Study on norcantharidin-induced apoptosis in SMMC-7721 cells through mitochondrial pathways

Objective: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced SMMC-7721 hepatoma cell apoptosis. Methods: SMMC-7721 cell growth inhibition was measured by the MTT method. Apoptosis was detected by Annexin Ⅴ/propidium iodide staining. The mitochondrial membrane potential was measured by flow cytometry. Western blot analysis was used to evaluate the level of cytochrome c, caspase-3, AIF, Bcl-2 and Bax expression. Results: NCTD inhibited SMMC-7721 cell growth in a time-and dose-dependent manner. The cells treated with NCTD showed the loss of mitochondrial membrane potential. The activities of caspase-3, cytochrome c, AIF, and Bax were up-regulated after NCTD treatment at different doses. The expression of Bcl-2 was decreased after treatment with NCTD. Conclusions: NCTD could induce SMMC-7721 cell apoptosis. The activation of the mitochondrial pathway was involved in the process of NCTD-induced SMMC-7721 cell apoptosis.     

幽门螺杆菌hp0521基因编码蛋白的生物信息学分析

［摘要］目的: 对4株幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)中hp0521基因编码的细胞毒素相关基因2(cytotoxin associated gene 2,Cag2)蛋白从生物信息学角度进行基本理化性质、信号肽及功能的预测分析。方法: 用PCR技术克隆测序获得4株Hp菌株的hp0521基因序列,生物信息学工具分析其编码Cag2蛋白的基本理化性质、有无信号肽及蛋白指纹图谱。 结果： 成功克隆测序4株Hp菌株的hp0521基因序列,提交基因库后获得相应登录号;hp0521基因编码的Cag2蛋白氨基酸数目和相对分子质量大小不同,理论等电点偏碱性,为稳定亲水性蛋白,不存在信号肽;Cag2蛋白指纹图谱分析存在DNA拓扑异构酶Ⅰ、IL 3细胞因子、抗增殖蛋白BTG1家族、介导细胞壁延伸的蛋白、卤酸脱卤酶/环氧水解酶、调节染色体凝集功能RCC1家族等蛋白标签。结论： Hp中hp0521基因编码的Cag2蛋白可能介导细胞壁延伸和调节染色体凝集,参与致病信号通路的传导,可能具有DNA拓扑异构酶Ⅰ、卤酸脱卤酶/环氧水解酶等相应酶活性。     

致病性小肠结肠炎耶尔森菌外膜蛋白A对SD大鼠免疫保护作用研究

目的 研究致病性小肠结肠炎耶尔森菌外膜蛋白A(OmpA)对大鼠的免疫保护作用,为研制疫苗提供技术基础。方法 将SD大鼠随机分为3组,通过腹股沟注射方式对大鼠进行免疫,包括OmpA免疫组(OmpA+弗氏不完全佐剂)、对照组(PBS+弗氏不完全佐剂)和空白对照组(未做任何处理)。经首次免疫(0.58 mg/只)和加强免疫(1 mg/只)后,用两个浓度的致病性小肠结肠炎耶尔森菌Ye92010(10⁶ CFU、10⁸ CFU)对OmpA免疫组和对照组进行攻毒,观察攻毒后各组大鼠的体征、排菌情况以及组织病理学改变。结果 攻毒后OmpA免疫组与对照组大鼠均出现厌食、被毛杂乱、粪便呈松软非颗粒状等症状。OmpA免疫组大鼠粪便排菌时间均为14 d,对照组大鼠粪便排菌时间分别为17 d(低剂量攻毒)和21 d(高剂量攻毒)。OmpA免疫组的肝、脾、肠组织病变程度相对较轻,组织变性及坏死灶情况明显优于对照组。结论 结合各组大鼠粪便排菌时间和大体观察结果,表明实验大鼠经OmpA免疫后可有效抵御致病性小肠结肠炎耶尔森菌的肠道定植,且组织病理学改变明显减轻,提示OmpA对SD大鼠具有良好的免疫保护作用。     

桂皮醛对大鼠体内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的清除效应

目的:研究桂皮醛对大鼠体内耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜的清除作用.方法:采用皮下羧甲基纤维素钠(CMC)-囊袋法制备MRSA在SD大鼠体内的生物膜模型,并给模型大鼠连续4天腹腔注射桂皮醛(cinnamaldehyde,...     

幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性

幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50％以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌VacA基因(vac4)及其产物,以及不同基因型与疾病的关系,对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。     

唐氏综合征胎儿、新生儿及其孕母血清铜蓝蛋白的表达特点

目的 探讨胎儿、新生儿及其孕母血清铜蓝蛋白的表达与唐氏综合征(Down syndrome,DS)的关系. 方法 采用双向凝胶电泳+质谱的蛋白组学技术检测6例DS胎儿孕母和6例正常胎儿孕母血清中差异蛋白的表达,采用Western印迹技术验证蛋白组学结果.采用酶联免疫吸附试验检测11例DS胎儿孕母、10例正常胎儿孕母、11例DS新生儿及10例正常新生儿血清铜蓝蛋白的含量.组间差异比较采用两独立样本t检验. 结果 在DS胎儿孕母血清中鉴定出29种差异蛋白,其中铜蓝蛋白上升最为显著,与正常胎儿孕母相比,蛋白表达密度比值达5.43,差异有统计学意义(t=2.7102,P＜0.05).Western印迹结果显示,DS胎儿孕母血清中铜蓝蛋白表达水平(0.95±0.24)明显高于正常胎儿孕母(0.37±0.14)(t=2.9521,P＜0.05),而DS新生儿血清铜蓝蛋白表达水平(0.74±0.03)显著低于正常对照新生儿(0.89±0.06)(t=-2.9515,P＜0.05).酶联免疫吸附试验显示,DS胎儿孕母血清铜蓝蛋白含量为(346.5±111.8) ng/ml,明显高于正常胎儿孕母血清的(248.6±78.3)ng/ml,差异有统计学意义(t=2.301,P＜0.05).然而,DS新生儿血清铜蓝蛋白水平[(166.1±55.0) ng/ml]却低于正常对照新生儿[(244.0±36.0)ng/ml],差异有统计学意义(t=-3.873,P＜0.01). 结论 孕母及新生儿血清铜蓝蛋白表达水平异常可能与DS存在密切联系.     

幽门螺杆菌cagL基因缺失株的建立

目的:构建幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagL基因缺失株,为研究cagL基因的功能奠定基础。方法:利用同源重组原理,PCR扩增该基因编码区两侧序列,作为同源臂,构建出带卡那霉素抗性标志的载体,采用电穿孔法将其转化入受体菌中,并经PCR验证后获得了cagL基因缺失株;突变株和野生株分别与胃上皮细胞GES-1共培养后,检测其对CagA蛋白转运的影响。结果:构建cagL基因缺失的自杀质粒,并获得一株cagL基因缺失株;CagA转运实验表明,cagL基因缺失后,导致幽门螺杆菌CagA转运功能的丧失。结论:成功获得了幽门螺杆菌cagL基因缺失株,该基因参与CagA蛋白的转运,是该菌IV型分泌系统中重要组成成分之一。     

幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性

幽门螺杆菌感染呈全球性分布，与多种胃部疾病有密切关系，人群感染率在50％以上。该菌分泌的空泡毒素Va认在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VaeA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同，不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌V以基因(t础)及其产物，以及不同基因型与疾病的关系，对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。     

4HPR诱导Hela细胞凋亡

目的：实验结果证明４ＨＰＲ对Ｈｅｌａ细胞具有较强的抑制作用，本文从细胞凋亡角度研究４ＨＰＲ抑制Ｈｅｌａ细胞生长的机理。方法：采用电子显微镜、细胞ＤＮＡ琼旨糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法，分析４ＨＰＲ诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡的形态学、生化学及细胞生物学改变特征。结果：电子显微镜下：细胞固缩、核膜扭曲、核染色体聚集成块并靠近核膜；细胞ＤＮＡ被降解，在１．５％琼脂糖凝胶电泳上出现典型的阶梯状图谱（ＤＮＡ Ｉａ     

金黄色葡萄球菌生物膜感染的治疗新技术研究进展

金黄色葡萄球菌(SA)是以形成生物膜造成感染的常见病原菌。细菌一旦形成生物膜极易产生耐药,其耐药程度是浮游菌的100~1 000倍。如何防治SA生物膜及其相关感染已成为当前研究的热点。目前已有一些除抗菌药物之外的新技术用于治疗SA生物膜相关感染,并取得很好的治疗效果。本文就此作一综述。