CS3菌毛在不同载体系统中表达水平的比较

目的：选择合适的载体系统用于CS3菌毛的高水平表达和装配,方法：将CS3操纵子基因分别克隆入pUC19,pTrc99A等载体中,采用全细胞ELISA方法检测CS3菌毛的表达水平,并用SDS－PAGE和电子显微镜技术证实菌毛的表达和组装。结果：CS3菌毛在质粒pUC19中的表达水平明显高于在pTrc99A和pBR322中的表达水平,基因的插入方向对表达影响甚微;SDS－PAGE可看到表达条带,电镜下可观罕到菌毛形成。结论：CS3自身的启动子在表达中起决定作用,质粒拷贝数是影响表达水平的关键因素。     

梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用

目的　克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 抗原 ,并检测梅毒患者的血清标本。方法　应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因 ,采用基因工程的方法 ,应用融合表达载体pGEX 2T ,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体 47× 10 3 特异性抗原基因的重组菌株 ,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白。再经亲和层析获得纯品 ,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本 30份 ,同时检测非梅毒患者的血清标本 30份。结果　纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 的特异性抗原。ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性。非梅毒患者血清均阴性 ,无非特异性交叉反应。结论　此项方法具有操作简便、准确的特点 ,为临床检测梅毒开辟了新的领域     

新型粘膜免疫佐剂候选株LTA^—B^＋的构建

目的：产肠毒素大肠杆菌产生的不耐热肠毒素（ＬＴ）不仅是很强的口服免疫原,而且其粘膜免疫佐剂作用显著。ＬＴ的毒性限制了它的直接使用,希望通过体外定点诱变技术,获得具有粘膜免疫佐剂作用的ＬＴ减毒株。方法：以人源ＬＴ基因为研究对象,首先构建了重组质粒ｐＵＣ１９－ＬＴ,然后用单引物ＰＣＲ法和重叠延伸ＰＣＲ法分别构建了ＬＴ Ｑ７和Ｋ６３基因突变体。结果：ＣＨＯ细胞体外试验和家兔肠结扎体内试验毒性测定的结果表