凝血酶原前体蛋白在抗凝监测中的临床研究

目的探讨凝血酶原前体蛋白（PIVKA-Ⅱ）在华法林抗凝治疗监测中的意义。方法动态监测60例心脏机械瓣膜置换术后行抗凝治疗病人（实验组）的血浆PIVKA-Ⅱ浓度、凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、国际标准化比率（international normalized ratio,INR）,比较3者出现明显异常的最早时间,分析PIVKA-Ⅱ与胛及INR之间的相关性。结果实验组首次服华法林后6h,血浆PIVKA-Ⅱ浓度即出现明显异常,并随时间增加而增高;实验组首次服华法林后60h,PT出现明显异常,并随时间增加而增高;实验组首次服华法林后24h,INR出现明显异常,并随时间增加而增高;线性相关分析,结果显示PIVKA-Ⅱ浓度与PT呈正相关（r=0．786,P〈0．01）;PIVKA-Ⅱ浓度与INR呈正相关（r=0．737,P〈0．01）。结论在抗凝治疗的患者中,通过监测患者的血浆PIVKA-Ⅱ浓度可以有效地监测其抗凝程度,联合监测患者的血浆PIVKA-Ⅱ浓度、PT、INR则更能早期、有效的监测患者抗凝程度。     

小样本探讨黄嘌呤脱氢酶和鸟苷酸合成酶基因多态性对硫唑嘌呤所致骨髓抑制和脱发的影响

摘要：目的 研究黄嘌呤脱氢酶(Xanthine dehydrogenase,XDH)和鸟苷酸合成酶(Guanosine monophosphate synthetase,GMPS)基因多态性对硫唑嘌呤(Azathioprine,AZA)所致骨髓抑制和脱发的影响,探讨上述位点联合NUDT15 rs116855232检测对预测AZA所致骨髓抑制的价值。方法 回顾性分析曾经服用或正在服用AZA治疗自身免疫性疾病患者,收集静脉血采用直接测序法测定GMPS rs61750368、rs61750369,XDH rs2295475、rs1884725、rs17011368、rs566362和NUDT15 rs116855232基因型。依据不良反应进行分组,分析上述基因型与AZA所致骨髓抑制和脱发的相关性,NUDT15 rs116855232作为对照位点。结果 共纳入80例患者,2组在年龄、日剂量、疗程、BMI以及6-硫鸟嘌呤核苷酸浓度均无显著性差异(P＞0.05)。Logistic回归分析表明,AZA所致骨髓抑制与XDH rs229547突变相关(P=0.003, OR=3.10, 95% CI: 1.45~6.25),该基因预测骨髓抑制敏感度为69.6%,特异度为63.2%,ROC曲线AUC为0.66;NUDT15 rs116855232突变也和AZA所致骨髓抑制相关(P=0.008, OR=3.46, 95% CI: 1.21~9.93);其余位点基因型暂未发现与骨髓抑制和脱发相关。rs116855232野生型且rs2295475突变型的患者对比两位点野生型的患者,其骨髓抑制的危险值升高(OR=6.53, P=0.004),而两位点同时突变者骨髓抑制的危险值更高(OR=51.67, P＜0.001)。结论 在中国自身免疫性疾病患者中XDH rs2295475突变可能为AZA诱导骨髓抑制的独立危险因素,尽管预测准确度较低但仍有预测价值。尤其XDH联合NUDT15 rs116855232监测,可能会弥补NUDT15 野生型者对骨髓抑制预测不足的风险,提高NUDT15突变型对骨髓抑制预测的准确性,但以上结果还更多临床研究验证。     

LC-MS/MS法同时检测人血浆中厄洛替尼及其代谢物去甲厄洛替尼的浓度

目的 建立LC-MS/MS法测定人血浆中厄洛替尼及其代谢产物去甲厄洛替尼的浓度.方法 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以甲醇-水（含40 mmol/L NH4Ac）=70∶30（体积比）为流动相,采用ultimate XB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）色谱柱进行分离,流速为0.9 mL/min,通过电喷雾离子化串联质谱,以多反应监测（MRM）方式进行检测.结果 厄洛替尼线性范围为0.5～2 000 ng/mL（r=0.999 0）,去甲厄洛替尼线性范围为0.5～2 000 ng/mL（r=0.999 7）,最低定量下限均为0.5 ng/mL,厄洛替尼平均方法回收率为106.1％～ 108.7％,去甲厄洛替尼平均方法回收率为103.5％～ 105.5％,日内和日间变异均小于15％.结论 该方法具有快速简便、灵敏准确等特点,可满足厄洛替尼及其代谢物临床药物浓度测定的需要.     

HPLC同时测定肺宁制剂中4种成分的含量

目的 建立HPLC同时测定肺宁颗粒、肺宁胶囊和肺宁片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和金丝桃苷4种成分的含量。方法 采用Waters XBridge^TMC₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1;检测波长327,353 nm;柱温30℃。结果 4种成分在各自范围内线性关系良好（r>0.9990）,平均加样回收率96.1%~104.7%,RSD为0.4%~1.6%。结论 该方法准确、可靠,重复性好,可用于肺宁制剂的质量控制。     

液相色谱串联质谱法分析血浆中美金刚浓度及其应用

目的：建立一种新的液相色谱质谱法（LC—MS／MS）,测定人血浆中关金刚的浓度。方法：血浆样品经萃取后,以C18柱进行反相分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测。结果：血浆中关金刚测定线性范围为0．2-30μg·L^-1,最低定量限（LIDQ）为0．2μg·L^-1,r均大于0．99。日内和日间精密度均小于15％,绝对回收率大于79％。结论：该改良法选择性强、灵敏度高、重现性好,能快速、准确测定人血浆中关金刚浓度并成功应用于评估美金刚生物等效性的研究。     

