市售含对二氯苯防蛀剂对大鼠吸人毒性的研究

目的研究含对二氯苯防蛀剂对大鼠的吸入毒性。方法急性吸入毒性选用60只大鼠（SD），随机分为6组，每组10只，雌雄各半，组距按1．5倍设计剂量系列。亚急性吸入毒性选用大鼠（SD）随机分组，每组10只，雌雄各半。用静式呼吸道染毒法，分别设700、1400、2400mg／m^3剂量染毒，2h／d染毒，阴性对照为空柜。观察动物行为状态，每实验组末次染毒24h后进行血液检测，处死动物，取其肝、肾、脾、肺、心脏称重，计算脏体系数，并取相应的组织制备病理切片。结果大鼠急性吸入毒性‰为8858mg／m^3。血液检测差异无统计学意义；高剂量组肝肾重量增加；病理切片肝细胞浊肿，肾小管上皮细胞肿胀。结论中、高剂量染毒组对大鼠有一定的毒性影响。     

甲3型流感病毒M基因披甲RNA的研制

目的 研制内含甲3型流感病毒M基因RNA的披甲RNA.方法 将MS2噬菌体基因组中编码成熟酶蛋白、包膜蛋白和pac位点的DNA片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒pAR-1.将甲3型流感病毒M基因连接到pAR-1 pac位点的下游,诱导表达出内含M基因RNA的披甲RNA AR-2,并进行纯化、定量和稳定性研究.结果 成功构建和表达了耐核糖核酸酶、内含M基因RNA的披甲RNA,每1 ml LB培养基可诱导表达出约8.9×1011个拷贝的AR-2.结论 制备的AR-2稳定,无生物传染危险性,可作为甲型流感病毒M基因核酸检测的标准品和质控品.     

复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型

目的应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法。方法根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型。结果酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp)。结论PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型。     

2006年杭州市麻疹病毒分离株N和H序列分析

目的:分析杭州市2006年杭州麻疹病毒分离株N与H核酸序列变异情况。方法:用RT-PCR对6个临床急性期麻疹病人的咽拭子标本及其麻疹病毒分离株的(Vero-slam细胞培养)扩增核蛋白(N)和血凝素蛋白(H)基因片段,并对本次分离株的核酸序列与近期分离株和疫苗株进行对比。结果:从标本中直接检测N片段基因的结果与细胞培养病毒的结果完全相符。本次分离株N片段基因与分离株浙江CHN/9.05/7、浙江CHN/02/2相似性分别为98.96%、96.04%,与疫苗株Shanghai-191、Changchun-47相似性均为94.58%;分离代表株H基因片段与分离株浙江CHN/02/2、浙江CHN/9.05/7相似性分别为99.59%、99.07%,与疫苗株Shanghai-191、Changchun-47相似性分别为95.14%、95.04%。结论:RT-PCR直接从标本中检测相关基因片段可作为分子病毒学研究的方法,但经细胞培养增殖后效果更好。麻疹病毒尽管遗传稳定,但还是存在着变异。     

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌0157：H7的分子生物学特性研究

目的：了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157：H7（HZI-11株）的分子生物学特性。方法：应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种。应用0157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因，进行菌株血清型的鉴定。应用多重Real-time PCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因。对菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型，并与国内代表菌株进行比较。ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性。结果：细菌生化鉴定为大肠埃希菌，山梨醇阴性。血清型为O157：H7。毒力基因stx2、hly和eae均阳性，stx1阴性。PFGE谱带同江苏分离O157：H7菌株几乎完全相同，带型的相似度为97％。结论：该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）O157：H7。与国内近年在江苏等地流行的STEC O157：H7菌株密切相关。STEC O157：H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁。     

市售含对二氯苯防蛀剂对大鼠吸入毒性的研究

目的 研究含对二氯苯防蛀剂对大鼠的吸入毒性.方法 急性吸入毒性选用60只大鼠(SD),随机分为6组,每组10只,雌雄各半,组距按1.5倍设计剂量系列.亚急性吸入毒性选用大鼠(SD)随机分组,每组10只,雌雄各半.用静式呼吸道染毒法,分别设700、1 400、2400 mg/m3剂量染毒,2 h/d染毒,阴性对照为空柜.观察动物行为状态,每实验组末次染毒24 h后进行血液检测,处死动物,取其肝、肾、脾、肺、心脏称重,计算脏体系数,并取相应的组织制备病理切片.结果 大鼠急性吸入毒性LC50为8 858 mg/m3.血液检测差异无统计学意义;高剂量组肝肾重量增加;病理切片肝细胞浊肿,肾小管上皮细胞肿胀.结论 中、高剂量染毒组对大鼠有一定的毒性影响.     

