小鼠PP1基因启动子克隆鉴定及潜在甲基化位点分析

目的 PP1分子是一种与学习记忆相关的分子,目前对其表达调控尚未有系统的研究。为了研究小鼠PP1基因启动子区甲基化潜在的位点和转录因子结合位点而克隆小鼠PP1启动子区。方法本实验利用NCBI上小鼠PP15’非翻译区序列设计引物,使用高保真Taq酶,利用PCR方法扩增昆明小鼠PP1启动子0至-320序列,并进行TA克隆,测序鉴定。利用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,通过PCR技术和测序技术对PP1启动子0至-320序列甲基化情况分析。然后再应用Methyl Primer Express software V1.0和TFSEARCH软件分析该区域甲基化位点和转录因子结合位点。利用CpG岛序列分析软件分析。结果成功克隆得到PP1基因启动区0到-320 bp片段。甲基化测序分析该片段只有一个CpG位点被甲基化。软件分析表明小鼠PP1翻译起始点到-320 bp区域C+G含量高达70.25%,CpG含量为11.75%,含有70个潜在的转录因子结合位点。结论在小鼠PP1基因启动子区0～-320发现有一个CpG岛和多个转录因子结合位点,该区域可能在小鼠PP1基因表达调控起重要作用。     

银杏内酯及银杏黄酮对脑淋巴阻滞后鼠脑实质微循环血流量变化的影响

目的探讨蛛网膜下腔出血（SAH）后脑淋巴引流阻滞对脑缺血的影响和银杏内酯、银杏黄酮的保护作用。方法将雄性Wistar大鼠64只分为对照组、SAH组、SAH＋脑淋巴引流阻滞（CLB）组、SAH＋CLB＋溶剂组、SAH＋CLB＋银杏内酯组（又分20mg、80mg/kg组）、SAH＋CLB＋银杏黄酮组（又分50mg、200mg/kg组）。于第二次SAH后3d,用激光多普勒血流计针式探头记录脑实质局部血流量（rCBF）;放免法测定血浆内皮素-1（ET-1）含量。结果第二次SAH后3d,可见脑实质血流量明显降低,尤以SAH＋CLB组、SAH＋CLB＋溶剂组降低较为显著。SAH后血浆ET-1含量增加,SAH＋CLB组、SAH＋CLB＋溶剂组ET-1含量增加更为明显。银杏内酯、银杏黄酮可减轻CLB对SAH所致脑实质微循环血流量降低,降低血浆ET-1含量,且呈剂量依赖性。结论脑淋巴引流阻滞可显著加重SAH后脑实质血流量下降,银杏内酯和银杏黄酮对之具有一定改善作用。     

蛋白激酶C抑制剂灯盏花素对低氧预适应小鼠海马NO/cGMP信号转导系统的影响

目的探讨NO/cGMP信号转导系统在低氧预适应中的作用及灯盏花素对其的影响。方法将B lb/c近交系小鼠随机分为空白对照组（H0组）、低氧对照组（H1组）、低氧预适应组（H4组）、药物对照组（C）和灯盏花素组（EB）。观察H1、H4、C和EB组小鼠低氧耐受时间；用分光光度计法测定各组小鼠海马NOS活性、NO产量和放射免疫法测定cGMP含量。结果（1）H4、C和EB组小鼠低氧耐受时间显著多于H1组，且EB组明显多于H4组，H4和C组没有显著差异。（2）H1、H4、C和EB组NOS活性、NO、cGMP含量均高于H0组，H4、C和EB组明显低于H1组，且EB组显著低于H4组，H4和C组没有明显差异。结论NO/cGMP信号转导系统在低氧预适应中起重要作用，灯盏花素通过抑制NO/cGMP信号转导系统参与低氧预适应的产生。     

