体外培养APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响

背景：积极探索结肠癌相关基因及抑癌基因已成为新的研究热点,人肿瘤坏死因子α是一个重要的促炎因子和免疫调节因子,对肿瘤的免疫治疗具有一定的疗效。目的：观察体外培养海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate,APA）微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响。方法：采用前期建立的制备方法,用APA微囊分别包裹人肿瘤坏死因子α/293细胞,APA微囊化0/293细胞。取对数生长期结肠癌（Lovo）细胞,配制成所需浓度的细胞悬液,接种24孔板培养,分别加入低、中、高剂量稳定转染的APA微囊化肿瘤坏死因子α/293,即分为5个实验组,APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞低剂量组、中剂量组、高剂量组、阴性组为APA微囊化0/293细胞组,阳性组加入肿瘤坏死因子α,MTT法检测490nm吸光度;通过对人肿瘤细胞增殖抑制实验,观察对结肠癌细胞（Lovo）增殖的抑制作用。结果与结论：体外培养中,加入APA微囊化0/293细胞组对结肠癌细胞增殖无抑制作用;而APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞中、高剂量组和阳性组,在24,48,72h的A值低于APA微囊化0/293细胞组（P〈0.05）,提示APA微囊化人肿瘤坏死因子α/293细胞所分泌肿瘤坏死因子α对结肠癌细胞有增殖抑制效应,均呈现出良好的数量依赖关系。     

体外培养下可持续分泌人血管抑素和内皮抑素基因工程细胞对血管生成的抑制效应

背景：以往实验构建了可持续分泌人血管抑素和内皮抑素的基因工程细胞,即人血管抑素/293细胞和人内皮抑素293细胞,并已证明可持续分泌人血管抑素蛋白和人内皮抑素蛋白。但尚不了解其分泌物是否能发挥血管生成的抑制作用。 目的：观察以基因工程技术构建的人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞对鸡胚尿囊膜血管新生的抑制效应。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-06/2007-01在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。 材料：Hek/293细胞为人胚胎肾细胞,由解放军军事医学科学院提供。人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞由课题组前期构建。SPF级鸡胚购自北京维通利华实验动物有限公司。 方法：将鸡胚消毒后,置于37 ℃无菌恒温箱中孵育5 d,在距胚头1 cm两条卵黄静脉之间的卵壳投影部位磨切暴露尿囊膜,制成假气室,用无菌滤纸封闭窗口,制成鸡胚尿囊膜模型,备用。用灭菌蒸馏水配制体积分数为0.5%甲基纤维素溶液,制成甲基纤维素小杯。卵壳开窗后第3天,分别吸取浓缩的293细胞、人血管抑素/293细胞、人内皮抑素/293细胞培养上清液各20 μL,或人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞培养上清液各10 μL,加于甲基纤维素小杯中,将其置于鸡胚尿囊膜的两条大血管之间的无血管区。 主要观察指标：观察尿囊膜血管生成的变化。 结果：共培养9 d时,与单纯293细胞上清液组相比,人血管抑素/293细胞上清液或人内皮抑素/293细胞上清液组,甲基纤维素小杯内及邻近区的鸡胚尿囊膜血管明显发育不良,血管分布稀疏,数量明显减少,其一级血管数量虽未明显减少,但其管径较细,而二级血管和三级以下的血管数量明显减少、管径明显变细,伸入尿囊膜边缘区的血管数量减少,管径明显变细。与人血管抑素/293细胞组或人内皮抑素/293细胞组相比,人血管抑素/293细胞＋人内皮抑素/293细胞组的一级血管数量和管径未见明显变化,而其二级血管和三级以下血管数量明显减少,血管树消失。 结论：人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞的分泌物对鸡胚尿囊膜的血管新生均具有明显的抑制作用,且联合用药抑制作用增强。     

