人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制。方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平。结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义。结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切。     

人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.     

卵巢癌组织中DNA聚合酶β检测

目的观察不同演进过程卵巢组织中DNA聚合酶β（polβ）mRNA的表达。方法，采用含有内对照的半定量RT—PCR方法，检测41例卵巢癌患者（其中浆液性囊腺癌21例，黏液性囊腺癌13例，子宫内膜样癌7例）及正常卵巢组织31例polβmRNA的表达。结果浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、子宫内膜样癌polβmRNA含量差异无显著性，但均高于正常卵巢组织中的表达水平（均P〈0．05）。组织学分级中2级、3级DNA pol βmRNA的相对表达量明显高于1级（均P〈0．05），临床分期FIGOⅢ期、Ⅳ期DNA pol βmRNA的相对表达量明显高于Ⅰ期、Ⅱ期（均P〈0.05）。结论在卵巢癌组织中存在着pol13的高表达，肿瘤分化程度越低以及临床分期越高其表达量越高。     

西兰花中异硫氰酸盐诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡作用及其机制的研究

目的：探讨西兰花中异硫氰酸盐(isothiocyanates,ITCS)诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡过程中的作用及其可能机制。方法：不同浓度ITCS处理人肝癌细胞HepG-2,应用MTT法检测ITCS对HepG-2细胞增殖的影响；流式细胞仪检测活性氧、线粒体膜电位(Δψm)和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果：ITCS可明显抑制HepG-2细胞增殖；15,30,60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内活性氧分别为(23.1±1.8)%,(53.3±3.3)%,(57.9±2.0)%,(79.9±3.4)%,(93.4±2.6)%；Δψm分别为(94.8±5.5)%,(91.8±5.4)%,(66.0±5.6)%,(65.5±6.6)%,(44.3±2.7)%；60,120,240 μg·mL^-1的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%,(21.9±4.4)%,(70.2±5.3)%。结论：ITCS能够通过刺激HepG-2细胞内活性氧的产生,损伤线粒体,使其膜电位下降,引起HepG-2细胞凋亡。     

硫辛酸联合尼莫地平治疗老年糖尿病周围神经病变的临床观察

目的:观察硫辛酸联合尼莫地平治疗老年糖尿病周围神经病变的临床效果。方法:将78例老年糖尿病周围神经病变患者随机均分为2组。治疗组给予硫辛酸600mg,静脉滴注,qd;尼莫地平40mg,口服,tid。对照组给予尼莫地平40mg,口服,tid。2组均连续治疗3周。观察2组治疗前、后临床症状和神经传导速度的变化。结果:治疗后,2组临床症状、神经传导速度明显改善。与对照组比较,治疗组改善更加明显(P<0.05)。2组均未见严重不良反应发生。结论:硫辛酸联合尼莫地平治疗老年糖尿病周围神经病变,疗效显著,安全性较好。     

四甲基吡嗪促进远端结肠黏膜分泌HCO_3~-的机制探讨

目的探讨四甲基吡嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）促进远端结肠黏膜分泌HCO3-的相关机制。方法采用Ussing小室装置,在去除细胞外Cl-的情况下,观察TMP对大鼠远端结肠黏膜短路电流的影响。结果基底膜侧加入TMP引起短路电流的升高,但是顶端膜预先加入DPC（Cl-通道抑制剂）后,TMP的作用降低大约60%（P〈0.01）。基底膜侧预先加入DIDS（Na-HCO3-共转运体阻断剂）后,TMP的作用无显著改变（P〉0.05）。基底膜侧和顶端膜均预先加入乙酰唑胺（碳酸酐酶阻断剂）后,TMP的作用降低大约45%（P〈0.05）。结论 TMP可以促进远端结肠黏膜分泌HCO3-,这一作用是通过细胞内的碳酸酐酶和顶端膜的Cl-通道来实现的。     

DNA聚合酶β靶向siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的：构建DNA聚合酶β（polβ）靶向的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体。方法：根据GenBank中人DNApolβ基因（M13140）的全长序列,利用设计分析软件设计2个DNApolβ靶向发卡样siRNA结构,退火后形成双链,克隆入表达载体pslience2.0-GFP,得到重组质粒pslience2.0-GFP-sipolβ1和pslience2.0-GFP-sipolβ2。通过限制性核酸内切酶酶切和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定。结果：经酶切鉴定寡核苷酸已成功插入表达载体pslience2.0-GFP,DNA序列分析表明插入片段序列与合成的siRNA序列相同。结论：成功构建了靶向DNApolβsiRNA真核表达载体。     

海嘧啶对小白鼠S180、EAC和H22肿瘤细胞膜钠泵活性的影响

目的 观察海嘧啶对小白鼠实体型肿瘤（S180）和腹水型肿瘤（EAC,H22）细胞膜钠泵活性的影响。方法 荷瘤小鼠分为治疗组和对照组,分别测定各组瘤细胞膜钠泵活性。结果 海嘧啶对小鼠S180、EAC及H22肿瘤细胞膜钠泵活性有明显的抑制作用。结论 海嘧啶抗肿瘤的药理机制与其能够抑制肿瘤细胞膜钠泵活性有关。     

海嘧啶对小鼠肝脏脂质过氧化反应的影响

目的观察海嘧啶对荷瘤小鼠肝脏脂质过氧化反应的影响。方法S180（骨肉瘤）及EAC（艾氏腹水癌）荷瘤小鼠随机分为三组：正常组、阴性对照组和海嘧啶治疗组。海嘧啶治疗组：小鼠接瘤后24h后腹腔注射药物,50mg／kg。连续给药7d。阴性对照组给相同体积的生理盐水。分别测定肝组织的LPO、GSH—PX和SOD的含量。结果荷瘤小鼠肝中LPO含量升高,而GSH—PX和SOD均含量降低;海嘧啶治疗组荷瘤小鼠肝中GSH—PX和SOD的活性升高,LPO的含量降低。结论海嘧啶的抗肿瘤机制可能与它能提高抗氧化酶的活性,清除过多自由基有一定关系。     

川芎嗪对蛙心收缩力的影响及其机制探讨

目的 探讨不同剂量的川芎嗪对蟾蜍心脏的作用及其相关机制。方法 采用离体蛙心灌流法观察川芎嗪对蟾蜍心脏收缩力的影响。结果 在正常、无钙和高钙任氏液中,4mg／L的川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力;在正常和高钙任氏液中,400mg／L的川芎嗪明显降低蟾蜍心脏的收缩力,且川芎嗪在高钙溶液中的作用明显强于正常任氏液组;而在无钙任氏液中,400mg／L的川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力。结论小剂量川芎嗪不能够影响蟾蜍心脏的收缩力,大剂量川芎嗪可以通过抑制细胞外的Ca2^ 内流来降低蟾蜍心脏的收缩能力。