造血干细胞和放射损伤

电离辐射作用于机体,可引起细胞分裂障碍和增殖力丧失。尤其是增殖旺盛的细胞更新系统,如造血器官、皮肤、粘膜上皮组织及生殖器官等更易受到损伤。半致死剂量照射后的机体,成为死亡原因的出血、感染等均来源于造血组织损伤。急性放射损伤最大的同题是造血障碍,其晚期效应最重要的问题是诱发粒细胞性白血病。因此,造血损伤的研究在放射病的诊断和治疗方面具有重大意义。     

体外培养法观察铅对未成年小鼠造血干/祖细胞生长的影响

目的:为防治儿童铅中毒提供实验室研究资料,探讨醋酸铅对体外培养的小鼠骨髓造血祖细胞的影响。方法:将不同浓度的醋酸铅作用于体外培养的骨髓粒系造血祖细胞(CFU-GM)和红系造血细胞(BFU-E),观察CFU-GM和BFU-E细胞的集落数变化。结果:醋酸铅可明显抑制骨髓CFU-GM和BFU-E的生长,与对照组比较差异显著(P<0.05),且随浓度增加抑制作用增强,呈明显的剂量-效应关系;进行等级相关分析,相关系数分别为rs=-0.969(P=0.000)和rs=-0.983(P=0.000)。结论:醋酸铅可明显抑制体外培养的骨髓CFU-GM和BFU-E的生长。     

新生大鼠骨源性间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞的分化

目的 探讨体外培养的骨源性间充质干细胞向神经元样细胞的分化。方法 采用体外骨植块法培养骨源性的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs），传代。用含0．5mmol／L IBMX，GDNF（10nG/ml）和IL-1β（100gpg／ml），中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经膜碎片诱导其向多巴胺能神经元样细胞分化，免疫细胞化学检测神经细胞的表面标志NSE、MAP-2和TH。结果 原代骨源性间充质干细胞含有多种细胞形态，传代后细胞成均一的梭形。诱导前，对照组少量细胞表达NSE，不表达MAP-2和TH。诱导后间充质干细胞分化成表达NSE、MAP-2和TH的细胞。结论 骨源性间充质干细胞分化成神经元样细胞，表明其可跨胚层分化，同时为细胞移植治疗中枢神经系统疾病提供一种新的细胞来源。     

氯化甲基汞对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响

本文用Hewish和Burgoyne法分离纯化大鼠脑细胞核,采用脑细胞核缺口翻译分析法,探讨孕鼠于妊娠器官发生期,经腹腔连续给予5天氯化甲基汞(2mg/kg体重)后,对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响。实验结果表明,接触氯化甲基汞组大鼠脑细胞核,分别经DNase 1和EcoR 1核酸内切酶消解后,进行核缺口翻译测定,生后3天大鼠脑细胞核,分别经两种酶处理后,其~3H—dAMP掺入量均明显低于相应未接触氯化甲基汞对照组。氯化甲基汞对大鼠发育过程中脑染色质结构的影响,可能与胎、幼鼠对甲基汞神经毒性的易感有密切关系。     

抗肿瘤转移相关蛋白Memo抗体的制备及组织表达谱分析

目的:制备抗Memo蛋白的特异性抗体,并鉴定其特异性,检测其在小鼠组织中的表达。方法:在大肠杆菌中表达GST-Memo融合蛋白,常规免疫小鼠制备抗体。构建了带有FLAG标签的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo。用Westernblot检测抗体的特异性。结果:构建了Memo的真核表达载体pcDNA3-FLAG-Memo,制备的抗Memo抗体能特异性地识别Memo蛋白。Westernblot检测表明,Memo蛋白在不同的小鼠组织中都有一定程度的表达。结论:成功地获得抗Memo蛋白的特异性抗体并检测了其组织表达谱,为进一步研究其与恶性肿瘤的转移性、侵袭性的关系及其相关机理的研究提供了重要的制剂。     

人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析

目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５α中的表达,为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序,然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４５ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００,薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的９９％。经ＦａｃｔｏｒＸａ酶切后得到分子量约为１７０００的ｂＦＧＦ,其生物学活性ＥＤ５０为２２９ｎｇ／ｍｌ。结论：经ＰＣＲ方法扩增的ｂＦＧＦ可在大肠杆菌中高效表达,为其进一步结构与功能研究打下基础     

