汽油、甲醇燃烧汽车尾气类雌激素活性研究

目的探讨汽油、甲醇燃烧汽车尾气的雌激素样作用，为甲醇取代汽油作为汽车燃料提供卫生学依据．方法采用环境雌激索基因重组酵母测评系统，分别测定汽油、甲醇燃烧汽车尾气的雌激素活性。结果汽油燃烧汽车尾气在高剂量1000mL／mL时吸光度值（A600）仅为0．081，与二甲亚砜（DMSO）对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），说明汽油尾气在该剂量下对酵母细胞有毒性作用；汽油燃烧汽车尾气在31．25mL／mL荆量时检出雌激素活性，与DMSO对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），其他各荆量组均未检出雌激素活性。甲醇燃烧汽车尾气各剂量组与DMSO对照组相比，A600差异均无统计学意义（P〉0．05），也未检出雌激素活性．结论以汽油作为燃料的汽车尾气具有微弱雌激素样作用，以甲醇作为燃料的汽车尾气无雌激素样作用。     

雄性小鼠生殖细胞体外彗星试验方法的建立

彗星试验 (又名单细胞凝胶电泳试验 )作为一种短期实验方法 ,在检测化学物质所致的ＤＮＡ损伤方面 ,具有简便、快速、敏感性高等优点 ,并可检测单个细胞的ＤＮＡ损伤 ,近年来该技术已广泛用于各种理化因子、环境化学物的遗传毒性评价[1～ 3 ] 。根据彗星试验的原理 ,一切有核的哺乳动物细胞均可用于单细胞凝胶电泳实验 ,然而 ,由于组织细胞分离技术的限制 ,目前仍以体外培养细胞及体内淋巴细胞研究较为广泛 ,其他组织细胞应用较少 ,特别是以生殖细胞为靶细胞的报道则更少。本方法旨在建立雄性小鼠生殖细胞的体外彗星试验 ,并试图将其用于雄…     

改良的彗星试验与标准方法的对比研究

彗星试验 (Ｃｏｍｅｔａｓｓａｙ)又名单细胞凝胶电泳 (ＳＣＧＥ)试验 ,是近年来发展起来的用于检测单个哺乳动物细胞ＤＮＡ损伤的方法 ,具有灵敏、简便、快速等优点 ,应用十分广泛[1～ 3] 。目前该方法仍处于继续完善和发展阶段 ,有许多问题尚待研究[4 ] 。本文就化合物染毒细胞的方式进行了研究 ,比较了改良的浸泡染毒与传统染毒的结果 ,并对改良试验的某些条件进行了探讨。1　材料与方法1 1　细胞培养　采用中国地鼠Ｖ79细胞 ,以Ｄｕｂｉｃｏ改良的基本培养基 (ＤＭＥＭ )为基本培养基 ,加体积分数为 10 %的小牛血清 ,10 0 0单位 /Ｌ青霉…     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

乙醇染毒对果蝇寿命及某些生化指标的影响

目的探讨不同浓度乙醇对果蝇寿命以及果蝇体内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、以及丙二醛(MDA)含量的影响。方法收集8小时内羽化未交配雌雄果蝇7200只,雌雄各半。取其中2400只,随机分为6组,每组雌雄果蝇各200只,给予不同浓度乙醇染毒,每4天更换1次培养基,每天记录死亡数,用生存实验检测乙醇对果蝇寿命的影响。另取4800只,随机分为4组,每组雌雄各600只,给予含不同浓度乙醇的培养基喂养,分别于喂养0天、10天、20天和30天测定SOD和GSH-Px活力,同时检测MDA的含量。结果随着乙醇剂量的增加,雌雄果蝇的寿命均呈下降趋势,高剂量乙醇染毒组果蝇寿命显著降低(P<0.05)。在相同染毒剂量下,随着染毒时间的增加,果蝇体内SOD、GSH-Px活性逐渐降低,MDA含量逐渐升高;当染毒20天和30天时,90mmol/L、270mmol/L剂量组SOD、GSH-Px活性及MDA含量与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论乙醇暴露能降低果蝇寿命,并导致果蝇体内SOD和GSH-Px活力的降低和MDA含量的增高。     

