缬沙坦下调糖尿病大鼠肾皮质葡萄糖转运蛋白1和TGFβ1 mRNA的表达

观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏皮质葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达的影响,以探讨其保护肾功能的机理。用链尿佐菌素腹腔注射法复制糖尿病大鼠模型,动物随机分为糖尿病组、缬沙坦治疗组及对照组;分别于实验第4．6周末测定大鼠平均动脉压、血糖、血肌酐、尿肌酐、肾重／体重、尿白蛋白排泄率及平均肾小球面积和平均肾小球体积。用逆转录-PCR(RT-PCR)法对肾皮质GLUT1及TGFβ1mRNA表达进行半定量分析。在第4周及第6周末,各组大鼠平均动脉压无差异,治疗组肌酐清除率、肾重／体重、尿白蛋白排泄率及肾小球平均面积和平均体积均显著低于同时期的糖尿病组。糖尿病组GLUT1及TGF1mRNA表达较正常组显著增高,治疗组二者表达均有所下降。缬沙坦能够下调糖尿病大鼠肾皮质GLUT1及TGFβ1mRNA表达,具有保护肾脏的作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3表达的影响

目的探讨氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子3(STAT3)及STAT3 mRNA表达的影响。方法30只大鼠随机分成正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组(每日灌胃给予氯沙坦40mg／kg，共2周)。腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型，采用免疫组化和Western印迹检测磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达，Western印迹检测STAT3蛋白表达，半定量RT—PCR检测STAT3 mRNA的表达。结果糖尿病组肾小球STAT3、p-STAT3及STAT3 mRNA表达较正常对照组明显增强；氯沙坦治疗组p-STAT3表达较糖尿病组降低，但对STAT3蛋白及STAT3 mRNA的表达无明显影响。结论氯沙坦的肾脏保护作用可能是部分通过影响STAT3磷酸化，抑制信号通道而发挥作用。     

Raf/MEK/ERK信号转导通路在糖尿病肾病发生发展中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）广泛存在于真核细胞内，在上游蛋白Ras蛋白、蛋白激酶C作用下将细胞外有关信号转导到细胞核内部而引起多种细胞反应。Raf／MAPK／细胞外信号调节激酶通路是MAPK家族中的重要一员，糖尿病状态下高血糖、血流动力学异常、肾素一血管紧张素系统激活、内皮素（ET）-1以及转化生长因子（TGF）-β、血小板源性生长因子等均可使之激活，诱导肾小球系膜细胞肥大，细胞外基质合成增加，降解减少，从而参与和促进糖尿病肾病的发生、发展。     

环氧化酶-2与肺癌

环氧化酶-2（COX-2）在肺癌细胞呈过表达,并且促进肿瘤增殖、侵袭、血管生成和抗凋亡。COX-2抑制剂在动物实验中可抑制肿瘤生长。进一步了解COX-2介导的肿瘤生成及其与其它分子的相互作用机制可能为肺癌的治疗提供新的途径。     

抑瘤素M在肾小管上皮细胞转分化中作用及AG490的影响

目的探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在抑瘤素M(oncostatin M,OSM)诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为对照组、OSM(10μg.L-1)组、OSM(10μg.L-1)+AG490(10μmol.L-1)。于处理后72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)水平。ELISA检测细胞培养上清液中FN和ColⅠ的浓度。结果 OSM能促使人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,同时促使HKC分泌FN和ColⅠ增多,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18在小管上皮细胞中的表达逐渐减少;AG490干预能减弱OSM对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导及细胞外基质FN和ColⅠ的分泌作用,同时使CK-18的表达逐渐回升。结论炎症因子OSM能诱导HKC表型转分化并促使细胞外基质的分泌,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断OSM的该作用。     

靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响

目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。     

叔丁基对苯二酚对糖尿病小鼠肾脏氧化应激损伤及Nrf2蛋白表达的影响

目的研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对早期糖尿病小鼠肾脏Nrf2-ARE信号通路表达及氧化应激的影响,探讨tBHQ保护肾脏的部分机制。方法CD-1♂小鼠随机分为3组,对照组(C组)、糖尿病组(DM组)、tBHQ干预组(DM+tBHQ组)。腹腔注射STZ诱发糖尿病小鼠模型,DM+tBHQ组在成模3d后给予添加了1%tBHQ(W/W)的饲料喂养,4wk后检测3组动物的血糖、肾功能、24h尿白蛋白定量、血清及肾皮质丙二醛(MDA)含量。免疫组化和Westernblot检测Nrf2,HO-1蛋白在肾组织的定位和表达水平。结果①DM组小鼠血尿素氮、24h尿白蛋白定量、肾重/体重,血清及肾皮质MDA含量较C组升高。tBHQ干预组上述指标均降低。②与DM组相比,tBHQ干预组肾皮质总蛋白Nrf2、HO-1及核蛋白Nrf2表达水平明显增高;免疫组织化学检测显示Nrf2于肾小管及肾小球的胞质及胞核内均有表达;HO-1主要表达于肾小管上皮细胞胞质中。结论tBHQ减轻了早期糖尿病小鼠肾脏的氧化应激损伤,其作用机制可能是部分通过激活Nrf2-ARE信号通路进而增强抗氧化蛋白HO-1的表达而实现的。     

高糖通过SREBP-1促进人肾小管上皮细胞转化生长因子β1和纤维黏连蛋白表达

高糖刺激人肾小管上皮细胞(HKC)48 h后,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、转化生长因子β(TGF-β1)和纤维黏连蛋白(FN)表达增Jm(均P<0.01).以RNA干扰技术下调SREBP-1表达后,高糖刺激的TGF-β1和FN蛋白表达分别减少17.9%和24.6%(均P<0.01).     

戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.