14-3-3σ逆转录病毒载体的构建及稳定转染HaCat细胞系的建立

目的:构建14-3-3σ逆转录病毒载体,并建立高表达14-3-3σ的HaCat细胞系.方法:以人基因组为模板,通过PCR扩增出14-3-3σ基因的编码序列,定向插入到pLEGFP-N1质粒中,并在STBL3内进行扩增,刷选阳性克隆,酶切和测序验证后,转染293vr细胞进行病毒包装、扩增、纯化、获取逆转录病毒栽体.将逆转录病毒载体感染HaCat细胞后Western、实时荧光定量PCR法检测14-3-3σ的表达情况.结果:连接重组后经酶切和测序筛选出pLEGFP-N1-14-3-3σ;稳定转染的HaCat细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.Western和实时荧光定量PCR法表明14-3-3σ表达明显增强.结论:成功构建了14-3-3σ逆转录病毒载体,并构建了英稳定转染的HaCat细胞系.     

疝囊口腹膜外置术治疗小儿腹股沟斜疝

腹股沟斜疝是小儿最常见的外科疾患之一,发病率仅低于阑尾炎,其唯一根治的方法是手术治疗。我院1978.10～1985.12,应用疝囊口腹膜外置术,选择治疗学令前小儿腹股沟斜疝100例,初步观察,效果良好,现就其术式及治疗中的体会予以阐述。     

铁超负荷所致的骨关节病

<正> 骨与关节的临床袭现和病理。自 Schumacher1964年首次报道原发性血色素沉着症患者并发特异的关节病变,逐渐引起人们重视。各种原因所致的铁超负荷在晚期其体征很难相互区别。有人发现血色素沉着症患者44～60%以上都有软骨钙化性关节病变。Seffer 等收治的四个铁超负荷患者,慢性关节炎是唯一的症状。多发性慢性关节炎为其主要临床表     

树突状细胞感染Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒后的免疫功能变化

目的 观察体外树突状细胞（DC）感染编码Her2／neu基因膜外第一受体区（Her2-ECDs）、全长膜外区（Her2-ECD）和膜外跨膜区（Her2-TM）蛋白3种重组腺病毒（rAdrier2-ECDs、rAdrier2-ECD和rAdHer2-TM）后的免疫功能变化。方法 重组腺病毒感染未成熟DC后，Western blot法检测目的蛋白在DC中的表达。ELISA法检测DC感染3个重组腺病毒后的白介素-12（IL-12）分泌水平及与淋巴细胞共孵育后上清中干扰素-γ（IFN-γ）的含量。采用混合白细胞反应检测DC感染前后刺激同种异体淋巴细胞的增殖能力。MTT法检测细胞毒T淋巴细胞（CTL）活性。结果 Her2-ECDs、ECD、TM蛋白在DC中获得表达。转染DC培养第5天，上清中IL-12含量比未转染DC含量高（P〈0．05），但3种重组病毒之间无明显差异（P〉0．05）。DC刺激淋巴细胞增殖后培养上清中IFN-γ的含量显示随着时间的延长逐步增高，但病毒感染DC明显高于非感染DC。DC明显介导淋巴细胞增殖反应，除rAdHer2-TM感染DC外，另两种转染和非转染DC之间无差异（P〉0．05）。在DC诱导的CTL反应中，病毒感染DC诱导的杀伤率明显高于SK-OV-3修饰和非修饰DC，而SK-OV-3修饰又高于非修饰DC杀伤率（P〈0．05）。在病毒感染DC中．以rAdrier2-TM转染DC激发的CTL活性为最强。对高表达Her2／neu蛋白的乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于对Her2／neu表达阴性的杀伤率（P〈0．05）。结论 编码Her2／neu膜外及跨膜区蛋白重组腺病毒转染DC后，明显增强DC的抗肿瘤免疫功能．诱导出Her2／neu特异性的CTL活性。     

浙西南地区强直性脊柱炎206例误诊分析

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性进展性风湿性疾病，多发生于青少年。AS起病较隐匿，早期症状可不典型，患者易被误诊，从而失去早期诊断、早期治疗的时机，导致关节畸形，活动受限，严重影响患者工作及生活。现将1995年1月～2005年12月误诊的64例分析如下。     

千层塔内生真菌分离鉴定的初步研究

目的从治疗老年痴呆药用植物千层塔中分离内生真菌，并进行初步鉴定。方法用PDA平板培养基分离菌株，对照真菌鉴定手册，根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定。结果从千层塔的茎中分离出4株内生真菌，分别属于顶孢霉属、单轴霉属、酵母和青霉属。结论首次从千层塔中分离和鉴定出4株内生真菌。     

拓扑异构酶Ⅱβ抑制剂XK469对肿瘤细胞生长的抑制效应

目的研究人工合成的喹喔啉苯氧丙基的酸性衍生物XK469对于肿瘤细胞生长的影响及其机制。方法分别使用Northernblot和Westernblot法检测p53和p21在mRNA和蛋白水平的表达;结晶紫比色法检测细胞的生长情况;流式细胞术分析细胞周期。结果①在XK469处理人肺癌细胞H460后,在第8小时即出现明显的G2/M期阻滞,同时能够在一定剂量范围内对其有剂量依赖性生长抑制作用;能够分别在mRNA和蛋白水平诱导p53及其下游靶分子p21的表达;②以XK469处理HCT116p53+/+、p53-/-、p21+/+和p21-/-细胞后,虽然HCT116p53-/-细胞缺少p21的表达,但是和HCT116p53+/+相比对于XK469的敏感性却基本相同;和HCT116p21+/+相比HCT116p21-/-对XK469比较不敏感。结论XK469可以分别通过p53依赖和非依赖途径抑制肿瘤细胞的生长。由于肿瘤组织的p53突变的发生率很高,XK469的这种p53非依赖性G2/M周期阻滞和拓扑异构酶Ⅱβ抑制作用的多重机制或许可以解释其广泛的肿瘤抑制作用。     

慢性疼痛的评估和对策

我们通过药物和非药物治疗慢性疼痛患，并进行干预，使患疼痛减轻，调整了患情绪，提高了生活质量。现报告如下。     

膀胱和肠道准备情况对前列腺癌放疗精准实施的影响

目的 通过锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)观察每日前列腺癌患者膀胱和肠道的准备情况,分析对前列腺癌放疗精准实施的影响和副反应情况。方法 回顾性分析38例行容积调强放射治疗的前列腺癌患者治疗实施过程,处方分次25～35次/例,患者每日放疗前均行CBCT扫描,25～40次/例。观察患者准备情况,根据“不脱靶和直肠壁不能进入前列腺高剂量靶区”的临床需求调整摆位误差,有93次显示不能成功治疗,需重新准备后再行CBCT扫描。统计患者每日是否能成功治疗和摆位误差,分析不同膀胱和肠道准备情况下放射治疗师调整误差值的差异,并统计患者的副反应情况。结果 38例患者成功治疗频率为(92.14±5.25)%,有93次准备严重不足,其中48.4%是膀胱充盈过少,30.1%是肠道胀气。副反应与成功治疗频率成负相关（r=-0.393,P=0.015）。膀胱充盈较多时,肠道准备良好和准备不充分在左右（LR）、头脚（SI）、前后（AP）方向治疗师调整的误差值无统计学差异（P>0.05）;膀胱充盈适中和较少时,二者在LR、SI、AP方向治疗师调整的误差值均有统计学...