新疆O139群霍乱弧菌93006菌株基因组文库的构建

目的：构建我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株(93006菌株)的基因组文库,为研究我国O139群霍乱弧菌的来源及其基因组特征提供资料。方法：制备霍乱弧菌高相对分子质量的基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组。DNA部分酶切成平均大小为32∽40kb的片段,将部分酶切并经碱性磷酸酶(CIAP)处理的DNA片段与经XbaI、CIAP、BamHI处理的粘粒载体SuperCosl的载体臂相连接,连接产物经体外包装并转染大肠杆菌XL-BluelMR,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,构建霍乱弧菌的基因组文库。结果：该文库共获得了1200个单克隆,平均插入片段的大小为32kb,空载率为0．05％,相当于9个库容量,从本文库中筛选到任一霍乱弧菌的DNA单拷贝序列的机率为99．98％,该文库能承受7次反复冻溶。结论：成功构建了我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株93006的基因组文库,为进一步克隆霍乱弧菌的基因和研究我国O139群霍乱弧菌的来源奠定了基础。     

幽门螺杆菌融合基因hspA-ureB重组质粒的构建及其编码蛋白抗原性预测

目的：构建幽门螺杆菌(H．pylori)郑州分离株MEL-HP27的hspA-ureB融合基因的克隆,并运用生物信息学软件预洲融合蛋白HspA-UreB的空间结构和抗原性。方法：从重组质粒pNHA27和pNUB27分别纯化同收hspA和ureB基因片段,并以hspA-ureB的顺序插入温控表达载体pBV220中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。利用生物信息学软件和Genbank数据库分析hspA-ureB表达蛋白的抗原性和空间结构。结果：质粒酶切电泳和特异PCR均可见2．06kb的融合基因片段。生物学软件分析显示：MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的长度为689个氨基酸,蛋白相对分子质量为76500,等电点为5．79,具有5个抗原活性结构域。结论：成功构建了MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的重组表达质粒,编码融合蛋白具有典型抗原分子的结构特征,有望成为H.pylori疫苗候选抗原。     

HbAlc及oxLDL与糖尿病微血管病变的关系

目的 :研究分析氧化修饰低密度脂蛋白 (ox L DL)对糖尿病微血管并发症发生的影响。方法 :测定 5 6例 2型糖尿病患者 (其中有微血管病变者 36例 ,无微血管病变者 2 0例 )及 40例正常健康人的 ox L DL 及 Hb Alc水平 ,并对两组间各指标进行 t检验。结果 :糖尿病组 ox L DL 及 Hb Alc高于正常对照组 (分别 P<0 .0 5 ) ;无微血管病变组 ox L DL及 Hb Alc显著高于对照组 (分别 P<0 .0 5 )。有微血管病变组 ox L DL及 Hb Alc显著高于对照组 (分别 P<0 .0 1)。结论 :2型糖尿病患者 ox L DL及 Hb Alc均升高 ,尤其对有微血管病变者升高更显著 ,提示这两个指标对糖尿病微血管病血管病变起着明显的促进作用。     

鼻咽癌放疗后首次出现继发放射性鼻窦炎时间评估患者预后的临床价值

目的探讨鼻咽癌放疗后首次出现继发放射性鼻窦炎时间评估患者预后的临床价值。方法回顾2007年1月至2011年12月中国科学院大学附属肿瘤医院以及2015年1月至2018年12月杭州市第一人民医院吴山院区符合纳入排除标准共297例初治鼻咽癌患者的临床及MRI影像资料。根据MRI影像评估首次出现放疗后继发放射性鼻窦炎时间。结合鼻窦炎首发时间及其他相关临床资料,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,计算累积总生存率、累积无进展生存率、累积无局部复发生存率、累积无转移生存率。应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果平均随访时间（46.08±13.71）个月,累积总生存率、累积无进展生存率、累积无局部复发生存率、累积无转移生存率分别为87.2%、86.1%、86.9%、86.1%。单因素分析显示,首次发生放疗后继发放射性鼻窦炎不同时间患者的T分期、N分期、国际抗癌联盟/美国抗癌联合会分期、是否化疗比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。多因素分析显示,放疗后1个月发生的继发放射性鼻窦炎是预测累积总生存率、累积无进展生存率、累积无局部复发生存率、累积无转移生存率的独立风险因素（均P＜0.05）,T3~T4期是影响累积总生存率的独立风险因素（P＜0.05）,N2~N3b是影响累积无局部复发生存率和累积无转移生存率的独立风险因素（均P＜0.05）。结论MRI影像学上观察到放疗后较早发生的继发放射性鼻窦炎（1个月）是预测累积总生存率、累积无进展生存率、累积无局部复发生存率、累积无转移生存率的独立风险因素,可作为临床评估鼻咽癌预后的一项经济、简便、有效的参考依据。     

幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白可溶性表达产物的纯化及活性鉴定

目的 :建立一种有效的纯化幽门螺杆菌HspA UreB融合蛋白可溶性表达产物的方法。方法 :基因工程重组大肠杆菌BL2 1(pET HU2 7)诱导表达产物 ,超声破碎后收集上清 ,上清经盐析初步纯化后 ,在 ¨AKTAFPLC上运用HiTrapChelatingHP分离纯化 ,用SDS PAGE和Bradford法检测目的蛋白的纯度和含量 ,用West ern blot对纯化后蛋白进行免疫学活性鉴定。结果 :纯化后HspA UreB融合蛋白的纯度 >90 % ,含量达 0 15mg/ml,并可以被免疫小鼠血清识别。结论 :建立了从BL2 1(pET HU2 7)可溶性表达产物中纯化高纯度HspA UreB融合蛋白的方法 ,为进一步的动物实验研究奠定了基础。     

