表皮细胞培养最佳条件的探索

目的：研究表皮细胞培养的最佳条件,为进一步将其作为皮肤组织工程种子细胞奠定基础。方法：以DMEM作为基础培养液,改变培养条件后,计数2周内克隆形成数,检测细胞增殖能力,确定最佳条件。结果：表皮细胞以分离酶分离可得到大多数基底细胞,在培养液pH值为7．0－7．2,钙离子浓度为0．4mmol/L,血清浓度为18％,温度为36℃,CO2浓度为6％时,表皮细胞克隆形成数量高。结论：在最佳培养条件下,表皮细胞生长状态良好,为人工表皮的构建奠定了基础。     

高功率脉冲微波辐照对大鼠血清激素水平影响的研究

目的：通过对高功率脉冲微波（HPPMW）辐照后Wistar大鼠血清中睾酮（Testo)、雌二醇（E2）、促甲状腺激素（TSH）、游离甲状腺素T4（FT4）、皮质醇（Cort)、醛固酮（Ald)及生长激素（HGH）的动态观察,以探讨HPPMW对内分泌系统的影响。用高功率脉冲微波源,以功率密度为3050W／cm^2脉冲微波（频率为5．4GHz,脉宽为26ns)辐照辐照组动物。于辐照后1h,6h,24h,7d,14d及28d分别采血,用放射免疫法在FT630放免疫定仪上进行统一测定。所有数据经SPSS8．0统计处理。结果：大鼠被辐照后,其血清E2在早期变化不明显,但在14d时明显升高（P＜0．01）;Testo辐照后1h和14d明显下降（P＜0．05）;TSH于辐照后逐渐升高,14d到28d时明显增高（P＜0．05）;FT4辐照后1h明显升高（P＜0．05）;TSH于辐照后逐渐升高,14d到28d时明显增高（P＜0．05）;FT4辐照后1h明显升高（P＜0．05）后逐渐降低,在28d下降到最低点（P＜0．01）;Cort辐照后1h即升高,14d达到峰值（P＜0．05）;Ald于照后6h-14d略低于对照组,28d恢复;HGH辐照后明显低于照前水平,在28d下降到最低点（P＜0．05）。结论LHPPMW可引起大鼠血清激素水平的紊乱。既有早期影响,也表现为一定的持续效应。提示HPPMW可能直接引起大鼠内分泌系统的损伤。     

壳聚糖无纺布敷料对大鼠烧伤创面的促愈作用研究

壳聚糖是甲壳质的脱乙酰基产物 ,是一种多糖物质 ,其化学名为 β(1 4 ) 2 氨基 2 脱氧 Ｄ 葡聚糖。据文献报道 ,壳聚糖对伤口愈合有一定的促进作用[1] ,并可能有止血作用[2 ] 。本研究旨在动物皮肤烧伤创面愈合模型上 ,对我院卫生装备研究所研制的壳聚糖无纺布敷料对烧伤创面的作用及其机制作一探讨 ,并与临床常用敷料作对照 ,为临床提供新型、实用、经济、效佳的敷料提供实验依据。1　材料和方法雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 4 8只 (由军事医学科学院动物中心提供 ) ,随机分为包扎组 (30只 )和暴露组 (18只 )。以 2 %戊巴比妥钠 (30ｍｇ/ｋｇ…     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的　观察TGFβ1正、反义基因转染6 0 Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法　采用脂质体介导法进行基因稳定转染 ,转染细胞经PCR ,DNAdotblot鉴定和RNAdotblot分析。结果　选择 5Gy照射细胞 ,采用LipofectAMINE将TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo TGFβ1和pMAMneo AntiTGFβ1转入HELF ,转染细胞经G418抗性筛选出来 ,并且在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA ,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性 ,且可用neo基因特异的PCR引物扩增出 2 76bp的阳性片段。对提取的RNA用地高辛标记的TGFβ1探针和α1(Ⅰ )寡核苷酸探针经RNAdotblot分析表明 ,转染pMAMneo AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平下降 ,而转染pMAMneo TGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA ,前者表达水平比未转染细胞低 ,后者则略高。 结论　TGFβ1反义基因转染6 0 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1mRNA含量水平减少 ,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低     

新型脱细胞骨基质-壳聚糖复合支架的生物相容性研究

[目的]评价新型脱细胞骨基质-壳聚糖(ABECM/CS)骨组织工程复合多孔支架的生物相容性和安全性,为临床应用提供实验依据.[方法]采用联合脱细胞方法对猪股骨进行处理后制备脱细胞骨基质/壳聚糖骨组织工程复合支架.分离、培养兔骨髓间充质干细胞传代后进行实验.采用MTT法观察材料浸提液于1、3、5、7d时进行细胞毒性实验观察细胞的活性;将材料浸提液与稀释血混合离心后观察红细胞溶血情况,检测OD值计算相对溶血率;将材料浸提液经静脉注入兔体内进行热原实验,在规定时间内观察兔体温变化.[结果]细胞毒性实验显示,培养1、3、5、7d后各时间段内三组OD值两两比较(P＞0.05)无显著差异,表明材料无毒性.在溶血实验中观察实验材料的溶血率为3.0％,在标准值溶血率5％范围内,提示无溶血现象发生.热原实验结果显示每只兔体温升高均低于0.6℃,且3只兔体温升高总度数低于1.4℃,符合热原检测规定,复合材料无致热作用.[结论]经联合脱细胞处理制备的ABECM/CS复合支架无细胞毒性、无溶血反应、无热原性,具有良好的生物相容性和安全性,可作为构建组织工程骨的支架载体材料.     

