壳聚糖相对分子质量对微囊及包裹肝细胞活性的影响

Objective To study the influence of molecular weight of chitosan on microcapsules and hepatocytes in microcapsules. Methods The mechanical strength, permeability to fluoresceine isothiocyanate-bovine serum albumin (FITC-BSA) and activity of hepatocytes in microcapsules were compared between two kinds of microcapsules made by low and middle molecular weight chitosan. Results After 100 min of stirring microcapsules, all middle molecular weight chitosan microcapsules were damaged, 5% low molecular weight chitosan microcapsules were damaged. There was significant difference in breakage rate of the mechanical strength between two microcapsules (P ＜ 0. 05). Fifteen min after addition of FITCBSA into microcapsule solution, fluorescence intensity in the low molecular weight chitosan microcapsules was 4 AU, and that in middle molecular weight of chitosan microcapsules was 1. 5 AU, suggesting there was significant difference in permeability to FITC-BSA between two kinds of microcapsules (P ＜ 0. 05).One week after culture of microencapsulated hepatocytes, staining test showed that 100% of liver cells in low molecular weight chitosan microcapsules were alive, while the number was about 40% in middle molecular weight chitosan microcapsules (P ＜ 0. 05). Conclusion Low molecular weight chitosan is more suitable as materials of microcapsules than molecular weight chitosan.     

壳聚糖球形多孔微载体的血液相容性评价

背景:文献报道的微载体大多为实心的、大孔的,虽然较二维微载体的比表面积有明显的增加,但距理想的三维微环境相差甚远。目的:构建壳聚糖球形多孔微载体,通过溶血实验、凝血实验、血小板计数及聚集实验评价其血液相容性。方法:利用液氮冷冻干燥技术成功构建浓度为1%,2%,3%的壳聚糖球形多孔微载体。选择健康成年新西兰兔为宿主,采用溶血实验、凝血实验、血小板计数及其聚集实验评价壳聚糖球形多孔微载体的血液相容性。结果与结论:浓度为1%,2%,3%的壳聚糖球形多孔微载体的溶血率分别为1.56%,2.07%,2.31%,均小于5%,均无致溶血性;3种浓度壳聚糖球形多孔微载体样本材料对兔血时间无明显影响,三者与生理盐水阴性对照组间也无明显差别(P>0.05);3种浓度壳聚糖球形多孔微载体样本材料对兔血小板计数无明显影响,注入浸提液前后比较和组间比较差异均无显著性意义(P>0.05)。证实壳聚糖球形多孔微载体无致溶血性、无凝血性和无血小板聚集性,表明壳聚糖球形多孔微载体具有良好的血液相容性。     

壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞L-02的高浓度细胞培养

背景:微载体培养技术作为一项体外高浓度细胞培养技术,近年来已在肝细胞的体外培养中得到应用。目的:对壳聚糖球形多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察。方法:以自制的壳聚糖球形多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02设为实验组;无壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞的培养设为对照组。对两组细胞进行定时的细胞计数,并对实验组进行形态学观察,包括倒置相差生物显微镜观察和扫描电子显微镜观察。结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3天细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数明显高于对照组无微载体培养的细胞数量(P<0.05),实验组各样本之间差异无显著性意义(P>0.05);倒置相差生物显微镜下动态观察,可见前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,第3天可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜观察,微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附。提示,以自制的壳聚糖球形多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高浓度细胞培养。     

壳聚糖相对分子质量对微囊及包裹肝细胞活性的影响

Objective To study the influence of molecular weight of chitosan on microcapsules and hepatocytes in microcapsules. Methods The mechanical strength, permeability to fluoresceine isothiocyanate-bovine serum albumin (FITC-BSA) and activity of hepatocytes in microcapsules were compared between two kinds of microcapsules made by low and middle molecular weight chitosan. Results After 100 min of stirring microcapsules, all middle molecular weight chitosan microcapsules were damaged, 5% low molecular weight chitosan microcapsules were damaged. There was significant difference in breakage rate of the mechanical strength between two microcapsules (P ＜ 0. 05). Fifteen min after addition of FITCBSA into microcapsule solution, fluorescence intensity in the low molecular weight chitosan microcapsules was 4 AU, and that in middle molecular weight of chitosan microcapsules was 1. 5 AU, suggesting there was significant difference in permeability to FITC-BSA between two kinds of microcapsules (P ＜ 0. 05).One week after culture of microencapsulated hepatocytes, staining test showed that 100% of liver cells in low molecular weight chitosan microcapsules were alive, while the number was about 40% in middle molecular weight chitosan microcapsules (P ＜ 0. 05). Conclusion Low molecular weight chitosan is more suitable as materials of microcapsules than molecular weight chitosan.     