以重组CD74胞外片段抑制巨噬细胞移动抑制因子（MIF）功能域活性

目的：巨噬细胞移动抑制因子（MIF）第50-65位氨基酸残基（MIF50-65）是其生物活性功能域。MIF需与Ⅱ型穿膜蛋白CD74的胞外片段结合后引发信号传导反应。本文拟筛选能特异结合MIF50-65的CD74胞外截短体片段，并研究重组该CD74截短体对MIF50-65活性的抑制作用。方法：利用酵母双杂交实验筛选MIF50-65与CD7473-149、CD74109-149、CD74109-232、CD7473-232中特异结合的CD74截短体。利用原核表达系统，在大肠杆菌中诱导表达重组CD74截短体多肽。用GSTrap亲合柱纯化重组蛋白，通过体外血管生成实验鉴定重组CD74截短体对MIF的阻断作用。结果：只有MIF50-65与CD7473-232共转化的酵母可以在SD／-Leu-His-Trp-Ade培养基上生长，且α-x-gal底物反应为蓝色。构建了重组质粒pGEX-4T-CD7473-232，经IPTG诱导后特异表达出可溶性的重组蛋白。重组CD7473-232能特异地阻断MIF的促血管生成作用。结论：CD7473-232能与MIF50-65特异结合，并对MIF生物活性有抑制作用。     

腹直肌鞘额外卵巢1例并文献复习

目的探讨腹直肌鞘额外卵巢的临床病理特征。方法收集1例腹直肌鞘额外卵巢的完整临床资料，对其常规光镜下的形态进行观察，复习相关文献，对其临床病理特征及相关疾病进行诊断及鉴别诊断。结果腹直肌鞘横纹肌内见卵巢黄体、白体及卵巢间质。结论临床诊断需与腹壁韧带样纤维瘤病、腹部瘢痕子宫内膜异位症、转移癌及纤维肉瘤进行鉴别。     

人ACE2基因真核表达载体的构建及其转染人内皮细胞的研究

目的:克隆人血管紧张素转换酶2(ACE2)基因,构建其真核表达载体并将之转染入体外培养的人血管内皮细胞中。方法:采用PCR方法从人胎儿心脏cDNA文库扩增出人ACE2cDNA全长基因,克隆到pcDNA3.1-D/V5-His表达载体上,构建重组真核表达质粒phACE2,经酶切和测序鉴定。采用脂质体法将phACE2转染至人血管内皮细胞中,分别利用实时定量PCR和Western印迹检测重组ACE2的mRNA和蛋白的表达情况。结果:经PCR、酶切和基因序列测定证实重组入载体的片段(2419bp)为目的基因序列,在转染的内皮细胞中发现ACE2的mRNA和蛋白的表达明显增加(P<0.01)。结论:本研究成功构建并表达了pcDNA3.1-hACE2重组真核表达载体,为该基因在高血压病防治中的功效研究奠定了基础。     

抑郁症患者多药耐药基因多态性对度洛西汀稳态血药浓度和临床疗效的影响

目的探讨抑郁症患者多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因的G2677T和C3435T位点多态性对度洛西汀稳态血药浓度和临床疗效的影响。方法 120例符合中国精神障碍分类与诊断标准第3版(CC-MD-3)抑郁发作标准的抑郁症患者接受度洛西汀治疗8周。在治疗前后采用汉密尔顿抑郁量表评估患者病情,检测8周时度洛西汀稳态血药浓度。检测患者的MDR1基因的G2677T/C3435T多态性。结果 8周后,MDR1基因的G2677T位点的不同基因型患者组之间度洛西汀稳态血药浓度和疗效的差异均有统计学意义(P<0.05),TT基因型组的度洛西汀稳态血药浓度高于GG和GT基因型组[(34.22±2.41)ng/mL,(31.49±3.32)ng/mL,(32.40±2.89)ng/mL,P<0.05],TT型患者组的疗效评分平均秩次较GG型患者组高(70.38 vs 51.65,P<0.05);C3435T位点的不同基因型患者组之间的度洛西汀稳态血药浓度和疗效差异有统计学意义(P<0.05),TT型的度洛西汀稳态血药浓度较CC型和CT型高[(33.99±2.40)ng/mL,(31.53±3....     

仿制与原研维格列汀片治疗2型糖尿病有效性和安全性比较的真实世界研究

目的比较第三批国家集中带量采购中标药品齐鲁制药有限公司生产的维格列汀片(仿制药)与诺华制药有限公司生产的维格列汀片(原研药)治疗2型糖尿病(T2DM)的有效性和安全性。方法研究设计为多中心回顾性队列研究, 研究对象为2020年1月至2021年12月于珠海市人民医院、中山市人民医院、江门市中心医院和中国人民解放军南部战区总医院门诊应用维格列汀片治疗的T2DM患者。利用医院电子病历系统收集符合纳入标准患者的门诊病历资料并提取相关临床数据。将患者分为仿制药组和原研药组, 为排除混杂因素的干扰, 对入选患者进行倾向性评分匹配。有效性评估指标为用药1年内糖化血红蛋白(HbA1c)和空腹血糖(FPG)的下降幅度, 应用广义线性回归模型分析HbA1c和FPG下降幅度的影响因素;安全性评估指标为用药1年内不良事件发生率。结果 4家医院共收集到4 511例服用维格列汀片治疗的T2DM患者, 仿制药组3 039例, 原研药组1 472例。用药后2组患者HbA1c和FPG均较用药前下降, 仿制药组患者HbA1c和FPG下降幅度与原研药组比较差异均无统计学意义[0.50(0.05, 2.30)%比0.90(-...