声脉冲辐射力弹性成像在甲状腺实性结节性质鉴别诊断中的价值

目的观察声脉冲辐射力弹性成像（ARFI）技术评估甲状腺实性结节弹性的效果,探讨其诊断价值。方法回顾性分析经手术病理证实的76例患者81个甲状腺结节的ARFI特征,根据声触诊组织定性成像（Ⅷ）模式将甲状腺结节的弹性分为6级,与病理结果对照分析甲状腺恶性结节诊断界点的临床价值;根据声触诊组织定量成像（VTQ）模式检测结节及其周边正常甲状腺组织的剪切波速度值（swV）,并绘制ROC曲线、找出最佳诊断界点。结果以VTl分级Ⅳ级作为甲状腺恶性结节的诊断界点,准确性、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均〉80％;良恶性结节的swV有显著差异,ROE曲线下面积为0．9、最佳诊断临界点为2．85m／s,准确性、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均〉86％。结论ARFI技术可定性、定量评估甲状腺结节弹性,与常规超声检查结合可提高甲状腺良恶性结节的鉴别能力。     

混合热休克蛋白/肽复合物疫苗疫防治小鼠肉瘤

我们从肿瘤细胞提取的不同类型的HSPs／肽复合物对小鼠S180肉瘤模型进行了免疫防治研究。现将结果报道如下。     

电磁脉冲辐射对小鼠妊娠和子代的影响

6～ 8周龄二级雌性昆明小鼠受孕后 6～ 8天接受 6× 1 0 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射或照射后 1 4天内、1 5～ 2 8天受孕 ,在受孕后第 1 8天活杀 ,用足孕期畸形学指标进行分析 ,以探讨电磁脉冲辐射对小鼠妊娠和子代的影响。结果显示 ,电磁脉冲照射后雌鼠体重增加值、大多数脏器重量、脏器 /体重比值均无明显改变 ,但存活子鼠尾长均缩短 ;孕后 6～ 8天照射和雌鼠照射后 1 5～ 2 8天受孕 ,雄性子鼠比例降低 ;雌鼠照射后 1 4天内及 1 5～ 2 8天受孕 ,子鼠体重均下降。辐射组死胎率和胚胎吸收率均较正常对照组增高 ,尤以雌鼠照射后 1 4～ 2 8天受孕最明显 ,分别为对照组的 5 2和 3 8倍。结果表明 ,雌性小鼠无论是受孕前 ,还是受孕后接受电磁脉冲照射均可影响妊娠和子代发育     

电磁脉冲辐射对小鼠睾丸结构的影响

目的 :探讨不同场强的电磁脉冲辐射对睾丸结构的影响。方法 :二级昆明雄性小鼠 114只 ,随机分为辐射组和对照组。辐射组小鼠分别接受 8× 10 3 ,2× 10 4,6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射 ,于照射后 6h ,1d ,3d ,7d ,14d和 2 8d观察睾丸和附睾病理学改变。结果 :3种场强的电磁脉冲辐射均未引起小鼠肛温和阴囊皮肤温度的明显升高 ,但睾丸却发生显著的各级生精细胞水肿、坏死和脱落 ,曲细精管内成熟精子稀少和缺失 ;最敏感的靶细胞是精原细胞和精子细胞 ;周边部曲细精管病变最明显 ;病变的严重程度与场强的大小呈正相关。结论 :8× 10 3 ～ 6× 10 4V/m电磁脉冲 5次重复全身照射小鼠 ,可引起小鼠睾丸严重的非热效应性生精细胞结构损伤。     

小鼠S180肉瘤肿瘤模型生长规律及热休克蛋白的表达

目的：研究Balb／C小鼠S180肉瘤细胞接种后肿瘤发生及生长规律以及不同热休克蛋白(heat shock protein，HSP)在小鼠S180肉瘤细胞中的表达，为HSP的分离、纯化及免疫治疗提供可用的动物模型。方法：三组不同剂量S180肉瘤细胞(10万个、100万个、500万个)于Balb／C小鼠背部皮下接种，观察肿瘤发生率、肿瘤组织生长规律、小鼠生存时间，取部分肉瘤细胞进行热休克处理后进行免疫组化观察。结果：S180肉瘤细胞接种Balb／C小鼠的肿瘤发生率为100％，不同剂量的肿瘤生存期限差异有显著性意义，肿瘤大小无显著差异；对HSP的免疫组化观察表明：HSP60、70、90α、grp94均为阳性表达，其中HSP60、grp94强阳性，热休克处理后HSP70阳性增强，HSP90α阳性减弱。结论：Balb／C小鼠S180肉瘤为观察HSP表达及提取、纯化提供稳定的动物肿瘤模型，还可用于进行HSP疫苗治疗肿瘤的实验研究。