微囊化细胞的低温保存

背景:微胶囊是一种有效的免疫隔离工具,低温冷冻方便了微囊的保存与运输,有利于微囊化技术在临床的推广应用。目的:综述微囊低温保存技术中微囊低温保存特点、不同保存方法优缺点、研究方法及微囊低温保存实验现状。方法:检索1980/2010 PubMed数据库,1991/2010万方数据库、维普数据库有关微囊低温保存研究,低温保存工艺理论及专用仪器,微囊低温保存技术医学应用的文献。结果与结论:微囊化细胞在低温保存过程中的损伤特点与细胞、组织有很大不同。微囊相对较大的尺寸与复杂的囊壁半透膜结构,使得微囊结构与囊内细胞更容易受到溶质损伤与冰晶损伤,因此不能简单套用单细胞悬液的低温保存方案。慢速冷却法与玻璃化法是两种常见的微囊化细胞低温保存方法,各有利弊。微囊化细胞低温保存技术尚未成熟,在开发新型微囊低温保存设备,优化设计微囊低温保存方案的同时,需进一步加强对微囊冻存机制更深层次的探索。     

肝脏移植术式进展

自1963年肝移植的先驱Starzl成功地进行了世界上首例人体肝脏移植(liver transplantation,LT)起,LT经历了实验研究、临床应用、发展推广、成熟的漫长而艰辛的过程,目前已经成为终末期肝病公认的治疗手段。随着LT技术的不断成熟,近年出现了一些新的手术方式,如背驮式、减体积、劈离式、异位或原位辅助性部分、活体部分肝移植,同时还出现了肝肾、肝心、肝肠以及以肝为主的多器官簇移植,使LT外科的领域和范畴得到了进一步拓展。一、经典式肝脏移植(classic livertransplantation,CLT)最早的肝移植是在体外静脉转流或不转流的情况下,切除病…     

一种新型生物人工肝膜材料体外激活血小板的实验

目的：体外研究一种新型生物人工肝反应器材料-丙稀酰胺接枝改性聚丙烯膜（PP-g-AAm）对血小板的激活，并评价其血液相容性。方法： 模拟体内条件将PP-g-AAm膜和对照组未改性的聚丙烯（PP）膜与富含血小板血浆（PRP）接触后，用ELISA法检测血浆中β－血小板球蛋白（β-TG）的表达， 用流式细胞术检测血小板活化标志CD62P和CD63的表达，用扫描电镜检测两种膜上血小板粘附情况。 结果： 两种膜材料接触PRP 30 min后，血浆β-TG的表达均高于空白对照组（P<0.01, P<0.05），两材料组之间差异显著（P<0.05）； PP-g-AAm膜激活血小板表达CD62P、CD63的百分率都明显少于PP膜（P<0.05， P<0.01）；两种膜材料接触PRP 1 h后，扫描电镜观察材料表面粘附的血小板都有明显变形，但PP-g-AAm膜表面粘附的血小板明显少于PP膜。结论： PP-g-AAm膜对血小板的激活明显少于PP膜，具有较好的血液相容性。     

乳腺癌保乳病人术后生存质量的质性研究

[目的]了解乳腺癌保乳治疗病人对生存质量的主观评价,从生存质量的各维度分析保乳病人术后生活质量影响因素,为提高保乳手术病人生存质量提供例证和启示.[方法]采用质性研究中现象学研究法对12例保乳病人进行深度访谈,对获得的访谈资料进行内容分析、提炼主题,从生理、情感、社会/家庭3个维度分析保乳手术病人生存质量状况.[结果]乳腺癌保乳手术病人对生存质量的主观评价:内涵多样化,健康体现最佳生存质量,保乳手术提高生存质量;生存质量3个层面6个主题被提炼,生理层面:患肢功能受限,化疗反应;情感层面:焦虑,悲观;社会/家庭层面:家庭支持,自我效能改变.[结论]生理功能下降、负性情感和自我效能降低影响保乳手术病人的生存质量,家庭支持提高生存质量.护理人员应采取多种措施,促进病人生理、心理、社会功能方面的适应,提高其生存质量.     

肝细胞体外培养技术的研究与进展

目前肝细胞体外培养技术主要有以下几种：单层培养法、胶原凝胶三明治培养法、微载体黏附培养法、微囊包裹培养法、球形聚集培养法、中空纤维培养法。胶原凝胶三明治培养法制备简单，培养效果明确，但是所培养的细胞数量有限，难于大规模工业化培养；中空纤维培养法能为细胞生长提供了三维空间，增加了肝细胞与培养体系的接触面积，有利于物质代谢与交换，但存在管上细胞分布欠均匀、细胞团块易堵塞半透膜孔隙影响物质交换等弊端；球形聚集培养法不需构建载体，但球体大小不易控制，易造成球体中心肝细胞坏死；微囊包裹培养能提供一个较好的免疫阻隔环境，能在免疫阻隔要求较高的环境下使用。微载体黏附培养法能够在单位体积内培养最多数量的肝细胞，能对肝细胞的黏附、生长和分泌提供较好环境，目前微载体的直径和孔径还未达到最理想的培养要求，单位体积肝细胞的培养数量还有很大的提升空间。同时培养液配方与共同培养技术的不断改良，必将使体外培养的肝细胞数量与功能达到肝细胞移植所需。     

生物人工肝细胞材料研究进展

生物人工肝是治疗肝功能衰竭的有效方法.肝细胞是生物人工肝系统的核心,生物人工肝的肝支持作用完全依赖于所用肝细胞的特异性生物学功能.生物人工肝中使用的肝细胞来源主要有人源性肝细胞、异种肝细胞、肝细胞株等.近20年来,虽然对各种来源的肝细胞进行了广泛和深入研究,但是生物人工肝细胞材料的来源问题至今未能得到满意解决.文章综述此方面的最新研究进展.