组织蛋白酶B-RNAi-LV载体构建及其对小鼠脑微血管内皮细胞系bEND.3的影响

目的 构建组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)小RNA（siRNA）慢病毒载体,并探讨其对小鼠脑微血管内皮细胞（bEND.3）的影响。方法 设计并合成含有干扰Cathesin B基因的19 nt的双链寡DNA片段,将此片段克隆到携有绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒表达载体质粒pGCSIL-GFP上,经测序正确后,命名为pGCSIL-GFP-CTSB,将慢病毒表达载体pGCSIL-GFP-CTSB、慢病毒包装载体pHelper1.0和pHelper2.0 3质粒共同转染于293T细胞,获得携带Cathepsin B基因的 RNAi慢病毒（Cathesin B-RNAi-Lentivirus,即CTSB-RNAi-LV）,通过Real time-PCR和Western blotting方法观察CTSB-RNAi-LV对bEND.3的影响。结果1.pGCSIL-GFP-CTSB中携带有正确的Cathesin B siRNA基因;2.目的基因Cathepsin B siRNA被RNAi慢病毒高效地转导入靶细胞bEND.3内,并达到稳定的表达;3.CTSB-RNAi-LV能有效降低bEND.3中Cathepsin B mRNA和蛋白表达。结论成功构建了RNAi慢病毒载体pGCSIL-GFP-CTSB;并成功包装了RNAi慢病毒CTSB-RNAi-LV;CTSB-RNAi-LV能有效地抑制bEND.3中Cathepsin B mRNA和蛋白表达水平下调。     

本硕局部解剖学实验课教学改革的体会

笔者参加了本硕局部解剖学实验课教学的教改工作,在具体的教学实践中进行了有益的探索,体会到科学合理高效的安排是上好实验课的前提,学生的课前预习与教师的精心准备是一堂课成功的关键。在教学组织实施过程中教师可以最大限度地利用标本进行启发式教学,同时做好学生解剖操作的教练与陪练,并要在下课时做好耐心细致的总结收尾工作。     

力竭游泳运动大鼠下丘脑室旁核NF-κB的表达

目的 观察1周力竭游泳运动后大鼠下丘脑室旁核(PVN)NF-κB基因的表达变化及变化规律. 方法 将35只大鼠随机分为对照组(n=5)和力竭组(n=30),力竭组大鼠进行1周力竭游泳运动,最后一次力竭运动结束后分即刻(0h),6 h,10 h,14 h,20 h,24 h共6个时间点,采用组织化学SABC法观察大鼠下丘脑室旁核内NF-κB核转录因子的定位和分布表达规律,采用Western Blot法研究下丘脑室旁核NF-κB含量变化,通过图像分析系统和统计学软件进行图像和数据分析.     

不同游泳训练方式对大鼠下丘脑室旁核c-fos表达的影响

为了观察游泳运动后大鼠下丘脑室旁核(PVN)内c-fos mRNA及Fos免疫阳性神经元的表达变化,探讨下丘脑PVN对不同形式运动的调节机制,本实验将60只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和运动组(n=50),建立大鼠游泳运动模型(持续训练和间歇训练)。在运动结束后0、0.5、1、2、4h等不同时间点,冰水浴分离新鲜脑组织或用多聚甲醛灌注固定取脑,前者经RT-PCR反应,半定量分析运动后下丘脑PVN内c-fos mRNA的含量变化,后者经冰冻切片、免疫组织化学染色,观察Fos免疫阳性神经元的定位和分布情况。结果显示:(1)对照组大鼠下丘脑PVN内c-fos mRNA表达极低,而运动结束后c-fos mRNA表达明显升高。持续运动组逐渐升高,1h时达到最大值;间歇训练结束后2h,c-fos mRNA表达最强,然后回落,运动结束4h组c-fos mRNA仍较对照组显著增多(P<0.05);(2)运动大鼠Fos免疫阳性神经元的数目明显增多,特别是在PVN处。在室旁核小细胞部(pPVN),持续组游泳结束后1hFos阳性神经元的数目显著升高达峰值,而间歇组在运动结束后2h达峰值,同一时刻间歇组的表达高于持续运动组;室旁核大细胞部(mPVN)内,持续组Fos阳性神经元数在运动结束后持续升高,2h后显著下降,而间歇组各时刻阳性神经元的表达变化无统计学差异(P>0.05)。以上结果提示,下丘脑PVN在运动后机体调节中起重要作用,不同的运动方式可以产生不同的影响,且pPVN对不同形式运动性应激反应具有较高灵敏度。     

