糖尿病肾病患者血清人巨细胞病毒miR-US4-3p水平变化及价值

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者血清中人巨细胞病毒(HCMV)编码的miR-US4-3p的表达水平变化和临床价值。方法选取2019年4月至2020年1月于东部战区总医院确诊的DN患者(DN组)、单纯糖尿病患者(DM组)及同期体检健康者(对照组)各64例,收集DN组、DM组及对照组血清标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测血清中miR-US4-3p表达水平。采用ROC曲线、Spearman相关性分析、Logistic回归分析血清miR-US4-3p对DN的预测评估价值。结果 miR-US4-3p在DN组血清中的表达高于对照组和DM组(P0.001)。相关分析显示,miR-US4-3p与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、甲状旁腺激素(PTH)呈正相关,与肾小球滤过率(eGFR)呈负相关。miR-US4-3p诊断DN的ROC曲线下面积(AUC)为0.792(95%CI:0.715～0.869),敏感性为71.9%,特异性为73.4%;鉴别DM和DN的AUC为0.748(95%CI:0.664～0.832),敏感性为71.9%,特异性为64.1%。多因素Logistic回归分析显示,在校正年龄、性别及其他血脂水平影响后,血清miR-US4-3p水平的升高与DN(OR=7.236,95%CI:2.633～19.889,P0.001)的发生密切相关,且miR-US4-3p对DN和DM的鉴别仍有统计学意义(OR=6.466,95%CI:2.778～15.052,P0.001)。结论 DN患者血清miR-US4-3p水平上调,可作为DN的潜在辅助诊断生物标志物。     

一种细胞间通信的新的信号分子——Microvesicle运输的microRNA

Microvesicle（MV）是机体内的细胞在正常和病理状态下都会分泌的直径在30~1000nm之间的微小囊泡。细胞把特异的生物活性分子如蛋白质、mRNA等包裹到MV中,这些生物活性分子会通过MV被运输到相应的受体细胞以调节受体细胞的生物功能。这种由MV介导的细胞间信息传递在一些生理和病理过程中扮演着十分重要的作用。近期研究表明MV中包含microRNA（miRNA）,并且通过MV的运输,这些miRNA会被运送人靶细胞以调控靶细胞相关基因的表达。本文就MV运输的miRNA在细胞间通信的功能做一总结。     

应用INGAP多肽体外分步诱导胰岛新生研究

目的 应用INGAP多肽在体外建立新的分步诱导分化体系诱导胰岛新生. 方法 分离纯化SD大鼠的胰腺导管干细胞.并体外扩增培养,取2～6代细胞进行分步诱导分化,于分化末期添加INGAP多肽,待诱导结束后收获新生类胰岛样细胞团(ILCs)分别行免疫荧光和RT-PCR检测,并通过葡萄糖刺激的胰岛素释放试验(GSIS)评价ILCs的胰岛素分泌能力. 结果 (1)分离纯化的胰腺导管干细胞经过四步诱导后最终可形成立体结构的ILCs,其insulin和glucagon染色均为阳性,RT-PCR检测该ILCs也有insulin和glucagon基因的表达.(2)GSIS结果:新生ILCs和新分离胰岛的高糖组胰岛素释放量均显著高于低糖组(P＜0.01);新生ILCs的胰岛素刺激指数接近新分离胰岛(P＞0.01). 结论 通过建立新的包含INGAP多肽的体外分步诱导分化体系,能够获得具有立体结构和一定胰岛素分泌能力的立体ILCs,为获取胰岛移植所需的β细胞提供了更有效的方法.     

