纤维蛋白沉积对老年急性肺损伤大鼠肺组织内皮细胞功能的影响

目的 探讨纤维蛋白沉积对不同鼠龄大鼠肺组织血管内皮细胞功能的影响.方法 青年及老年大鼠均随机分为4组,对照组（NC）腹腔注射生理盐水;脂多糖组（L）腹腔注射脂多糖;氨甲环酸组（LT）注射脂多糖加氨甲环酸;尿激酶组（LTU）注射脂多糖及氨甲环酸加尿激酶.应用免疫组化分析纤维蛋白沉积;应用Western blot和Northern blot分别检测肺组织血栓调节蛋白（TM）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）的表达.结果 （1）正常青年和老年大鼠肺组织内均无纤维蛋白沉积,脂多糖刺激后纤维蛋白沉积增多,加用氨甲环酸纤维蛋白沉积更加明显（P＜0.01）,应用尿激酶后纤维蛋白沉积明显减轻（P＜0.05）;老年大鼠L组、LT组和LTU组均比相同干预组的青年大鼠肺组织纤维蛋白沉积明显（P＜0.05）.（2）青年和老年大鼠给与脂多糖刺激后,ICAM-1和PAI-1表达明显上调（P＜0.05）,TM表达显著下降（P＜0.01）;加用氨甲环酸后ICAM-1和PAI-1表达上调更加明显（P＜0.01）,TM几乎无表达;给予尿激酶处理后,ICAM-1和PAI-1表达与LT组比较明显下调（P＜0.05）,TM表达增多（P＜0.05）;老年大鼠L组、LT组和LTU组Ⅰ CAM-1和PAI-1的表达均较青年大鼠相同干预组显著增多（P＜0.05）,TM表达则显著减少.（3）经纤维蛋白沉积量校正后,老年大鼠肺组织ICAM-1和PAI-1的表达量仍显著高于青年大鼠（P＜0.05）.结论 增龄能够促进脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织纤维蛋白沉积,增强纤维蛋白的内皮细胞损伤作用.     

人TIMP-1转基因小鼠随增龄肾组织炎症反应变化的意义

目的利用人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)转基因小鼠,研究了IMP-1在肾脏器官衰老过程中的作用。方法对3、12、24月龄人TIMP-1转基因小鼠和野生型小鼠肾组织石蜡切片行PAS染色；免疫荧光法检测肾组织内F4/80阳性细胞数；Western印迹方法检测肾组织内TIMP-1、TIMP-2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-2、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白质表达；明胶酶谱法检测明胶酶活性。反向酶谱法检测TIMP-1的活性。结果两种基因型小鼠随增龄肾组织内出现局灶性纤维化改变。24月龄,与野生型小鼠比较,转基因小鼠肾组织内TIMP-1表达及活性上调[(1．10±0．18)对(0．62±0．09)；(50．75±7．25)对(20．64±3．50),P＜0．05]；明胶酶的表达及活性降低[(MMP-2：(2．08±0．20)对(3．39±0．43)；MMP-9：(4．02±0．82)对(6．72±1．40),P＜0．05]；Ⅲ型和Ⅳ型胶原[(0．72±0．11)对(0．57±0．09)；(0．84±0．13)对(0．6±0．11),P＜0．05]、ICAM-1和TGF-β1的表达上调[(0．72±0．12)对(0．53±0．07)；(0．69±0．12)对(0．45±0．09),P＜0．05],F4/ 80阳性细胞增多[(18．8±4．4)对(12．7±3．6),P＜0．05]。结论TIMP-1通过上调ICAM-1、增强炎症,促进衰老相关肾脏纤维化。     

ILK-siRNA抑制衰老大鼠系膜细胞纤维连接蛋白积聚的研究

目的观察整合素连接激酶（integrin linked kinase,ILK）小干扰RNA（small interference,siRNA）对衰老大鼠系膜细胞细胞外基质纤维连接蛋白（fibronectin,FN）的影响,探讨ILK在衰老肾脏肾小球硬化中的作用.方法分离培养3月龄和24月龄雄性Wistar大鼠原代肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）,脂质体转染抑制ILK表达的siRNA或无关siRNA（con siRNA）.利用RT-PCR、Western blot和免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测ILK和FN的表达情况.结果ILK-siRNA转染可抑制3月龄和24月龄大鼠系膜细胞ILK和FN的表达水平（P＜0.05）;对24月龄大鼠系膜细胞的抑制程度更显著（P＜0.05）,几乎使ILK和FN下降到正常青年大鼠系膜细胞的水平.结论通过RNAi技术抑制ILK的表达,可减轻衰老大鼠系膜细胞FN的积聚,为肾脏器官衰老的防治提供新的干预靶点.     