成年小鼠室管膜下区神经干细胞分离及培养方法改良

目的:改良成鼠神经干细胞(NSCs)分离培养方法,优化培养条件,为系统研究成体干细胞增殖与分化特性以及利用成体干细胞进行细胞治疗奠定基础。方法:视交叉前1.5 mm处离段脑组织,分离前脑室管膜下区(SVZ),通过机械性消化与化学性消化相结合的操作方法制备细胞悬液,应用改良无血清培养基悬浮培养NSCs。nestin免疫荧光染色鉴定NSCs,1%胎牛血清诱导分化后免疫荧光染色鉴定NSCs多向分化潜能。系列稀释实验和5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入实验比较改良培养与常规培养NSCs自我更新能力和增殖潜能。结果:改良培养条件,NSCs 7～9 d可形成nestin阳性神经球。应用1%FBS诱导后,NSCs分化为形态各异的细胞,包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,分化比例分别是(18.6±3.5)%、(73.2±5.2)%和(3.6±0.4)%。系列稀释实验结果显示当细胞接种数量为500、1000和2000个,改良培养NSCs形成次代神经球数量较常规培养对照组明显增多(P<0.05),并且8 h BrdU掺入率也显著增高达(42.4±6.2)%(P<0.05),表明改良培养条件下NSCs自我更新能力和增殖活力良好。结论:本研究建立了一种简便、操作性强、重复性高的成鼠NSCs分离培养方法。     

成人本科继续教育中人体解剖学实习教学探讨

成人本科继续教育是医学教育中一支特殊的学生队伍,而人体解剖学作为一门重要的、专业性较强的基础课程,学习效果直接影响其后续课程的开展乃至日常临床工作的进展。结合成人本科教育的特点对人体解剖学实习教学对策作一探讨。     

维甲酸致雌性大鼠骨质疏松的形态学实验研究

目的:观察维甲酸诱导雌性Wistar大鼠骨质疏松形态学的改变.方法:雌性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,实验组给予维甲酸诱导骨质疏松,对照组给予同等剂量蒸溜水.15天后颈椎脱位致死,对腰椎、胫骨进行形态学计量学的测量.结果:实验组骨小梁稀疏、变窄、间距增大,破骨细胞明显增多,皮质骨的面积百分数减少,而骨髓腔面积百分数增加.结论:维甲酸对大鼠皮质骨的影响主要是髓腔面积扩大而皮质骨厚度影响不显著,松质骨影响明显.     

大鼠斜方肌群运动神经元的中枢定位和树突构筑

用结合 HRP 逆行标记法,研究了12只大鼠斜方肌群运动神经元的中枢定位及其树突构筑。斜方肌群受副神经脊髓根和脊神经的双重支配,支配斜方肌群的副神经脊髓根标记细胞定位于 C_1～C_6节段内;支配斜方肌群的脊神经标记细胞定位于 C_3～C_5节段。标记神经元的树突分布区域有:①自前角细胞核向背侧达脊髓灰质第Ⅶ板层;②伸向同侧外侧索;③伸向同侧白质前索;④自中央管腹侧、背侧超越正中线;⑤伸向脊髓中央管;⑥构成白质内上、下行的纤维。     

NPY-IRF在子宫肌壁的表达与子宫湿重

目的 研究大鼠去卵巢前、后不同时间子宫肌壁内神经肽Y免疫反应阳性神经纤维表达变化与子宫湿重变化.方法 选取雌性SD大鼠40只,随机分为假手术对照组(sham)、卵巢切除后4周组(ovx1)、卵巢切除后6周组(ovx2)、卵巢切除后8周组(ovx3),每组10只.观察各组大鼠的子宫湿重变化,并采用SABC免疫组织化学法检测神经肽Y免疫反应阳性神经纤维在各组大鼠子宫肌壁内的表达.结果 各组大鼠子宫湿重经两两比较均P<0.05,表现为:ovx3组相似文献