湖北地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性

目的 了解湖北地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布及其与临床的相关性。 方法 选择湖北地区HBV DNA阳性的慢性HBV感染者190例,其中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者52例、慢性乙型肝炎56例、重型肝炎32例、肝硬化22例、原发性肝癌28例,应用多对型特异性引物-聚合酶链反应检测HBV的基因型。 结果 多对HBV型特异性引物法可快速准确鉴定HBV的基因型。190份HBV DNA阳性血清标本中,B基因型140例(73.7％),C基因型42例(22.1％),BC混合型8例(4.2％),未发现A、D和E基因型;B基因型在重型肝炎和肝癌患者中占绝对优势,分别为87.5％和89.3％,显著高于HBsAg携带者的67.3％;B基因型患者血清丙氨酸氨基转移酶水平(253.1±306.7)U／L高于C基因型患者的(154.1±192.9)U／L,差异有统计学意义(P<0.05);除HBsAg携带者外的慢性HBV感染者中,B基因型患者血清抗-HBe阳性率50.5％(53／105)显著高于C基因型的18.5％(5／27),P<0.01。 结论 多对型特异性引物同时进行聚合酶链反应的基因分型方法可用于HBV基因型的流行病学调查;湖北地区存在HBV的B、C和BC混合基因型,B型为本地区的优势基因型并在严重肝病和肝癌中的比例较高,基因型的分布可能有较大的地区差异。     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药性及多重相关基因DNA和氨基酸序列分析

目的 了解幽门螺杆菌(Hrlicobacter pylori，Hp)对甲硝唑的耐药状况，研究相关的多重基因突变，为深入揭示Hp耐药的分子机制提供相关资料。方法 分离培养54株Hp，以琼脂稀释法检测Hp的甲硝唑最低抑菌浓度(deterimination of minimal inhibitory concentration，MIC)，用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因(rdxA、frxA、fdxB)，经分子克隆后DNA测序，分析敏感株和耐药株耐药基因的序列及其与耐药性的关系。结果 武汉地区人群Hp对甲硝唑的耐药率为67％；甲硝唑耐药基因序列分析表明，耐药临床株的rdxA和(或)frxA基因存在插入、缺失和点突变。结论 Hp对甲硝唑耐药不仅与rdxA有关，同时存在frxA、fdxB基因突变。frxA、fdxB基因的突变可能与rdxA在Hp耐甲硝唑中有协同作用。     

中西医结合治疗小儿肱骨髁间粉碎性骨折

我院近年应用尺骨鹰嘴牵引、小夹板外固定,中药外敷、内服联合治疗儿童肱骨髁间粉碎性骨折48例,疗效满意,现报告如下。1 临床资料1.1 一般资料 本组48例患儿男33例,女15例;年龄为4～13岁之间,平均7.4岁;骨折位左侧6例,右侧12例,受伤至就诊时间为3～25小时。愈后随访均在半年以上。致伤原因大部分为从高处跌下患侧手掌着地,均无明显血管、神经损伤,也无其它合并伤。骨折均为伸直型,骨折块明显移位,尤其髁间碎裂、分离明显,患肘肿胀严重,部分患儿皮肤出现张力性水泡。1.2 治疗方法 本组48例因无血管及神经损伤,无其它合并伤,故入院后立即在局麻下行尺骨鹰嘴穿针,患儿仰卧,患肢向上悬吊平衡牵行,牵行重量约患儿体重的1/7～1/10,均取屈肘位。     

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表达和B细胞表位鉴定

目的 建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHcAg）的方法并对其B细胞表位进行鉴定。方法分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段，利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体。结果 WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构。这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34肿的核心颗粒，最终纯化获得毫克级的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性，而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位，利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位，该表位在WHcAg和HBcAg高度保守。结论 建立了高效表达WHcAg的方法，制备了针对WncAg单克隆抗体。并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定，发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。     