肾细胞癌患者血清miR-135b-5p表达变化的价值及功能

摘要:目的检测肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA)-135b-5p的表达水平变化，探究其临床应用价值及其参与RCC发生、发展的作用机制。方法采用 荧光定量逆转录PCR( qRT-PCR)检测2022年1月至 6月于东部战区总医院泌尿外科就诊且经病理学确诊的60例RCC患者及60例健康人对照血清miR-135b-5p的表达水平变化,评估其对于RCC患者的临床辅助筛查价值。体外培养RCC细胞系(ACHNCaki-1)和正常肾小管上皮细胞系(HK-2),qRT-PCR检测细胞及细胞分泌的细胞外囊泡( extracellular vesicles ,EVs)中miR-135b-5p 的表达水平;进一步应用生物信息学分析、EVs与细胞共培养、细胞功能等方法探究EVs miR-135b-5p 参与RCC的初步作用分子机制。结果RCC 患者血清miR-135b-5p水平[ 6.932(5.524, 9.964)]与健康人对照[5.534(4.373, 6.555)]比较显著升高(U= 1 042,P<0.01)。血清miR-135b-5p水平对于RCC筛查的ROC曲线下面积( AUCR0C)为0. 711( 95% CI:O. 619~ 0.802)。ACHN和Caki-1 细胞中miR-135b-5p水平较正常HK-2 细胞中的表达倍数显著明显升高(分别升高了7.821 倍和1.919倍。P值分别为0.000 3和0.000 1);同时,ACHN和Caki-1 EVs中miR-135b-5p 水平较HK-2 EVs中的表达倍数亦显著增高(分别升高了3.783 倍和2.627倍。P值分别为0.0001和0.0004)。生物信息学分析结合文献调研显示,miR-135b-5p可能通过调控潜在靶基因血管生成素样蛋白4( angiopoietin-like protein 4 ,ANGPTL4)的表达而参与血管生成。RCC EVs与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)共培养结果显示,RCC细胞分泌的富含miR-135b-5p EVs在与HUVEC温育的不同时间点(4h 6h和8 h)均可明显促进内皮细胞成环,差异具有统计学意义(P值分别为0.011 2 ,0.005 7,0.001 7)。Western blot结果显示，mimics 组ANGPTL4蛋白的表达水平为( 0.616+0.003) ,较NC组( 1.00+0.05)显著降低,差异具有统计学意义(t=12.44,P=0.000 2)。进一步分析发现与NC组相比, HUVEC中miR-135b-5p过表达组在连续观察时间内(2h、4h、6h和8 h)的成环数明显增加(P值分别为0.000 1 ,0.0001,0.0032,0.0095)。结论RCC患者血清、细胞系及细胞分泌的EVsmiR-135b-5p表达水平均显著升高，血清miR-135b-5p水平测定对于RCC具有较高的临床辅助筛查价值,RCC细胞分泌EVsmiR-135b-5p可通过调控ANGPTL4的表达,参与血管生成。     

肾透明细胞癌患者血清miR-362的异常表达及意义

目的检测肾透明细胞癌患者血清miR-362水平,探讨其作为肾透明细胞癌分子诊断指标的可能性。方法采集107例肾透明细胞癌患者治疗前血清(其中TNMⅠ期76例、Ⅱ期16例、Ⅲ期2例、Ⅳ期8例及未知者5例),用实时荧光定量RTPCR法检测各组miR-362含量,并以107例年龄、性别匹配的健康人作为对照组。结果 miR-362在肾透明细胞癌患者血清中的相对含量为0.81(0.65,1.15),与健康对照组0.62(0.46,0.78)相比,表达水平明显升高(U=3 122,P0.01)。Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅳ期患者血清miR-362的相对含量分别为0.76(0.66,0.95)、0.76(0.66,0.95)和0.69(0.37,1.03),均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(U分别为2 197、474和98,P均0.01)。miR-362诊断肾透明细胞癌的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.727(95%CI:0.661~0.793)。当cut off值为0.696时,miR-362诊断肾透明细胞癌的敏感性和特异性分别为64.5%和63.6%。进一步对TNMⅠ期患者进行分析,结果其AUCROC为0.715(95%CI:0.641~0.790)。当cut off值为0.696时,miR-362诊断TNMⅠ期患者的敏感性和特异性分别为65.3%和63.6%。结论早期肾透明细胞癌患者血清中miR-362水平升高,具有一定的早期诊断潜能。     

