A study on improvement of expression of human G－CSF cDNA transferred with retroviral double－copy vector

ＡｓｔｕｄｙｏｎｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＧ－ＣＳＦｃＤＮＡｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｗｉｔｈｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｏｕｂｌｅ－ｃｏｐｙｖｅｃｔｏｒＧｕｏＢａｏｙｕ（郭葆玉）；ＺｈａｎｇＳｕｙｉｎｇ（张淑英）；ＸｕＨｕｉ...     

Relationship between expression of CD40-CD40 ligand system and serum cholesterol levels in patients with hypercholesterolemia

Hypercholesterolemia is associated with the pathogenesis of atherosclerosis. Enhanced levels of thrombin, fibrinogen and factor Ⅶc directly correlate with cholesterol levels.1 Activated platelets adhere to the intact endothelium and induce inflammatory responses in the endothelium, which substantially contribute to the early phase of atherosclerosis. Emerging lines of evidence support the role of CD40-CD40L interactions in atherosclerosis, thrombosis and inflammation.2 In atherosclerosis, inhibition of the CD40-CD40L interaction in LDL receptors or ApoE-deficient mice prevents the initiation of atherosclerosis and the evolvement of established atherosclerotic lesions to more advanced lesions.     

寻常型天疱疮自身抗原Dsg3片段的重组表达和特异性细胞反应

目的 :探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3在特异性T细胞反应中的作用 ,为自身免疫性疾病机制的研究提供依据。方法 :根据Genbank中的Dsg3序列分析 ,采用RT PCR法克隆自身抗原Dsg3E1,E2 ,E3,E4,E5多肽片段的cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,导入大肠杆菌JM10 9中表达重组融合蛋白并经GST层析柱纯化 ;进一步与PV患者及疾病对照组、正常对照组T细胞混合培养 ,观察T细胞增殖反应。结果 :Dsg3E1,E2和E4,E5可刺激PV患者T细胞反应 ,而不与疾病对照组、正常对照组反应。结论 :Dsg3E1,E2和E4,E5中包含T B细胞作用相关的抗原表位 ,在PV发病中起重要作用。     

T细胞表面6种细胞表型的变化与大肠癌分期及术式的关系

应用流式细胞仪检测３９例大肠癌患者手术前后Ｔ细胞表面６种细胞表型，发现随着Ｄｕｋｅｓ分期的增高，术前ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ６９及ＣＤ３＋／ＨＬＡ－ＤＲ＋逐渐下降，ＣＤ８逐渐增高（Ｐ＜０．０５）；Ａ期大肠癌患者机体免疫功能活跃，术前ＣＤ３、ＣＤ４高于对照组（Ｐ＜０．０５），ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ３＋／ＨＬＡ－ＤＲ＋与对照组相同；根治及姑息性切除术后，ＣＤ８降低，ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ６９、ＣＤ３＋／ＨＬＡ－ＤＲ＋升高（Ｐ＜０．０５）；肿瘤未切组术后ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ４／ＣＤ８进一步下降（Ｐ＜０．０５）。提示大肠癌患者术前免疫状态与疾病的程度呈负相关，切除肿瘤有益于改善患者细胞免疫功能。     

抗Ⅰ型胶原单克隆抗体的研制和初步应用

<正> 胶原蛋白是机体细胞外组织的主要基质成分,至少可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型5种不同构型的胶原类型。各类胶原在不同的组织器官中的分布区域和含量比例各异。将针对不同类型胶原的特异性抗体与间接免疫荧光技术相结合,可在分子水平上定性或半定     

携带hIL-2cDNA的逆转录病毒载体的构建及其在人肝癌细胞中的特异表达研究

将人白细胞介素２（ｈＩＬ-２）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＭＮＳＭ的ＰＬ位点　，分别构建了转录受ＳＶ４０早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ。用脂质体转染法将ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ分别转导ＰＡ３１７包装细胞，测质粒转染率为（５～２０）×１０~(－３)克隆／μｇＤＮＡ·１０~６细胞，病毒感染率为（５．４～４５０）×１０~４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞，Ｎｅｏ~Ｒ克隆经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明ｈＩＬ－２ｃＤＮＡ转入人肿瘤细胞并整合，　Ｒ　ＮＡ斑点杂交及ＩＬ－２活性表达分析证明，人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动ｈＩＬ－２ｃＤ－ＮＡ在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。     

B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚群(微量全血法)

本实验利用MRC W/OX系列单克隆抗体和流式细胞仪(Epics C型)首次建立了微量全血检测大鼠外周血T细胞亚群的方法,并报告了正常成鼠外周血T细胞亚群分布(n=60):OX-19+细胞占65.45±5.98％(SD),W3/25~+细胞占47.17±6.45％,OX-8~+细胞占24.26±6.18％。W3/25~+亚群和OX-8~+亚群比值为2.12±0.11(SEM)。部分标本流式细胞仪分析结果和荧光显微镜的结果无明显差异(P>0.05)。在抗体染色条件方面,发现当温育温度过高(30℃)时,染色阳性细胞率有明显下降(P<0.001)。实验证实,用微量全血染色不仅简便、可靠、重复性好,且用血量少。同时避免了常规Ficoll分离法时种种弊病。因此用本法可动态观察大鼠外周血T细胞亚群的变化,为进一步研究在药理、病理和免疫学实验中的细胞免疫功能变化提供了方便。     

慢性乙肝患者NK,ADCC活性及其对IFN—α,IFN—γ的反应

本文用Hela细胞乳酸脱氢酶释放法测定了42例慢性乙肝病人外周血NK、ADCC活性及其对IFN-α100U/ml、500U/ml及IFN-γ500U/ml预处理4小时后的反应。结果显示,病人PBL NK,ADCC活性与正常对照有显著差别,经IFNs处理后,其NK或/和ADCC活性均有不同程度的升高反应,从而提示了IFNs在慢性肝病治疗中的重要作用。