早期诊断、术前分期及候选肿瘤标志物筛选等方面具有一定价值，值得进一步研究。     

应用激光解吸电离飞行时间质谱技术筛选无精子症患者精浆差异蛋白

目的：用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析无精子症和正常人精浆蛋白指纹图谱的变化，建立能鉴别无精子症和正常人精浆标志物的诊断模型。方法：收集33例无精子症和31例正常人的精浆，用H50（疏水芯片）蛋白质芯片和SELDI-TOF-MS检测蛋白质质谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理，建立区分无精子症和正常人精浆中蛋白质谱差异表达模型。结果：在分子量2000～20000范围内，共检测到78个有差异的蛋白峰，其中12个差异有显著性（P〈0.01），建立了由3个差异蛋白组成的无精子症诊断模型，其诊断灵敏度为96．9％（32／33），特异性为96．7％（30／31）。结论：用SELDI-TOF-MS技术初步建立的区分无精子症和正常人的精浆蛋白差异表达模型可以区别无精子症和正常人，可能为无精子症的诊断提供新的手段。     

鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞株Syk基因启动子甲基化与其mRNA和蛋白质表达情况之间的关系。方法:培养鼻咽癌细胞株CNE-1(高分化)、CNE-2(低分化)和永生化非癌性人鼻咽黏膜上皮细胞株(NP69),采用MS-PCR和Q-RT-PCR及Western Blot方法检测各细胞株中Syk基因的甲基化和Syk mRNA及Syk蛋白表达。结果:MS-PCR法检出CNE-1和CNE-2细胞Syk启动子甲基化率分别为36%±3.6%和62%±4.5%,而NP69未检测到甲基化;Q-RT-PCR法检出Syk mRNA在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为42%±3.5%和28%±2%;WesternBlot法检出Syk蛋白在CNE-1和CNE-2的表达水平均低于NP69细胞,分别为36%±4.5%和16%±2.5%。均有统计学意义(P<0.01)。结论:在分化程度较低的鼻咽癌细胞中,Syk基因启动子甲基化程度较高,则Syk基因mRNA与蛋白的表达较低。Syk基因mRNA和蛋白的表达与Syk基因启动子甲基化程度呈负相关。     

SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质，从而找出更好的生物标记物，用于检测胃炎。方法用SELDI—TOF—MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱，建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比（m／z））组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者，灵敏度为96．66％（29／30），特异性为93．55％（29／31）。2个蛋白质峰（5910和6440m/z合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96．6％（29／30），特异性为90．9％（30／33）。结论SELDI—TOF—MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值，值得进一步深入研究。     

MICROTECH648PC血清蛋白自动电泳仪使用的初步评价

目的通过实验数据对MICROTECH648PC血清蛋白电泳自动分析仪与手工电泳光密度扫描法的精密度进行比较和小批量正常参考值的调查。结果自动电泳仪的批内和批间变异系数(CV)值均优于手工电泳光密度扫描法,小批量随机正常标本自动电泳仪与自动生化分析仪分析的A/G均值,分别为1.57和1.63,经统计学检验有显著性差异,自动电泳仪血清蛋白各组分正常参考值分别为Alb:0.608±0.063,α1:0.025±0.0055,α2:0.093±0.0024,β:0.111±0.0215,γ:0.164±0.054。     

血清蛋白质指纹图谱模型在胃腺癌诊断中的应用

为探讨胃腺癌早期诊断方法，我们采用本院最近引进的蛋白质指纹图谱仪，表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI)，用于检测早期胃腺癌，经对临床检测33例胃腺癌患者，其病理分级为Ⅰ级3例、Ⅱ级13例、Ⅲ级11例、Ⅳ级6例。31例健康查体者，其灵敏度为90．91％(30／33)，特异性为93．55％(29／31)，阳性预测值为93．75％(30／32)。