IgA肾病的中医药临床研究进展

综述了近几年中医药对IgA肾病的病因病机、辨证分型、临床用药情况,指出存在问题并对治疗研究进行展望。     

肾间质纤维化的中西医治疗研究进展

肾间质纤维化几乎是所有慢性肾脏疾病进行性发展的共同通路,是导致慢性肾功能衰竭(CRF)的病理学基础,现在很多研究表明间质纤维化比原发性肾小球疾病更易导致肾功能进行性恶化,因此积极寻找治疗及干预肾间质纤维化的方法将对慢性肾脏疾病的治疗产生重大的影响。目前许多西医学者对其研究很多。中医药是我国传统的医学宝库,众多的临床实践表明中医药对肾脏疾病有着很好的疗效。近年来,动物实验证实单位中药及复方中药对延缓肾间质纤维化有着很好的疗效。现笔者分别将近年西医及中医治疗肾间质纤维化的进展分述如下。1西医方面1·1肾间质纤…     

从溶组织内阿米巴教学中得到的启示

激发学生学习的兴趣现在一直是教学改革的大课题。在溶组织内阿米巴的教学过程中引入一定数量的非医学知识而又与其密切相关的信息,调动学生学习的积极性,提高学习兴趣,收到良好的课堂教学效果。     

Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性

目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。     

HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析

初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。     

基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠的实验研究

目的：应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法：根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25bp左右的sgRNA并进行合成, sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果：成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10bp和11bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论：利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。     

长径≤1 cm高风险甲状腺结节主动监测肿瘤学结局的单中心研究

目的报道长径≤1 cm高风险甲状腺结节患者主动监测的肿瘤学结局。方法前瞻性、单中心队列研究, 纳入2017年1月至2022年11月就诊于中国医学科学院北京协和医院的534例经超声评估为具有高风险甲状腺结节(美国甲状腺协会指南甲状腺结节超声风险分层标准评估为高度可疑恶性结节)的患者, 并进行主动监测, 入组患者每6个月随诊1次, 行体格检查及颈部超声检查。评估随诊过程中患者的肿瘤学结局(疾病进展、疾病复发/转移率等), 同时探索了肿瘤体积变化对于评估疾病进展的价值。结果所有患者中, 女413例(77.3%), 男121例(22.7%), 年龄(42.6±11.8)岁。在中位45.6个月(3.5～176.0个月)的随访期间, 534例高风险甲状腺结节患者中, 共26例(4.9%)出现疾病进展, 其中19例(3.6%)肿瘤长径增大≥3 mm, 7例(1.3%)发现淋巴结转移。47例患者因各种原因行延迟手术, 其中29例原因为意愿改变。延迟手术患者中, 疾病进展患者与改变意愿患者的病理结果与随诊结局无明显差别。年龄≤40岁患者的5年疾病进展累积发生率较>40岁患者高(4.9%比1.9%,...     

脾肾阳虚大鼠脾中Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶活性变化的研究

【目的】观察脾肾阳虚状态下大鼠脾脏中主要Ⅰ相和Ⅱ相药物代谢酶活性的改变。【方法】采用连续17 d灌胃大黄水煎液同时注射氢化可的松的方法复制大鼠脾肾阳虚模型,观察脾脏中6种Ⅰ相代谢酶(CYP2C19、CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2、CYP2C8、CYP3A4)和4种Ⅱ相代谢酶[苯酚磺基转移酶(PST)、尿苷二磷酸葡醛酸转移酶1(UGT1)、谷胱甘肽转移酶(GST)、雌激素硫酸转移酶(SULT1E1)]的活性变化。【结果】模型组PST、UGT1、GST、SULTl E1活性显著低于正常组(P0.05或P0.01);CYP1A2活性显著高于正常组(P0.01),而CYP2C19、CYP2D6、CYP2C8、CYP3A4、CYP2C9等酶的活性无显著变化(P0.05)。【结论】脾肾阳虚状态下脾脏药物代谢酶特别是II相代谢酶的活性会发生显著改变。     

附子半夏汤对阳虚模型大鼠不同脏器能量代谢的影响

目的:观察阳虚模型大鼠不同脏器能量代谢水平及附子半夏汤对阳虚模型大鼠不同脏器能量代谢的影响。方法:SD大鼠30只,随机分为3组,分别为正常组、模型组、中药组,除正常组外,其他2组采用肌注氢化可的松注射液,同时灌胃大黄水煎液复制阳虚大鼠模型。造模17天后,中药组灌胃附子半夏汤水煎液2周,给药结束后分别检测各组大鼠心、肝、脾、肾、小肠组织Na~+-K~+-ATP酶的活力。结果:造模第17天时,模型组和中药组大鼠出现体毛枯疏无泽、活动减少、精神不振、爪甲冰凉、体质量增长迟缓、肛温下降等表现。与正常组比较,模型组和中药组大鼠第17天和第31天体质量较低,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05);造模第17天时,模型组和中药组肛温均显著性下降,差异均有统计学意义(P0.01)。与给药前比较(即第17天),中药组给药后(即第31天)肛温出现显著性上升,差异有统计学意义(P0.05)。实验结束后,与正常组比较,模型组的肝脏、心脏、肾脏、小肠的Na~+-K~+-ATP酶活性均显著性下降,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,中药组的心脏、肾脏、脾脏、小肠的Na~+-K~+-ATP酶活性增高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:阳虚模型大鼠不同脏器能量代谢水平均显著下降,附子半夏汤水煎液能显著提高阳虚大鼠心、肾、脾、小肠组织的能量代谢水平。     

国医大师张大宁治疗糖尿病肾病用药经验

国医大师张大宁教授提出的“肾虚血瘀论”“补肾活血法”为治疗诸多慢性肾病及疑难顽疾开辟了新思路。张教授治疗糖尿病肾病以补肾扶正为基础,兼顾活血化瘀,补肝肾兼固涩,同时注重阴阳双补,调理脾胃。在糖尿病肾病的辨证论治上,张大宁教授有独特的用药经验。