PCR扩增技术用于染色体步移

传统的PCR技术,一般要求用已知模板的序列来设计引物,不能用来分析未知DNA序列,因而其应用受到限制。最近,几种以PCR为基础的扩增技术得到发展并且克服了这些局限性。     

应用毛细管电泳筛选DNA点突变

毛细管电泳在最近几年得到了迅速发展。它提供了快速、高分辨、自动操作、数据自动获取的在线检测,并且应用于ＤＮＡ的突变分析。本文介绍了利用毛细管电泳来筛选ＤＮＡ点突变,并对未来的发展进行了展望。     

DNA指纹技术在可疑精子标本等鉴定中的应用

目的：应用DNA指纹技术对精子库供精者中来源可疑的精子标本进行鉴定,并对供精者的后代进行亲子鉴定。方法：分别对本研究室所涉及的6名供精者的精子标本及其对应可疑精子标本各一份,同时志愿者精子和其儿子外周血各一份提取DNA,应用PCR扩增,PAGE胶电泳检测DNA指纹图。结果：通过DNA指纹图分析,5个可疑精子标本被确定为对应同一供精者精子标本,余1例被确认为非同一供精者精子标本来源;志愿者和其儿子被确定为亲子关系。结论：应用DNA指纹图技术对精子库供精者的可疑精子标本和供精者精子及对应供精者精子和后代外周血进行分析,可以对其来源进行准确的鉴定。     

用显微切割快速生产整条染色体绘画探针

目前,生产整条染色体绘画探针(whole chro-mosome painting probes,WCPs)既可从克隆流式细胞分类器分离的染色体DNA构建的文库中获得,也可以用Alu,L_1序列作为扩增引物扩增人鼠杂种细     

可诱导稳定表达DLX4细胞系的构建及其表达分析

目的：建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系。分析DLX4细胞系的表达调控。方法：将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆。采用不同剂量的DOX或者不同作用时间对pcDNA5/DLX4细胞系进行诱导表达,用Western blotting检测DLX4表达情况。结果：构建了可被Doxycline（DOX）诱导的稳定表达pcDNA5/DLX4的细胞系。0.001μg/ml的DOX即可诱导pcDNA5/DLX4细胞系的表达,0.1μg/ml DOX即可诱导该细胞系表达达到高峰;DOX对该细胞系作用1h后即可诱导该细胞系表达,对其作用16h后该细胞系表达明显增强。结论：构建了可被DOX诱导稳定表达的DLX4细胞系,不同剂量的DOX和不同作用时间对DLX4细胞系表达有不同的影响。该细胞系的建立为深入探索DLX4的功能提供了一种新的有效方法和实验材料。     

应用毛细管电泳筛选DNA点突变

毛细管电泳在最近几年得到了迅速发展。它提供了快速，高分辨，自动操作，数据自动获取的在线检测，并且应用于ＤＮＡ的突变分析。本文介绍了利用毛细管电泳来筛选ＤＮＡ点突变。并对未来的发展进行了展望。     

后基因组计划中的蛋白组分析新方法——多重色谱与质谱

双相聚苯稀酰氨凝胶电泳（2D PAGE）与质谱（MS）是分辨和鉴定蛋白的最常用的方法，但也存在有缺点，本介绍一些分离和鉴定蛋白质的新方法，包括用高效液相色谱（HPLC）、毛细管等电聚集（CIEF）、毛细管电泳（CE）或微毛细管色谱的1D和2D色谱方法等。     

应用扩增不应突变系统技术对β-地中海贫血行快速产前基因诊断

β地中海贫血是我国南方常见的常染色体隐性遗传性疾病。目前常用聚合酶链反应(ＰＣＲ)检测基因已知点突变的方法进行产前诊断。而对β地中海贫血进行基因诊断最有效的方法主要有反向点杂交法[1]和扩增不应突变系统(ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ,ＡＲＭＳ)技术[2]。我们应用ＡＲＭＳ技术完成了1例有β地中海贫血的快速产前基因诊断,现报道如下。一、资料与方法1.资料:患者因第1胎生育β地中海贫血患儿,现又妊娠第2胎而来我室遗传咨询门诊就诊,要求产前诊断。第1胎曾在湖南医科大学附属湘雅…     

改良菌落PCR快速鉴定TRIM28基因阳性重组子的方法研究

目的:建立简便、可靠基因克隆菌落阳性重组子的筛选方法。方法:应用普通菌落PCR和改良的菌落PCR方法对TRIM28基因的阳性重组体进行阳性重组子的分析比较,同时探讨了PCR反应体系中模板浓度和DMSO对于扩增效率的影响。并对鉴定结果为阳性的克隆进行了进一步酶切和蛋白诱导表达分析。结果:运用改良的菌落PCR法简单快捷,结果可靠,反应体系中DMSO的浓度为4%左右可以很好地促进GC富集DNA模板的PCR扩增。其方法的可靠性得到了酶切验证和重组蛋白表达证实。结论:应用改良方法可以用于快速有效地筛选阳性重组菌落。