肝癌新标志物人宫颈癌基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

目的构建表达截短型人宫颈癌基因(HCCR)-1蛋白的质粒,并进行原核表达、多克隆抗体制备。方法用逆转录聚合酶链反应法从HepG2细胞中扩增HCCR-1_(167-360) cDNA,将其克隆到原核表达载体pRSET-B上,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了表达HCCR-1(167-360)蛋白的质粒,原核表达后纯化得到了分子量约为2.70×10~4的目的蛋白,用之免疫BALB／c小鼠获得了高效价的特异性多克降抗体。结论所获得的重组HCCR-1_(167-360)蛋白纯度高,免疫原性强。获得的抗HCCR-1_(167-360)多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性,为HCCR的临床检测和研究奠定了基础。     

战时基地医院物资补给系统的研制及应用

战时基地医院的任务是为前方应急作战伤员后送后提供强有力的卫勤保障，基地医院物资补给能力直接影响到救治的质量。本院在平时物资信息化系统——《解放军第105医院物资控制系统V1．0》的基础上，研究开发了战时基地医院物资补给系统，可自动地对战时基地医院所需的物资进行综合管理，为管理者及时合理地调度卫生物资提供准确的信息。在多次战备训练和演习中应用，效果良好。     

乳链菌肽nisin Z的pH吸附法分离纯化技术研究

通过 p H吸附法 ,利用乳酸链球菌亚种 N8(L actococcus lactis subsp. lactis N8)和乳酸链球菌亚种ATCC1145 4,研究了 nisin Z分子在不同 p H环境下的吸附作用及其分离纯化效率 ,并经麦黄酮 SDS- PAGE和 RP- HPL C纯度鉴定 ,证实用此技术分离 nisin Z具有高效高纯度、操作简便等良好特征。nisin在 p H6 .5吸附率达 10 0 % ,p H3以下完全释放。该技术可望开辟对 nisin等微生物分泌性蛋白的分离纯化新途径。     

腰椎间盘突出症再手术10例报告

腰椎间盘突出症经手术治疗大多可获得满意疗效，但仍有复发，也有初次手术未能成功需再手术，过去报道再手术率为２～９２％，我院自１９９４年２月至１９９６年４月共收治腰椎间盘突出症患者３３１例，其中再手术１０例，再手术率为３０％，现报告如下：１临床资料本...     

带有6肽组氨酸的HBV S/S145真核表达载体的构建及应用

目的 构建稳定表达带有6肽组氨酸的HBV S/S145蛋白的真核载体.方法 应用PCR技术及体外基因重组技术,将S基因和nt587突变的S基因插入带有his-tag的pxF2RH载体中,扩增6个组氨酸和S/S145基因,最后与经Nhe I、Sal I双酶切的线性载体pCI-neo连接,构建成带有6肽组氨酸的稳定表达S/S145的真核表达载体(简称pCI-his-SY/S145).用脂质体转染的方法将质粒转至人宫颈癌细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中抗原的分泌情况.用Western-blot方法检测细胞中外膜蛋白的表达情况.结果 真核表达载体pCI-his-SY/S145的测序结果与预期大小一致.ELISA方法可检测到细胞上清中的野生型表面抗原,但检测到145突变抗原表达水平低.应用Western-blot方法可以同时检测到野生型和G145R突变的外膜蛋白表达.结论 带有his-tag的重组质粒pCI-his-S/S145可以在Hela细胞中成功表达融合蛋白,且组氨酸可作为检测蛋白的标志.     

TGF-β1上调CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3的表达

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺癌患者CD4 CD25 调节性T细胞比例增高中发挥的作用.方法 采用酶消化法培养原代肺癌细胞,将培养的肺癌细胞及肺癌细胞培养上清液分别与自身来源的外周血单个核细胞共培养,不同浓度(2、5、10 ng/ml)的TGF-β1进行干预后,检测各组CD4 CD25 调节性T细胞标志物FOXP3 mRNA的表达.结果 肺癌细胞与外周血单个核细胞共培养组FOXP3 mRNA的表达呈阳性,且随着TGF-β1干预浓度的增加,FOXP3 mRNA的表达强度逐渐增高,两者呈正相关(r=0.663,P＜0.05);外周血单个核细胞经肺癌细胞培养上清液孵育后亦有FOXP3 mRNA的表达,TGF-β1干预后,FOXP3 mRNA的表达虽有上调但与干预前相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论 TGF-β1能上调外周血单个核细胞中FOXP3的表达,即增加CD4 CD25 调节性T细胞的比例,从而参与肺癌免疫逃逸机制.