儿童感染艰难梭菌合并轮状病毒1例报道

艰难梭菌（CD）是一种专性厌氧革兰阳性芽孢杆菌,1978年Bartlett等对CD产毒株与抗菌药物相关性肠炎的研究中首次确定CD是可引起人类疾病的病原菌。CD与临床长期使用某些抗菌药物引起的伪膜性肠炎有关,人们认为该细菌的主要感染人群为老年人,在儿童中罕见,而轮状病毒却是引起婴幼儿腹泻的主要病原体,两种病原体常见的临床表现均为腹泻、呕吐等。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。     

样品处理与临床PCR检测

样品处理与临床ＰＣＲ检测江凌晓综述冯永清审校（第一军医大学附属珠江医院分子生物学实验室，广州５１０２８２）关键词聚合酶链反应样品处理聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）是检测特异性核酸片断的最敏感的方法之一。现已用于...     

耐甲氧西林葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的实验研究

目的建立一种简便、特异的mecA基因荧光定量PCR检测方法，用于耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的快速鉴定。方法以煮沸法快速制备DNA模板，采用SYBRGreenI随机参入法，建立mecA基因的实时荧光定量PCR检测体系。并对检测体系的敏感性、特异性和灵敏度进行评价。结果本法对纯菌落的检测敏感性和特异性分别为98．5％和96．9％，检测灵敏度可达10^1CFU／ml，最小检菌量约为3个菌／反应体系。结论本实验所设计的荧光定量PCR方法用于MRS的检测具有快捷、高敏感性、高特异性和高灵敏度的特点。适用于MRS的快速检测。     

蛋白质芯片制作条件的优化

目的 探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件。方法 蛋白质用含40%甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上,室温干燥1 h,4℃冰箱保存,经封闭剂封闭,PBS漂洗后,依次加入抗体,反应结果用扫描仪进行扫读。结果 以醛基化玻片为固相载体时预点10~15个点后点样均一性较好;点样后4℃冰箱保存24~48 h再进行漂洗和封闭处理,所得结果的荧光测量值较高;3% BSA为封闭剂时所得图像的荧光背景值最低;点样量影响荧光信号的强度。结论 以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片时要预点15~20个点后再正式点样,点样后应4℃保存24~48 h再进行漂洗和3% BSA封闭处理。     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性研究

目的建立分析鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性的简便方法。方法采用DNAstarProtean和EMBOSS网络分析平台综合预测鼠疫耶尔森菌外膜蛋白YopE、YopH、YopT、YopJ、YopM的免疫原性,并通过蛋白质芯片技术对上述外膜蛋白的免疫原性进行验证。结果计算机综合预测分析显示外膜蛋白YopE抗原性最好,蛋白质芯片技术进一步证实YopE具有良好的免疫原性。结论软件预测结合蛋白质芯片检测的方法可用于筛选病原微生物抗原性蛋白。     

S系统及时序布尔网络模型构建鼠疫耶尔森菌基因调控网络的初步研究

目的应用S幂率系统构建鼠疫耶尔森菌小尺度基因调控网络。方法收集鼠疫耶尔森菌基因时间序列表达数据,数据经预处理后,分别用布尔网络模型和S幂率系统网络模型构建小尺度基因调控网络,并对两个网络结构进行比较。结果应用布尔网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在2种基因调控模式,而应用S幂率系统网络模型构建的小尺度基因调控网络中存在4种基因调控模式。结论 S幂率系统可用于构建基因调控网络模型。     

荧光定量PCR/熔解曲线分析法快速鉴定葡萄球菌菌种

目的：建立一种基于葡萄球菌16～23s rRNA间隔区序列特征的荧光定量PCR／熔解曲线分析鉴定方法，以快速鉴定葡萄球菌菌种。方法：在葡萄球菌16s rRNA 3′端和23s rRNA5′端分别设计上、下游引物．用荧光定量PCR方法扩增各个实验菌株的16～23s rRNA间隔区序列。然后分析各扩增产物的熔解曲线．以确定各个菌种熔解曲线特征，并以此为依据对15株葡萄球菌临床分离株进行鉴定。结果：设计的引物对成功地扩增了葡萄球菌所有实验菌株，对扩增产物的熔解曲线分析可初步鉴定金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌。以VITEK2鉴定结果为标准，荧光定量PCR／熔解曲线分析法鉴定菌种的准确率为67％（10／15）．整个实验可在1h内完成。结论：荧光定量PCR／熔解曲线分析法有望成为临床实验室快速鉴定葡萄球菌菌种的新方法。[著者文摘]     

基因水平转移

基因和基因组学研究表明，基因水平转移在细菌的多样性和基因组的进化过程中起重要作用。生物学上基因水平转移是指基因组中可移动的基因成分(质粒、转座子、整合子、转座噬菌体、前噬菌体等)通过转化、接合、转导、溶源性转换、转座等方式从一菌株／克隆、种或属的生物转移到另一菌株／克隆、种或属的生物中，而使后者获得新的性状的过程。基因水平转移研究在追踪菌株来源、研究菌株变迁情况以及探讨造成不同地区流行菌株之间的关系上有重要意义。     

蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌与巨噬细胞的蛋白相互作用

目的：利用蛋白芯片筛选鼠疫耶尔森菌的毒力因子，进一步揭示鼠疫菌与宿主之间相互作用的机制。方法：鼠疫菌毒力相关蛋白芯片筛选与小鼠巨噬细胞系774A．1可能有相互作用的蛋白质，免疫荧光试验验证筛选出的蛋白相互作用。结果：共筛选到17个可能与巨噬细胞有相互作用的鼠疫菌蛋白，并通过免疫荧光试验初步验证了其中8个蛋白芯片筛选试验中信号最强的蛋白与巨噬细胞的相互作用。结论：蛋白芯片技术可用于筛选病原菌与宿主之间的相互作用，有助于深入研究病原与宿主之间相互作用的机制。本研究筛选出的鼠疫菌蛋白与巨噬细胞的相互作用尚需深入研究和验证，以便最终确定这些蛋白在鼠疫菌致病机制中所发挥的作用。