污水中大肠埃希菌携带第1类整合子的鉴定和特征分析

目的：探讨污水中大肠埃希菌携带第1类耐药整合子的分布、特征及所含基因盒的种类。方法：常规方法分离大肠埃希菌；纸片扩散法对9种抗生素进行耐药性监测和分析；PIER鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序并对结果进行分析。结果：42份标本中分离出24株大肠埃希菌，为多重耐药菌株，耐药谱为氨苄西林-复方磺胺-红霉素-四环素-链霉素-庆大霉素。有3株（12．5％）鉴定出1．6kb 1类整合子，PCR产物测序得知携带pse-1-aadA1、pse-1-aadA2、pse-1-aacA1基因盒，传递对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论：1类整合子存在于污水来源的大肠埃希菌中，并携带相应的耐药基因盒，决定着对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

儿科呼吸道致病菌氨基糖苷类抗生素耐药性

目的探讨儿科呼吸道感染病原菌对氨基糖苷类抗生素耐药机制,监测儿科细菌耐药性变化趋势。方法采集2005年4月-2006年5月儿科上呼吸道感染性标本,常规方法分离培养细菌,琼脂纸片（K-B）法进行抗菌药物敏感性监测,PCR检测氨基糖苷类修饰酶基因,PCR产物克隆测序。结果242份上呼吸道感染标本共分离出革兰阴性杆菌172株（46.9%）,对链霉素耐药率超过50%以上;对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星和奈替米星耐药率均超过35%,对衣替米星和地贝卡米星耐药率低于15%。对链霉素耐药细菌携带ANT（3″）基因,对庆大霉素耐药携带AAC（3′）基因。结论吉林地区儿科呼吸道感染性疾病分离出的革兰阴性杆菌对链霉素耐药率最高,对衣替米星和地贝卡米星耐药率最低,携带单一类型的氨基糖苷类修饰酶基因。     

儿科抗生素使用现状及细菌耐药性监测

目的探讨吉林地区儿科抗生素使用现状,监测细菌耐药性变化趋势,为儿科抗生素的合理使用提供参考指导。方法对2003年4月~2005年10月期间吉林市三级甲等医院儿科感染性疾病住院病例进行回顾性调查。采集患儿上呼吸道感染性标本,常规方法分离培养细菌和K-B法进行抗菌药物敏感性监测。结果662例感染病例均使用抗生素治疗,使用率为100%。病例中有12例（1.5%）根据药敏试验选用抗生素的记录。各种抗生素使用频次依次为头孢他定（55%）,罗红霉素（23%）和青霉素（22%）。242份上呼吸道感染标本共分离出366株细菌。革兰阳性球菌196株（53.6%）,以表皮葡萄球菌62株（31.6%）和金黄色葡萄球菌53株（27.0%）为主。革兰阴性杆菌170株（46.4%）,以肺炎克雷伯菌68株（40.0%）和大肠埃希菌49株（28.8%）为主。革兰阳性球菌对氨苄青霉素耐药率为86%,对其他抗生素的耐药率均超过18.5%。革兰阴性杆菌对氨苄西林耐药率高达79%,对其他抗生素的耐药率均超过26%。结论吉林地区儿童感染性疾病使用抗生素以青霉素、头孢类、大环内酯类为主,抗生素应用品种较单一,存在不合理使用抗生素现象。呼吸道分离出的革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌对所使用抗生素有较高的耐药率。     

新生儿眼分泌物中耐甲氧西林葡萄球菌耐药性分析

目的:探讨新生儿结膜炎分泌物中耐甲氧西林葡萄球菌的分布及耐药特征,指导临床合理使用抗生素。方法:常规分离培养葡萄球菌,K-B法药敏实验。结果:40例新生儿患者眼分泌物中常规培养出葡萄球菌18例,血浆凝固酶阳性葡萄菌2例;血浆凝固酶阴性表皮葡萄球菌16例。药敏试验显示葡萄球菌对青霉素、苯唑西林、头孢呋辛、红霉素、克林霉素、环丙沙星、四环素、新诺明耐药率较高,对庆大霉素耐药率低。结论:本地区新生儿结膜炎分泌物中耐甲氧西林葡萄球菌分离率高,对抗菌药物表现出多重耐药。     

支原体在泌尿生殖道中感染及耐药性的研究进展

近年来，非淋菌性尿道炎(NGU)在性传播疾病中所占的比例有所升高，支原体是NGu的重要病原体之一，其中解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)最多见。由于广谱抗生素的广泛使用，以及一些药物应用不当，致使耐药茵株不断出现，因此，合理有效的抗生素治疗是治愈支原体性泌尿生殖道炎以及防止并发症的关键。     

PCR-核酸试纸条检测方法鉴别蛤蚧真伪

目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障。     

微生物实验室生物安全理论与实验教学改革的探索

目的 探索微生物实验室生物安全理论课和实验课的教学改革.方法 以医学检验专业学生为研究对象,以实验室生物安全理论为主线,穿插到不同课程中,分段讲授.对微生物实验室生物安全事故真实案例进行分析,实验室模拟实训及临床实践环节考核等方法,对医学检验专业学生在基础课和专业课学习、课间及生产实习阶段,多途径、全方位地进行实验室生物安全知识理论及实践应用教学改革.结果 通过4个阶段实验室生物安全理论和实验课的教学改革,强化了医学检验专业学生对微生物实验室生物安全防护意识.结论 在临床实践中,学生操作规范,流程正确,能及时发现和紧急处理实验室生物因素意外事件.     

RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：应用RNA干扰（RNAi）技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1α mRNA的小干扰RNA （siRNAs）,同时合成错义RNA （SCR）,采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组（无血清培养基）,RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组（survivin-siRNA,sis组）、联合干扰组（survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组）、非靶向特异性组（SCR组）和空白对照组（无血清培养基）,MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果：与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化（P>0.05）,sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）;与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。     

人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞过表达WWOX基因的基因表达谱分析及WWOX基因的抑癌作用机制

目的：分析人口腔鳞状细胞癌（OSCC） Tca8113细胞过表达包含WW域的氧化还原酶（WWOX）基因的基因表达谱变化,探讨WWOX基因的抑癌作用机制。方法：Tca8113细胞分为WWOX基因过表达组和对照组。采用携带WWOX基因的pGV287-LV-WWOX慢病毒颗粒和携带空载体的pGV287-LV慢病毒颗粒分别感染2组Tca8113细胞。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法检测2组Tca8113细胞中WWOXmRNA和蛋白表达情况。采用基因芯片技术筛选差异表达基因并进行生物学分析。采用定量PCR法检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的差异表达基因的mRNA相对表达水平。结果：慢病毒感染后,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOXmRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX蛋白表达水平升高。基因芯片筛选出差异倍数（FC）1.5倍以上的基因共347个,其中表达上调171个,表达下调176个。生物信息学分析显示这些基因分布于癌症、p53信号、MAPK信号和白细胞介素2（IL-2）等多条信号传导通路。WWOX基因过表达组MAPK信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶2（MAP2K）、孤核受体4A1（NR4A1）、双特异性磷酸酶5（DUSP5）和双特异性磷酸酶6（DUSP6） mRNA相对表达水平较对照组明显升高（P<0.05）,而成纤维生长因子受体2（FGFR2） mRNA相对表达水平较对照组明显降低（P<0.05）。结论：WWOX基因过表达导致Tca8113细胞的基因表达谱发生变化,WWOX基因的抑癌作用机制与调节MAPK信号途径的多个基因表达有关联。