黄芩苷对AB25-35诱导人神经原母细胞瘤SH-SY5Y凋亡的保护作用

目的：探讨黄芩苷对Aβ诱导的神经细胞凋亡的保护作用,同时通过对诱导凋亡的关键因素综合分析阐明其作用机制。 方法：①实验方法及分组：正常对照组,神经元母细胞瘤SH-SY5Y无血清培养;模型组,模型组加终浓度为25μmol/L 的Aβ25-35处理24h;黄芩苷治疗组,黄芩苷预处理1h,再加终浓度为25μmol/L的 Aβ25-35处理24h,大剂量组采用100μM,小剂量组采用50μM。②实验评估：各实验组作用24小时后,收集细胞上清ELISA测定细胞NO、LDH分泌;MTT实验测定各组细胞存活率;流式细胞仪测定细胞凋亡及线粒体膜电位的改变;RT-PCR检测caspase-3的mRNA水平。 结果：MTT实验显示,Aβ25-35处理后SH-SY5Y细胞的存活率明显下降（p<0.01）,而黄芩苷各治疗组则显示出明显的保护作用（p＜0.05,p＜0.01）;细胞上清LDH活性测试显示,Aβ25-35组上清中的LDH明显升高（p＜0.01）;黄芩苷组各治疗组与模型组比差异显著（p＜0.05,p＜0.01）;比色法测定细胞上清中NO分泌显示,Aβ25-35处理后细胞NO分泌明显上升（31.64±1.96μM）,而黄芩苷各治疗组均能有效抑制NO的产生,黄芩苷100μM（9.43±0.63μM）,黄芩苷50μM（23.41±0.94μM）p＜0.01;流式细胞仪分别测定细胞凋亡率及线粒体膜电位,结果显示与正常对照组比较Aβ25-35明显诱导了细胞凋亡,同时线粒体膜电位也明显下降（p＜0.01）,而黄芩苷各治疗通过保护线粒体膜电位有效抑制了凋亡的发生发生;进一步的caspase-3mRNA表达测定中也显示黄芩苷各组均能明显抑制caspase-3的表达。 结论：本研究结果明确了黄芩苷能有效抑制Aβ25-35诱导的神经元细胞的调亡,在进一步机制研究中显示了黄芩苷同过抑制自由基损伤、调亡分子caspase-3的表达以及保护线粒体正常功能等凋亡发生的关键环节保护了神经元细胞。     

汉族和蒙古族维生素D受体基因多态性分布的研究

目的 分析中国汉族与蒙古族维生素D受体（VDR）基因多态性分布.方法 应用PCR-RFLP技术,分别对我国179名汉族和112名蒙古族健康绝经后妇女的VDR基因型进行分型,并计算其基因频率分布.结果 汉族和蒙古族绝经后妇女bb基因型频率分别为90.5%和50%,BB基因型频率分别为0%和4.46%,汉族与蒙古族之间VDR基因型频率分布差异非常显著（P＜0.001）.结论 我国汉族与蒙古族之间VDR基因型多态性具有种族差异性,这种种族差异性与骨质疏松的相关性有待于进一步研究.     

我国四种民族维生素D受体基因多态性分布的研究

目的 维生素D受体（VDR）基因与骨密度和骨量密切相关。但是它在不同人群和种族中的分布仍有差异。本研究旨在分析中国汉族、维吾尔族、哈萨克族和蒙古族维生素D受体基因多态性分布。方法 应用聚合酶链反应限制性片长度多态性技术，分别对我国179名汉族、122名维吾尔族、63名哈萨克族和112名蒙古族健康绝经后妇女的VDR基因型进行分型，并计算其基因频率分布。结果 汉族、维吾尔族、哈萨克族和蒙古族绝经后妇女bb基因型频率分别为90．5％、69．67％、38．1％和50％，上述四种民族BB基因型频率分别为0％、4．1％、6．35％和4．46％，汉族与维吾尔族、哈萨克族和蒙古族之间VDR基因型频率分布比较，差异有非常显著性（P〈0．001），哈萨克族与欧美人种比较，VDR基因型相差不显著。结论 我国汉族与维吾尔族、哈萨克族和蒙古族之间VDR基因型多态性具有种族差异性，这种种族差异性与骨质疏松的相关性有待于进一步研究。     

我国维吾尔族妇女维生素D受体基因多态性与骨密度关系的研究

目的研究我国维吾尔族妇女维生素D受体(VDR)基因多态性分布和骨密度、骨质疏松的关系.方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对30例维吾尔族妇女进行VDR基因分型.并进行双能X线骨密度(BMD)仪的检测.结果 VDR基因检出bb、Bb、BB,基因型分别为60%、33.3%、6.7%.bb、Bb、BB基因型的BMD分别降低为61%(11/18)、50%(5/10)、50%(1/2).结论就调查例数而言:中国维吾尔族妇女VDR基因多态性的分布频率以bb基因型最多,其次为Bb型,BB型仅占6.7%.BMD检测显示BMD降低以bb型较显著、Bb型次之.     