氯诺昔康静脉镇痛配伍药物含量的高效液相色谱法测定

目的 建立应用高效液相色谱(HPLC)技术同时测定静脉镇痛液中盐酸氯胺酮、盐酸曲马多、丁溴东莨菪碱、氟哌利多、咪达唑仑与氯诺昔康含量的方法.方法 采用日本DL-C18(150mm×4.6mm,5 μm)色谱柱,乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾水溶液(21:79)为流动相,流速为0.8 ml/min.结果 盐酸氯胺酮、盐酸曲马多、丁溴东莨菪碱、氟哌利多、咪达唑仑与氯诺昔康分别在40～400 mg/L,8～800 mg/L,0.5～100 mg/L,0.5～25 mg/L,4～80 mg/L与4～400 mg/L浓度范围与峰面积具有良好的线性关系;平均加样回收率分别为98.6%、101.1%、100.4%、99.5%、98.3%与99.8%;相对标准偏差分别为1.12%、0.67%、0.95%、1.23%、1.72%与0.78%.结论 本方法方便、快速、准确,可以作为盐酸氯胺酮、盐酸曲马多、丁溴东莨菪碱、氟哌利多、咪达唑仑与氯诺昔康配伍检测的方法.

Abstract：

Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of ketamine, tramadol, butylbromide,droperidol,metamizole and lomoxicam in analgesic mixture samples. Methods The chromatographic separation was achieved on DL-C18 (150 mm x 4. 6 mm,5 μm) with the mobile phase consisting of acetonitile and 0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution (21:79) at a flow rate of 0.8 ml/min. Results The linearities were in the ranges of 40-400 mg/L for ketamine,8-800 mg/L for tramadol, 0.5-100 mg/L for butylbromide,0.5-25 mg/L for droperidol,4-80 mg/L for metamizole and 4-400 mg/L for lomoxicam. The average recovery was 98.6% , 101.1% , 100.4% , 99.5% , 98.3% and 99.8%, respectively. RSD was 1.12% , 0.67% ,0.95% , 1.23% , 1.72% and 0.78%. Conclusion The method is sensitive,rapid and accurate and suitable for compatible determination of ketamine, tramadol, butylbromide,droperidol, metamizole and lomoxicam in analgesic mixture samples.     

自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放

目的 通过研究肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法 利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生自噬的水平,通过测定染毒细胞培养上清中EV71病毒CCID50来观察抑制自噬后细胞释放EV71感染性病毒颗粒的变化.结果 EV71的感染促进了细胞LC3的型别转换和F62的降解,诱导了细胞发生自噬;3-MA抑制细胞自噬后,EV71染毒细胞产生的感染性EV71病毒颗粒数量减少.结论 EV71可以诱导细胞发生自噬,细胞自噬可能促进EV71感染性病毒颗粒的产生和释放.

Abstract：

Objective To determine whether or not enterovirus 71 ( enteroviurs 71, EV71) may induce autophagy and affect the production and release of EV71 after the treatment of autophagy inhibitor. Methods Western blots were performed to examine the conversion of LC3- Ⅰ to LC3-Ⅱ and the degradation of P62 after the RD-A cells were infected with EV71. CCID50 was determined by checking the virus titer in the supernatant of cells that treated with autophagy inhibitor 3-MA. Results EV71 infection enhances the type conversion of LC3 and degradation of P62. The infectious virus particles were decreased after the treatment of 3-MA. Conclusion EV71 infection could induce cell autophagy and the autophagy might contribute to the production and release of infectious EV71 particles.     

志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系

目的 了解临床分离志贺菌调控基因marOR的突变情况,并探讨其与主动外排泵表达水平的关系.方法 对100株临床分离志贺菌和本实验室筛选的敏感菌及标准株的marOR基因进行聚合酶链反应(PCR),对扩增产物进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析,对marOR基因突变株进行测序,利用RT-PCR测定其泵基因acrA、acrB和tolC的表达水平,并对其进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明等6种药物的药敏试验.结果 100株临床分离志贺菌、敏感株及标准株均扩增出marOR基因,未发现该基因缺失株;SSCP分析发现marOR基因的突变率为23%;随机选择11株marOR基因突变株和1株敏感株及标准株进行测序,其中有9株存在4个碱基的缺失和3个位点的碱基突变,RT-PeR分析表明11株marOR基因突变株的acrAB-tolC主动外排泵表达水平高于敏感株和标准株,且该11株均为多蕈耐药株.结论 在该实验中志贺菌marOR基因突变率较高,其突变株的acrAB-tolC主动外排泵基因高表达,可能增加耐多药性.     

不靠谱的补钙“良方”

这是个全民补钙的时代,除了遵照医嘱,民间也有许多补钙"良方"。其实,这些大家耳熟能详的补钙方法,并不怎么靠谱。大骨头汤补钙几乎人人都喜欢用大骨头汤补钙,觉得它味道鲜美,含钙量高,补钙的同时,还补充了其他营养,没有副作用,老少皆宜,很多人还喜欢吸里面的骨髓,认为那是骨头里面的精华。其实,大骨头汤根本起不到补钙的作用,因为它里面含的是有机钙,人体无法吸收,骨髓里面的胆固醇含量超高,经常食用,