杭州地区2011－2013年儿童呼吸道感染人偏肺病毒分子流行病学研究

目的 了解杭州地区儿童人偏肺病毒(hMPV)的分子流行病学特点.方法 收集2011年1月至2013年12月杭州市2所哨点医院儿科呼吸道门诊和住院病例2 593例,门诊病例采集咽拭子1 676份,住院病例采集气管吸取物917份.用实时荧光定量PCR方法检测hMPV核酸,阳性样本用RT-PCR方法对hMPV 融合蛋白(F)部分基因片段扩增和序列测定.所测基因序列与GenBank代表株核苷酸同源性比较,并构建基因进化树.结果采用描述性统计和样本率的χ²检验.结果 杭州地区呼吸道患儿hMPV检出率为6.51%(169/2 593).门诊检出率为6.62%(111/1 676),住院检出率为6.32%(58/917),检出率差异无统计学意义(χ²=0.086,P=0.769).2岁和3岁组检出率最高,分别为14.14%(28/198)、14.01%(22/158),与其他组比较差异有统计学意义(χ²=38.654,P=0.000).冬春季检出高于夏秋季(χ²=67.032,P=0.000).测序的88株阳性基因序列与GenBank参考株核苷酸序列同源性为81.6%～100.0%,基因进化树分析显示分属于2个基因型的4个亚型. 2011－2012年B1亚型占优势,2012年底至2013年A2型为流行.<1岁组A基因型(67.56%,25/37)与≥1岁组(43.13%,22/51)检出率差异有统计学意义(χ²=5.143,P=0.023).结论 杭州地区儿童呼吸道感染hMPV存在4种基因型,<1岁组A基因型感染较多,2、3岁组hMPV检出率最高.     

浙江省首例人感染H7N9禽流感病例的实验室检测与分析

目的 通过对杭州市萧山区1例疑似人感染禽流感病人咽拭子和鼻腔冲洗液样本进行检测和分析,加深对A型流感病毒抗原变异特性的认识,进一步提高实验室相应的检测能力.方法 以实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测流感病毒核酸,对未能分型的HA、NA和M基因通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增而后克隆测定;同时接种狗肾细胞(MDCK)进行病毒培养.结果 样本A型流感病毒核酸检测为阳性,但未能分型;HA、NA、M基因测序结果表明与禽源H7、N9、M基因相似性最高;同时A型流感病毒培养也呈阳性.结论 经过浙江省CDC与中国CDC证实,该患者感染H7N9禽流感病毒,为浙江省首个病例.     

杭白菊总黄酮对铅诱导小鼠氧化损伤的拮抗效应研究

目的：探讨杭白菊总黄酮(total flavonoids from Chrysanthemum morifolium，TFCM)对铅诱导小鼠脑、肝脏和肾脏氧化损伤的拮抗效应。方法：将90只雄性小鼠分为9组：正常组，模型组，阳性药组，TFCM低、中、高(150，300，500 mg·kg-1)剂量组，TFCM低、中、高剂量+二巯基丁二酸(DMSA,70 mg·kg-1)组。前20 d，除正常组外，其余小鼠隔天腹腔注射醋酸铅建立铅中毒模型；接下来的10 d，各组小鼠灌胃给予受试物。实验结束后，摘眼球取血及各脏器，测定全血、脑、肝脏、肾脏中铅、锌和铜的含量，计算脏体比重系数，并对抗氧化酶活性及脂质过氧化水平进行检测和分析。结果：TFCM可拮抗铅中毒小鼠体重的下降和脏体比重的升高。单独使用TFCM对小鼠血液及组织中铅浓度并无显著影响，但与DMSA联合使用时排铅效果显著(P＜0.01)，且未造成锌、铜的流失。中、高剂量TFCM在增加小鼠脑GSH含量，GSH-Px, SOD ,CAT活性及降低MDA含量方面，效果明显优于DMSA；高剂量TFCM在增加小鼠肝脏和肾脏GSH-Px, CAT活性及降低MDA含量方面，效果也明显优于DMSA。TFCM与DMSA联合使用时，也可显著改善小鼠脑、肝脏和肾脏脂质过氧化，增加GSH,GSH-Px,SOD和CAT的活性，效果优于单独使用DMSA。结论：TFCM可显著提高铅中毒小鼠组织中抗氧化酶的活性，改善脂质过氧化，从而明显拮抗铅诱导的脑、肝脏和肾脏氧化损伤。     

建立单管双向荧光PCR方法检测NQO1基因609C/T多态性

目的 建立单管双向荧光PCR方法快速测定人NAD(P)H:醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]基因609C/T多态性.方法 以人NQO1基因中的609C/T位点,设计双向引物,优化反应条件,应用SYBR GreenⅠ双向荧光PCR扩增191份人基因组DNA标本,并通过对产物进行熔解曲线分析,根据产物Tm值进行等位基因单核苷酸多态性分型.对其中62份标本用经典的PCR-限制性片段长度多态方法进行基因型分型,验证结果准确性.结果 62份样本的单管双向荧光PCR方法的基因型结果与PCR-限制性片段长度多态法分型结果符合率100%.191份样本中,纯合野生型(CC)占28%,杂合型(CT)占50%,纯合突变型(TT)占22%.结论 单管双向荧光PCR方法检测NQO1基因609C/T多态性,操作简便、反应过程快速,结果直观,敏感性、准确性和稳定性好,适用于临床样本检测及流行病学调查研究.