不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的相关因素

目的探讨不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的高危因素。方法回顾性分析2016年3月至2018年3月解放军总医院睡眠医学中心OSAHS患者190例,根据睡眠呼吸暂停低通气指数分为轻度组54例(5~15次/h)、中度组(16~30次/h)57例和重度组(>30次/h)79例,比较3组患者便携式睡眠呼吸监测(PM)结果,多分类logistic回归分析不同程度OSAHS的危险因素。应用SPSS 22.0统计软件对数据进行分析。依据数据类型采用单因素方差分析或χ2检验进行组间比较。结果3组患者睡眠呼吸暂停低通气指数、最低血氧饱和度、平均血氧饱和度、氧减指数和呼吸暂停次数差异均有统计学意义(P<0.05)。多分类logistic回归分析结果表明年龄40~50岁是轻度和重度OSAHS的危险因素[OR=5.740,95%CI 1.657~19.930,P=0.006;OR=0.120,95%CI 0.025~0.575,P=0.008]。年龄>50岁是轻度OSAHS的危险因素[OR=3.325,95%CI 1.036~10.674;P=0.043]。颈围是不同程度OSAHS的危险因素。体质量指数是中度和重度OSAHS的危险因素[OR=0.832,95%CI 0.694~0.996,P=0.045;OR=0.903,95%CI 0.777~1.051,P=0.018]。结论颈围是不同程度OSAHS的危险因素,体质量指数与OSAHS患者病情加重相关,密切关注它们对控制OSAHS病情具有重要意义。     

APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化

了解海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(L-EK)分泌的变化。将APA-BCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔。7或8天时采取脑脊液,观察APA-BCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中L—EK的含量。移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8．8降为2．4;脑脊液中APA—BCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91．2％降为89．1％;L-EK含量较移植前增加了1．65倍。将APA-BCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应。     

转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响

背景：生物型人工肝采用猪肝细胞或肝癌细胞作为移植物来源存在动物源性疾病和致瘤性的担心,而正常成人肝细胞也具有一定的局限性。 目的：通过检测转染前、后正常成人肝细胞的活率、生长曲线和细胞周期的变化,了解转染SV40永生化基因对正常成人肝细胞生长特性的影响。 方法：培养不同时间的正常人肝细胞和永生化正常成人肝细胞,采用胎盘蓝染色和AO-PI染色,于培养后1~8 d采用MTT染色法计数细胞活率;用MTT比色法测定细胞的A值并绘制生长曲线;采用流式细胞术检测细胞的生长周期。 结果与结论：3种染色法检测显示两种细胞的活率为95%~99%,存活率无明显差异。转染前、后的两种正常成人肝细胞的生长曲线无明显差异,均在培养 3~5 d时呈指数型生长,但转染后正常成人肝细胞较转染前增殖略快。采用流式细胞术测得的两种肝细胞的细胞周期：转染后肝细胞S期细胞占65.64%,G0~G1期细胞占34.36%,G2期细胞占0%;转染前肝细胞S期占21.27%,G0~G1期细胞占62.64%,G2期细胞占12.09%,提示转染后肝细胞的S期细胞明显增多,增殖能力增强。转染SV40永生化基因的正常成人肝细胞较转染前细胞的增殖活力增高,存活率无明显差异,提示转染后细胞增殖能力更强。     

脂质体介导的bFGF-EGFP基因在前庭上皮支持细胞中的表达及生物学作用

目的探讨脂质体介导的bFGF基因在前庭上皮支持细胞中的表达情况及生物学作用。方法利用脂质体将携带绿色荧光蛋白的bFGF基因质粒导入前庭上皮细胞内,利用绿色荧光蛋白的表达以及RT-PCR技术检测基因的表达,并利用免疫组织化学等形态学技术手段观察其生物学作用。结果脂质体介导的bFGF基因在细胞内表达良好,转染成功的细胞形态发生明显变化,但MyosinⅦa表达阴性。结论脂质体介导的bFGF基因可以在前庭上皮细胞内获得良好表达,并促使细胞形态向毛细胞转化。