3.0TMRI常规序列及MRA对可逆性脑血管收缩综合征的诊断价值

目的：探讨 MRI 各序列与 MRA 对可逆性脑血管收缩综合征(RCVS)的诊断价值。方法回顾性分析明确诊断的5例RCVS 患者的临床资料和 MRI 及 MRA 显示的异常血管分布、形态、脑实质病变信号特点。结果5例 MRA 结果均显示颅内外大动脉呈非动脉硬化性、非炎症性、多发节段性狭窄与扩张,典型者呈“串珠样”改变,有4例并发颅脑病变,其中1例合并后部可逆性脑病综合征(PRES),局部皮层蛛网膜下腔出血1例,分水岭区脑梗死3例。5例治疗后3个月复查 MRI 及 MRA 完全恢复正常。结论MRI 及 MRA 能清楚显示脑血管形态,观察脑实质的继发性病变,对临床治疗和预后的评估具有重要的指导意义。     

大鼠福尔马林内脏炎症痛过程中脊髓PKCγ、PKCβⅡ膜转位的变化

目的 初步探讨PKCγ、PKCβⅡ在内脏炎症痛过程中的作用。方法 本实验用福尔马林复制的内脏炎症痛模型，经脊髓蛛网膜下腔插管给予PKCγ、PKCβⅡ激动剂PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate）和抑制剂H-7（1-（5-isoquinolinesulfonyl）2-methylpiperazine dihydrochloride）。结合 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、蛋白印迹（Western-blot）等生化技术，选用成年健康Wistar大鼠，随机分4组：N；F＋IT＋NaCl；F＋IT＋PMA；F＋IT＋H-7。共分福尔马林直肠内致炎后30min、60min和120min三个时间段。结果 在福尔马林直肠致炎后30min内，F＋IT＋NaCl组与N组PKCγ膜转位相比明显增多（P〈0．01），F＋IT＋PMA组与F＋IT＋NaCl组相比明显减少（P〈0．05），F＋IT＋H-7组与F＋IT＋NaCl组相比明显增高（P〈0．05）；在福尔马林直肠致炎后的30min、60min和120min三个时间段内，PKCβⅡ膜转位没有明显变化（P〉0．05）。结论　福尔马林致内脏炎症痛过程中PKCγ被激活、PKCβⅡ没有被激活，提示PKCγ可能参与了内脏炎症痛的发生；PKCβⅡ可能没有参与内脏炎症痛的发生。     

低氧预适应刺激脑海马区内源性神经干细胞的增殖

背景:缺血/缺氧/低氧等刺激均能导致内源性神经干细胞的增殖和分化,起到脑组织修复作用,但低氧预适应能否影响内源性神经干细胞的增殖尚不清楚.目的:探讨低氧预适应对小鼠脑海马区内源性神经干细胞增殖的影响.方法:清洁级Balb/c近交系小鼠随机分为3组,低氧对照组小鼠放入广口瓶内,立即用橡皮塞封紧,以动物出现第1次喘呼吸为低氧耐受极限的标志,完成低氧暴露1次;低氧预适应组小鼠按此法重复操作4次;正常对照组小鼠不进行低氧暴露.通过免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术,测定海马BrdU阳性细胞数和荧光强度.结果与结论:与低氧对照组比较,低氧预适应组小鼠耐受时间显著延长(P<0.01).正常对照组海马区BrdU标记的内源性神经干细胞荧光强度微弱.海马区可见少量BrdU阳性细胞:低氧对照组、低氧预适应组荧光强度及BrdU阳性细胞数均明显增加(P<0.01),且低氧预适应组增加幅度大于低氧对照组(P<0.01).证实在低氧预适应过程中,海马区内源性神经干细胞明显增殖,可能参与低氧预适应脑保护机制.     

丝裂原活化的蛋白激酶激活通路在病理性痛痛觉调制中的作用研究进展

病理性痛(pathological pain)是临床上常见的疼痛,通常分为炎性痛(inflammatory pain)和神经病理性痛(neuropathic pain),具有痛觉过敏和痛觉异常等特点,给临床治疗带来极大难度.严重的吗啡耐受导致痛敏、痛觉异常现象,因此病理性痛机制研究对于其临床治疗具有重要意义,信号转导机制是目前国内外研究的热点之一~([1,2]).     