hOGG1基因低表达对DNA氧化损伤及修复的影响初探

背景与目的:初步探讨采用核酶技术获得的hOGG1基因低表达的细胞对氧化剂诱导的DNA氧化损伤与修复作用的影响。材料与方法:以A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549_R细胞为研究对象,分别以重铬酸钾和过氧化氢为受试物,比较两种细胞DNA损伤与修复的差异。彗星试验检测不同浓度受试物作用下两种细胞的彗星细胞率和DNA迁移长度;改良彗星试验比较两种细胞在去除受试物后孵育0、30、60、120和180min时的修复情况。结果:重铬酸钾和过氧化氢对A549_R细胞的DNA损伤效应敏感,在一些浓度下其彗星细胞率和DNA迁移长度明显高于A549细胞(P<0.05);A549_R细胞的DNA修复能力显著低于A549细胞(P<0.05)。结论:hOGG1基因的低表达可以增加细胞对氧化剂诱导的DNA损伤的敏感性,降低细胞DNA的修复能力。     

香烟烟雾对雄性小鼠生殖细胞DNA损伤的研究

为了研究香烟烟雾对生殖细胞的遗传毒性，本文采用目前检测ＤＮＡ损伤最敏感的方法—彗星试验，检测了香烟烟雾溶液对小鼠精原细胞的ＤＮＡ损伤作用。分别以二甲基亚枫（ＤＭＳＯ）和磷酸缓冲液（ＰＢＳ）作为吸收液，用大气收集器（Ｕ形多孔玻板吸收管）采集香烟主流烟雾，制得ＤＭＳＯ烟液和ＰＢＳ烟液。结果显示：ＤＭＳＯ烟液的原液至４倍稀释液（含烟量４×１０－３至１×１０－３支烟／ｍｌ）对精原细胞具有明显细胞毒性，孵育２ｈ后，细胞存活率小于８０％，而ＰＢＳ烟液的原液其细胞存活率也高于８０％。两种烟液的ＤＮＡ损伤作用也…     

重组酵母测评系统检测环境雌激素的影响因素探讨

目的 :探讨重组酵母测评系统中影响 β -半乳糖苷酶活性的因素。 方法 :以乙烯雌酚为受试物 ,研究在检测环境雌激素的重组酵母测评系统中 ,振荡和非振荡培养、酵母扩增时间、受试物作用时间和裂解方式等对酶活性的影响。结果 :在非振荡培养条件下 ,可检出乙烯雌酚的雌激素活性 ,且与振荡培养条件下的雌激素活性差异无统计学意义(P >0 0 5 )。非振荡培养时 ,在 18～ 30h内 ,随酵母扩增时间的延长 ,酶活性逐渐增加 ,30h后 ,酶活性则随扩增时间的延长而逐渐降低 ;各剂量组的乙烯雌酚作用时间以 30h时酶活性最高 ,若将作用时间延长至 4 8h ,酶活性则明显下降 (P<0 0 1) ;在不同裂解方式下 ,各剂量组乙烯雌酚的酶活性大小顺序为 :液氮裂解 >Y -PER裂解 >彗星实验裂解液裂解 >SDS +氯仿 (CHCl3 )裂解 >超声破碎。结论 :重组酵母测评系统检测环境雌激素的优化组合为 :恒温培养箱中酵母扩增 2 4～ 30h ,受试物作用 30h ,Y -PER或液氮裂解酵母细胞。     

彗星试验检测间接致突变物的DNA损伤作用

目的与方法：用彗星试验检测在体外活化与不活化条例下9种间接致突变物（苯并（a）芘、7，12－二甲基苯并蒽、3－甲基胆蒽、2－氨基蒽、2－氨基芴、4－硝基喹啉－1－氧化物、乙基亚硝基胍、黄曲霉素B1和环磷酰胺）对V79细胞的DNA损伤作用。结果：在活化条件下，8种物质出现DNA损伤作用或损伤作用增强，1种物质（4－硝基喹吉林－1－氧化物）DNA损伤作用减弱。结论：加入体外活化系统，彗星试验可检测间接致突变物的DNA损伤。     

细胞冻存条件对单细胞凝胶电泳试验结果的影响

将未处理的（对照）和重铬酸钾处理的Ｖ７９细胞贮存于４℃、－２０℃、－８０℃和－１９６℃，于保存后的０，４，２４，４８，１６８ｈ取出进行单细胞凝胶电泳（ＳＣＧＥ）试验。结果显示各温度保存２４ｈ的细胞ＤＮＡ迁移长度与新鲜细胞无差异；更长时间（４８和１６８ｈ）的保存细胞ＤＮＡ迁移长度明显增加；同时各温度保存的细胞存活率均随贮存时间的延长而下降。因此，２４ｈ内细胞保存以４℃为好，而２４ｈ以上的保存则以－８０℃为佳