人巨细胞病毒编码的miR-UL112-3p在口腔扁平苔藓病人血浆中的变化研究

目的 检测人巨细胞病毒编码的微小核糖核酸miR-UL112-3p在口腔扁平苔藓病人血浆中的水平,探讨其潜在的临床价值。 方法 收集74例口腔扁平苔藓病人血样本,其中13例病人收集全血标本,其余61例病人收集血浆标本;同时收集年龄、性别匹配的健康人全血标本12例和血浆样本51例。采用qRT-PCR方法测定全血标本中外周血白细胞HCMV DNA滴度。用ELISA试剂盒测定血浆中抗-HCMV IgG 和 IgM 抗体含量。用TaqMan qRT-PCR技术分别在初筛组（病人21例,对照18例）和验证组（病人40例,对照33例）中测定血浆样本中miR-UL112-3p水平。结果 口腔扁平苔藓病人外周血白细胞中HCMV DNA滴度为17,319 &amp;#177; 15,311 拷贝/mL,显著高于正常对照组（2,672 &amp;#177; 2,368拷贝/mL）（P&amp;lt;0.001）。两组间血浆抗-HCMV IgG (100% vs. 93.65%) 和 IgM 抗体阳性率无显著差异（0% vs. 0%）。在初筛组中,miR-UL112-3p在病人组中的水平(3.76&amp;#177;0.50)显著高于健康对照组（0.52&amp;#177;0.06）（P&amp;lt;0.001）。进一步在验证组中,病人组miR-UL112-3p水平（2.02 &amp;#177;0.34） 也显著高于对照组（1.23 &amp;#177;0.09）（P&amp;lt;0.05）。多元逻辑回归显示,miR-UL112-3p与口腔扁平苔癣疾病相关（OR=6.00,P&amp;lt;0.01）。结论 人巨细胞病毒编码的miR-UL112-3p在口腔扁平苔藓病人血浆中显著升高,可能是口腔扁平苔藓疾病潜在的血清学指标,值得进一步深入研究。     

330例颈源性头痛临床特征回顾性分析

目的:通过颈源性头痛患者临床特征的总结,进一步完善诊断标准。方法:对2008年10月至2009年6月以头痛为第一主诉的448例患者按照改进的颈源性头痛诊断标准进行筛选,符合诊断标准者399例,其中330例资料完整,男97例,女233例;年龄14～76岁,平均46.1岁;病程0.33～50年,平均13.4年。详细记录患者的年龄、性别、职业、头痛特点,查找压痛点位置及出现放散痛的范围等,并进行分析归纳。结果:颈源性头痛占头痛患者的比例为89.1%(399/448);男女之比为1∶2.4;78.8%(260例)的患者年龄在21～60岁,尤以41～50岁居多;97.3%(321例)的患者头痛呈阵发性,只有2.7%(9例)的患者呈持续性。多数患者的头痛性质呈胀痛(181例,占54.8%)或跳痛(135例,占40.9%),这两种性质的疼痛可能并存,其他类型的疼痛均为少数。多数患者的头痛部位为枕部、头顶、颞部,约1/3可波及到前额、眼眶、或眼球,极少数波及到耳、鼻翼及鼻梁等处。76.4%(252例)的患者为全头痛或双侧头痛,只有12.1%(40例)为单侧头痛。几乎所有患者均有枕神经卡压表现,其中73.3%(242例)为枕大、小神经混合受累;82.7%(273例)的患者枕部受到按压时出现向头部的放散痛。结论:①颈源性头痛占头痛患者比例较高;②现有诊断标准尚不完善,有必要改进;③按压颈枕部特定位置出现放散痛是其重要的诊断依据。     

循环microRNA作为肿瘤的非侵入性生物标志物

microRNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA,通过和靶mRNA的3'端非翻译区(3'untranslated re-gion,3'UTR)互补结合诱导靶mRNA的翻译抑制或剪切降解。miRNA表达量的变化和人类多种肿瘤的发生密切相关。肿瘤相关miRNA一般分为肿瘤抑制因子样的miRNA(tumor-suppressive miRNA)和原癌miRNA(oncogenic miRNA)。这些miRNA不仅在肿瘤发生和转移中发挥重要作用,而且也有可     

自有知识产权药品与制药企业竞争力的提升

目的提升制药企业竞争力。方法分析自有知识产权药品对提升制药企业竞争力的重要作用。结果与结论自有知识产权药品缺乏是我国制药企业竞争力低下的根源,应转变观念、建立研发战略、加大研发资金投入及构建创新体系,加强自有知识产权药品的研发,努力提升制药企业的竞争力。