多位点酶电泳法在分子流行病学中的应用

多位点酶电泳是研究真核生物群体遗传学和分类学的标准方法。80年代后被用于细菌的分类学、群体遗传学和分子流行病学方面的研究,并取得良好效果。本文就这一方法在分子流行病学中的应用作一概述。     

Glypican-3的血清检测与原发性肝癌诊断的研究进展

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（glypican-3, GPC3）是继AFP之后发现的一个新的肝细胞癌标志物.随着对GPC3研究的不断深入,发现它不但在肝细胞癌组织中有表达而且在血清中同样有表达.GPC3对HCC诊断的敏感性和特异性较高,尤其在肿瘤发生的早期,具有极大的临床应用价值,为早期HCC的诊断带来了希望.     

UniArray（^Tm）检测HBV拉米付定耐药的实验研究

目的研制可准确判断HBV感染者拉米付定耐药状况的YMDD突变检测试剂盒。方法采用UniArray技术建立YMDD检测体系和试剂盒,对其检测的灵敏度、特异度和准确性进行分析,并与测序结果进行比较研究。结果实验设立了3个检测位点,内参照、YIDD和YVDD,并确立其反应体系和3个反应体系的相互关系,在大量临床实验基础上,以血清DNA测序结果为金标准,确立了以△Ct≤3为本法阳性判断标准。按此标准,临床检测HBV灵敏度为3.9×104copies/ml,人群检测灵敏度为96.4%,特异性为100%,准确性为97.6%,CV%为0.58%~4.16%,完全能达到测序的检测水平。结论建立了UniArray技术检测HBV拉米付定耐药方法,该方法灵敏、特异,与测序结果有非常高的符合率,且能反映比测序更多的信息。     

抗组氨酰-tRNA合成酶单克隆抗体的制备及初步鉴定

【目的】制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料。【方法】采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;Protein G Sepharose 4FF和Sephadex G50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定。【结果】筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为W001和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;腹水纯化达到了较理想的效果;该2株单克隆抗体能特异性针对组氨酰-tRNA合成酶,并能跟天然的蛋白结合。【结论】所制备的均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA合成酶抗体,可直接用于在ELISA、免疫印迹、免疫组化学等研究方面,达到了试验的目的。     

抗人半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2(Cysteine and glycine-rich protein 2,CRP2)的单克隆抗体,探讨CRP2蛋白的生物学功能。方法利用重组CRP2蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,通过间接ELISA筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CRP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western-blot和免疫共沉淀实验等方法对其特性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗CRP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体与重组抗原有较强的特异性反应。同时,两株单克隆抗体通过Western-Blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CRP2蛋白,并且,两株抗体都可以应用于免疫共沉淀实验。结论获得了效价高、特异性好的CRP2蛋白的单克隆抗体,为CRP2的生物学功能研究奠定了基础。     

神经元特异性烯醇化酶(NSE)时间分辨荧光免疫分析试剂盒的临床性能评价

目的 对自制的神经元特异性烯醇化酶时间分辨荧光免疫分析试剂盒进行临床应用研究及临床性能评价. 方法 用自制试剂盒检测采集到的血清1008例,Roche公司电化学发光试剂盒作为对照试验,WALLAC公司时间分辨荧光免疫分析试剂盒作为复核试验.操作按各试剂盒说明书进行,对自制试剂盒的符合率和相关性等指标进行计算分析. 结果 同Roche电化学发光试剂盒比较,自制试剂盒阳性符合率为98.04%,阴性符合率为98.39%;两者测定值接近,相关系数为0.973,相关性好,P=0.000.其AUCROC值为0.994. 结论 本试剂盒检测性能满足临床应用的需要.     

血清铁蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 血清铁蛋白(sFER)时间分辨荧光免疫(TRFIA)分析试剂盒的研制.方法 采用双抗体夹心法建立sFER-TRFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的线性测量范围为2.2～1 070 ng/mL,灵敏度为0.22 ng/mL,批内、批间的精密度分别为4.6%～7.2%、5.4%～8.9%,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和人白蛋白无交叉反应.86份血清样本用本试剂盒与国外其他试剂盒同时检测,其相关系数为0.994.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

我国疟疾现状及其防治

疟疾（malaria）是广泛流行于热带、亚热带甚至温带边缘的一种重要虫媒传染病。最近统计资料表明,目前每年有3～5亿人受疟疾感染,发病1．2亿,死亡达270万（90％的死亡发生在非洲撒哈拉地区5岁以下的儿童中）;在我国,估计每年仍有25～30万的疟疾病人,严重危害着人类的健康'"'。本文就我国疟疾的流行现状、特点及其防治策略作一综述。1我国疟疾流行现状我国疟疾流行的历史久远,云贵、两广和闽台一带,自古称为瘴病之地。解放后,由于大力开展疟防工作,疫情得到一定程度的控制。但由于疟疾是一种传播快、易反复的传染病,在60年代初和…     

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

不同来源产毒性大肠杆菌的毒力型、耐药性及质粒分析

本研究对从广州郊区某乡的腹泻病人、健康人及环境（包括猪、鸡和环境）中分离到的产毒性大肠杆菌（ETEC）菌株进行了毒力型、耐药性及质粒分析。结果表明,病人ETEC株含LT或STp较多,环境株含LT较多。比较三种来源菌株对20种临床常用抗菌药物的耐药性,病人株的耐药谱最广,耐药率也最高;其次为环境株。根据耐药谱,可把大多数菌株（94％）分为6个型．不同来源ETEC株的优势耐药型有所不同,但不同毒力型ETEC株的耐药谱无明显不同。91．6％（55／60）的ETEC殊含有质粒,与正常大肠杆菌（78．6％）相近,最常见的质粒有2．2～2．6Md、3．3～4．5Md和＞20Md三种,ETEC株含＞20Md质粒显著高于正常大肠杆菌。未发现质粒谱与ETEC毒力型及耐药谱之间有明显的关系。