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目的 克隆伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白(PbTIP)类似基因,原核表达PbTIP重组蛋白,并制备其抗血清。 方法 在GenBank中检索PbTIP类似基因序列,设计特异性引物,从伯氏疟原虫ANKA株扩增获得该基因cDNA片段,克隆入原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白。用重组蛋白GST-PbTIP包涵体免疫BALB/c小鼠,以间接荧光抗体试验(IFAT)和Western blotting鉴定产生的抗体。 结果 获得了纯化的重组蛋白GST-PbTIP及其相应抗体,该抗体可以识别相对分子质量(Mr)约为60 000的伯氏疟原虫感染红细胞内的PbTIP蛋白。 结论 获得PbTIP重组蛋白及其相应抗体。 相似文献
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目的利用血脑屏障分隔小胶质细胞与外周巨噬细胞,探讨小胶质细胞在实验型脑型疟(experimental cerebral malaria,ECM)发生中的活化特征。方法利用依文思兰渗出法确定ECM小鼠血脑屏障开放时间,在不同感染时间点,采用流式细胞技术和间接免疫荧光法检测小胶质细胞的活化特征,采用实时荧光定量PCR技术检测炎症和活化因子的变化。结果ECM小鼠血脑屏障显著开放始于感染后第6 d。感染后第5 d,脑内促炎因子、巨噬细胞活化相关因子的转录水平以及CD11b+、CD45+细胞的占比和数目均显著上调。CD11b+细胞可根据CD45表达量分群,其中CD45high亚群占比在感染后第5 d下调而第7 d上调。结论小胶质细胞参与ECM小鼠脑内炎症反应,且其活化与CD45表达量相关,CD11b+CD45high可作为活化小胶质细胞的标志物。 相似文献
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目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型奠定了良好的基础。 相似文献
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目的 建立可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的构建方法 并优化其实验参数.方法 体外合成可编码随机12肽的DNA片段.将该DNA片段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体pQCX-IX-EGFP,连接产物电击转化大肠杆菌,转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库,其间通过大量的实验优化:插入片段与载体的摩尔比、连接反应的条件、连接产物的DNA浓度以及电击转化参数等关键的实验参数.结果 按照本研究所确立的方法 和最佳实验参数构建的可表达随机12肽库的逆转录病毒初级文库的滴度为2.85×105cfu/mL,成功转化子的比例接近100%,编码随机12肽的DNA序列正确率为83%.结论 成功建立了可表达随机12肤库的逆转录病毒初级文库的构建方法 ,并确定了最佳的实验参数,为后续的可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立奠定了良好的基础. 相似文献
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新中国成立以来,我国在寄生虫病防治方面积累了丰富经验,防治水平大幅提升。但是,与发达地区相比,西部地区寄生虫疾病预防控制水平差距仍然较大。尤其是近年来,随着“一带一路”倡议持续推进,西部地区成为国家对外开放门户,“一带一路”沿线国家输入性寄生虫病给该地区疾病预防控制带来更大挑战。如何在扩大对外开放的同时,最大限度避免输入性寄生虫病在国内传播流行,已成为公共卫生领域必须深入思考的重要问题。为探讨“一带一路”工作推进中可能发生的寄生虫病传播风险,本文就“一带一路”沿线国家寄生虫病流行特点及其潜在威胁简要作一综述,以期为我国高效应对输入性寄生虫病提供参考和建议。 相似文献
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