造血微环境在辐射造血损伤和恢复中的意义——骨髓基质在造血损伤与修复中的作用

作为急性放射病治疗基础的造血型放射病,至今尚无强有力的治疗措施。     

医疗环境对MRSA定植与感染传播过程的作用研究

目的 分析某综合性医院神经内科病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)定植及感染实时监测中医疗环境的作用,并提出防控措施.方法 对某综合性医院神经内科住院患者进行MRSA定植与感染的实时监测筛查,同期采集医护人员、环境标本(床头桌表面、门把手、医师工作站鼠标等);稀有限制性位点PCR(IRS-PCR)基因分型法对标本中分离的MRSA进行同源性分析.结果 在2007年7-12月,住院患者MRSA定植率为5.3%,感染率为3.8%,医护人员MRSA鼻前庭检出率为4.5%,手部检出率为6.6%,环境采样点总检出率为6.9%,其中床头桌检出率为8.8%,医师工作站的鼠标检出率为5.2%,门把手检出率为7.8%;对同一时期在患者鼻前庭、医护人员鼻前庭和手、环境中分离的15株MRSA进行IRS-PCR同源性分析,结果发现14株同为A型,分为4个亚型,1株为B型,具有高度同源性;对同一病区不同病房,不同时间的7株环境MRSA同源性分析发现同为A型的2个亚型,也显示出高度同源性.结论 医疗环境在住院患者MRSA定植与感染过程中有着重要作用,制定综合性防控策略,边监测边干预,可以及时有效地控制MRSA的流行.     

不同品系来源的骨髓间充质干细胞对小鼠肾缺血-再灌注损伤作用的对比性研究

目的 探讨不同品系的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对各自小鼠肾缺血-再灌注损伤是否有促修复作用,为临床治疗肾脏疾病提供思路.方法 取健康3 w龄C57BL/6J小鼠和ICR小鼠的骨髓细胞悬液,进行BMSCs体外扩增培养.将8 w龄C57BL/6J小鼠和ICR小鼠各随机分为假手术组、平行对照组和细胞移植组,每组12只小鼠.建立肾缺血-再灌注损伤模型,将BMSCs移植到细胞移植组小鼠中,平行对照组注射生理盐水.2 w后,检测肾功能和肾形态学变化,观察不同品系的BMSCs对各自小鼠肾缺血-再灌注损伤是否有促修复作用.结果 分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好.BMSCs移植C57BL/6J小鼠后,细胞移植组小鼠整体状态良好,与平行对照组相比肾功能指标明显改善(P＜0.05),组织形态学好转.而BMSCs移植ICR小鼠后,细胞移植组小鼠整体状态差,肾功能指标与平行对照组相比没有差异或者明显高于平行对照组(P＞0.05),肾病理性改变没有得到改观.结论 经尾静脉移植BMSCs后,可提高肾缺血-再灌注损伤后宿主C57BL/6J小鼠的恢复;但不能改善ICR小鼠肾缺血-再灌注造成的损伤,甚至加剧了ICR小鼠肾损伤的程度.     

胎鼠皮肤间充质干细胞体外增殖特性的研究

目的探讨胎鼠皮肤间充质干细胞的体外增殖特性。方法取昆明小鼠胎鼠皮肤体外培养胎鼠皮肤间充质干细胞,MTT法检测所培养细胞对表皮生长因子(EGF)、角朊细胞生长因子(KGF)和碱性或纤维细胞生长因子(bFGF)的反应,观察其在体外培养条件下的增殖与生长特征。结果胎鼠皮肤间充质干细胞具有很强的增殖活性,传代培养潜伏期为24-48 h,对数增殖期为3-5 d,然后进入平台期。经过15代连续培养的细胞其增殖能力未见明显改变。应用MTT法检测发现,培养的细胞对bFGF具有良好的反应性,并在1.0μg.L-1时反应最强,而对KGF和EGF的反应不明显。结论培养的胎鼠皮肤来源细胞增殖能力强;为间充质来源的干细胞。