阻断颈淋巴加重实验性蛛网膜下腔出血软脑膜脑微循环异常

目的探讨脑淋巴引流阻滞对蛛网膜下腔出血（SAH）后软脑膜微循环的影响。方法选用成年健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组（A组）、SAH组（B组）、颈淋巴阻断＋SAH组（CLB＋SAH组,C组）。采用枕大池二次注血法建立SAH模型。监测动脉血压和血气,在体观察脑膜微循环血流及管径变化。结果各组动物生理指标相对恒定。B、C微动脉、微静脉明显痉挛,而C组更为严重;A组软脑膜微循环血供丰富,血流快速无凝集。B、C组微循环血流多呈泥沙样流动,甚至可见血流郁滞、摆动,以C组更为显著。结论脑淋巴引流途径在SAH后脑微循环障碍和脑损伤中可能起重要作用。     

黄芪多糖对星形胶质细胞培养液中自由基系统损伤保护作用的时间依赖性

目的：观察具有抗炎、凋节免疫、延缓神经元变性等药理作用的黄芪多糖对胶质细胞培养液中谷胱甘肽和丙二醛含量及谷胱甘肽过氧化物酶的活性、超氧化物歧化酶活力的影响，探讨黄芪多糖对左旋多巴致胶质细胞培养液中自由基系统动态平衡损害的保护作用，分析该种作用与时间的关系。 方法：实验于2003—12／2004-9在泰山医学院基础研究所完成。①选用出生2d的SD大鼠10只，雌雄不拘。②按照McCarthy和de Velli的方法进行星形胶质细胞的原代培养，胶质细胞培养液建立左旋多巴损伤模型，实验分为3组（每6孔细胞液一组）：正常对照组（正常细胞培养，加入等数量的培养基，不加任何药物），左旋多巴组（加入100μmol／L左旋多巴），黄芪多糖＋左旋多巴[加入黄芪多糖（由合肥恒星药物研究所提供）20mg／L和左旋多巴100μmol／L]。分别在培养424,48和72h后取处理后的含胶质细胞培养液。③采用比色定量法测谷胱甘肽含量，比色法测谷胱甘肽过氧化物酶活性，黄瞟呤氧化酶法测超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量。④计量资料差异比较采用方差分析。 结果：①谷胱甘肽含量及谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力：培养4h后各组差异不明显。培养24，48和72h后，左旋多巴组明显低于空白对照组（P〈0.05-0．01）；黄芪多糖＋左旋多巴组低于空白对照组，但差异不明显（P〉0．05），明显高于左旋多巴组（P〈0．05）。②丙二醛含量：培养4h后各组差异不明显。培养24，48和72h后，左旋多巴组明显高于空白对照组（P〈0．05-0．01）；黄芪多糖＋左旋多巴组高于空白对照组，但差异不明显（P〉0．05），明显低于左旋多巴组（P〈0．05）。 结论：左旋多巴自身氧化产生大量的自由基，促进帕金森病发展，黄芪多糖可降低左旋多巴对神经元的毒性作用，作用有时问依赖性。     

临床药师参与1例严重低血钾的新型隐球菌脑膜炎患者补钾治疗病例分析

目的:探究临床药师在临床治疗团队中的作用和意义.方法:临床药师与1例新型隐球菌脑膜炎合并严重低钾血症患者的补钾治疗过程,分析患者出现低钾血症的原因,优化补钾及抗真菌治疗方案.结果:患者应用大剂量长疗程两性霉素B治疗出现严重低钾血症,医师采纳临床药师的药学建议,在临床药师密切监护下,患者新型隐球菌性脑膜炎病情好转,低钾血症得到纠正.结论:临床药师在新型隐球菌脑膜炎患者的治疗和不良反应的处理中起到了重要作用,保证了患者的用药安全合理,体现了临床药师的价值.