中国北京市区健康人群白细胞介素6基因启动子区基因的多态性及与亚裔和高加索人群的比较

目的:动脉硬化、老年痴呆、糖尿病、骨质疏松等均有循环中炎症介质持续升高的表现。观察北京市区健康人循环中炎症介质白细胞介素6启动子区基因多态性与循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系,并评价白细胞介素6基因多态性的种族差异。方法:采用随机整群抽样的方法于2003-03/2004-03筛选中国北京地区30岁以上自我评价健康的汉族居民662人,男365人,女297人。通过身体检查及血液学及血生化学检测,了解调查对象健康状况;测定入选人群白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原;检测白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性,观察其与循环中炎症指标白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原的关系。结果:按意向处理分析,进入结果分析662人。①入选健康成人662人,174位均为GG型,未发现GC和CC型;597位GG型占99.24%,仅有5人为GA型,未发现CC型;572位存在GG,CC,GC3种基因型,G和C等位基因频率分别为0.22和0.78,基因型和等位基因频率均无性别差异。②G等位基因(GG+GC型)携带者循环中白细胞介素6、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原水平明显高于CC基因型犤(2.91±2.21)ng/L,(2.43±2.31)mg/L,(3.05±0.71)g/L;(2.44±1.47)ng/L,(1.41±1.57)mg/L,(2.70±0.64)g/L,P=0.03,0.01,0.01犦。③中国北京地区汉族人群白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A)、572(G/C)的基因型分布与日本、韩国亚裔人群相似(174位和597位几乎均为GG型,572位G等位基因频率分别为0.28,0.23,0.25,P>0.05),而明显不同于德国、瑞典高加索人群(174位存在GG,GC,CC,597位存在GG,GA,AA3种基因型,572位G等位基因频率分别为0.95,0.93,P<0.01)。结论:白细胞介素6启动子区174(G/C),597(G/A),572(G/C)基因多态性存在种族差异,亚裔人群不存在174(G/C),597(G/A)基因多态性,572位基因型频率也明显不同于高加索人群。572(G/C)位存在基因多态性并影响循环中白细胞介素6的表达从而影响机体炎症状态,G等位基因为少见基因,其携带者白细胞介素6和超敏C反应蛋白水平明显高于CC型个体。     

案例教学法结合PBL在肾脏内科临床中的应用

慢性肾脏病的发病率正逐渐升高,完善其培训与教学非常重要。以案例教学法结合PBL应用于肾脏内科临床教学中,有助于培养医师在临床诊疗工作后不断学习的意识,建立完善的临床诊疗思维,本文探讨了在新型医学教育格局下肾脏内科临床教学模式。     

IgA肾病内皮源型一氧化氮合酶基因多态性分析

目的 研究内皮型NO合酶（eNOS）基因多态性与IgA肾病的关系。方法 采用聚合酶链反应法对北方地区（汉族：北京，天津，河北）296例IgA患者、310例正常对照两组人群的eNOS基因第4内含子的可变串联重复序列多态性（vNTR）4a／b多态性进行基因型分析，比较两组间基因频率、等位基因频率分布有无统计学差异。结果 两组患者的eNOS基因的可变串联复序列表现为eNOS4a／4a，eNOS4b／4b，eNOS4a／4b3种基因型。IgA肾病患者组和正常对照组之间的eNOS基因4a／b的基因型和等位基因频率无显著性差异。结论 eNOS基因内含子4VNTR多态性与IgA肾病血管病变的发生无明显关联。该多态性在IgA肾病遗传因素中的地位尚难以确定，其参与IgA肾病微血管病变的作用可能存在种族或地域异质性。     

人尿酸转运蛋白基因的克隆与序列分析

目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuric acid transporter，hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA．根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物，然后通过RT—PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP—CI连接．经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因，克隆到pEGFP—CI载体后酶切分析结果与预期一致，序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因．序列分析结果完全正确，为对该基因进一步研究奠定了基础。     

缬沙坦对肾单位不同节段衰老相关基因表达的影响

目的：观察长期抑制肾素-血管紧张素系统(RAS)对老龄大鼠肾单位不同节段细胞外基质代谢相关调控基因表达的影响。方法：应用自动激光微分离方法分离大鼠肾脏的肾小球及肾小管,观察转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的基因表达变化。15月龄大鼠口服缬沙坦(25mg／kg)治疗至24月龄,与3月龄及24月龄正常大鼠对比观察TGF-β1及FN基因表达的变化。结果:24月龄大鼠肾小球及肾小管的TGF-β1及FN基因表达较3月龄大鼠明显增加。缬沙坦治疗对老龄大鼠肾小球的TGF-β1 mRNA表达无明显影响,但明显下调了肾小管的TGF-β1、肾小球及肾小管的FN mRNA表达。结论:TGF-β1及FN基因表达变化涉及大鼠肾脏肾小球、肾小管的衰老相关性改变,肾脏局部RAS激活在肾单位的不同节段对上述基因表达的调控可能存在着不同作用。