亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌毒力因子表达的抑制作用初步研究

目的探索亚抑菌浓度茅苍术挥发油对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)毒力因子如α溶血素等表达的抑制作用及其机制。方法采用微量肉汤稀释法测定茅苍术挥发油对4株金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);吸光度测量等方法体外检测亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用下金黄色葡萄球菌毒力因子产量的变化;采用Real-Time PCR法检测亚抑菌浓度挥发油对AgrA和Hla mRNA表达的影响。结果茅苍术挥发油可抑制金黄色葡萄球菌生长并呈现浓度依赖性,标准菌株ATCC25923的MIC为0.0625%(v/v),临床菌株的MIC为0.03125%(v/v)。亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用后4株菌株凝固酶的分泌受到抑制,标准菌株ATCC25923的凝固酶效价只有对照组的1/4,差异有统计学意义(P<0.05),临床菌株的凝固酶效价都只有对照组的1/8,差异有统计学意义(P<0.05)。亚抑菌浓度茅苍术挥发油减弱了四株菌株的粘附能力,ATCC25923、SA1.5、SA2.3和SA4.12的粘附能力分别只有对照组的(53.71±6.56)%(P<0.01)、(53.10±9.39)%(P<0.01)、(74.70±9.00)%(P<0.01)和(45.62±21.22)%(P<0.01)。标准菌株ATCC25923和SA2.3的溶血活力受到亚抑菌浓度挥发油的显著抑制,溶血活力分别只有对照组的(18.48±23.88)%(P<0.01)和(1.63±4.18)%(P<0.01)。α-溶血素毒力基因Hla及其调控基因AgrA的表达受到了亚抑菌浓度挥发油的抑制,其表达水平分别只有对照组的(6.17±2.23)%(P<0.01)和(24.79±9.19)%(P<0.01)。结论茅苍术挥发油能抑制金黄色葡萄球菌的生长,并且对多种毒力因子的表达有抑制作用。     

幽门螺杆菌耐药的分子机制及检测方法研究进展

幽门螺杆菌是胃肠疾病的重要病原体,现其耐药率日渐增高,笔者对其耐药现状与趋势进行分析,探讨其耐药机制及耐药检测手段,为与幽门螺杆菌相关疾病的诊断、治疗提供依据,积累资料.     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a( ),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.     

抑癌基因PTEN与胃癌的研究进展

PTEN基因是迄今发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，该基因的突变失活与人类多数恶性肿瘤的发生发展密切相关，本文综述了PTEN在胃癌中的最新研究进展。     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌（H．pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表达系统，探索研制H．pylorl疫苗的新途径。[方法]培养和收集H．pylori NCTC11637菌株，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序，再将目的基因克隆入PET32a（＋），构建重组表达载体PET32a—OMP36。转化E．coli BL21后舢诱导表达，经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白。[结果]测序分析表明。插入的基因片断为987bp，表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为36kDa。并显示具有良好的抗原性。SDS—PAGE检测表明，表达量占细菌总蛋白的37％。镍亲和层析纯化率约92％。Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的编码基因，其表达产物0MP36有望成为新的Hp疫苗候选分子，为H．pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

幽门螺杆菌感染的胃黏膜组织硒含量的检测及其临床意义

目的研究幽门螺杆菌(HP)感染与胃黏膜组织硒含量关系。方法应用快速脲酶试验、WarthinStarry银染色确定HP感染;应用国标法检测组织硒含量。结果114例HP感染的胃粘膜组织硒含量平均为(2173±18858)μg/g;12例正常组织硒含量为(3.42±151)μg/g。硒含量在HP感染的胃粘膜病变组织中有不同程度的改变,尤以慢性浅表性胃炎患者为著,尽管随胃黏膜病变程度加重相对降低,但仍高于正常组织。各种HP感染胃粘膜组织的硒含量经两两比较,除伴异型增生(DYS)与胃癌(GC)外(P>005),其余各组均有显著性意义(P<005)。结论在HP感染的各种胃黏膜病变组织中,硒含量升高可能系对活性氧增加的保护性反应,一定浓度的硒可以防止HP对胃黏膜的损伤。     

复方炎平水提物抗炎作用机制初探

目的研究中药复方炎平水提物(YP)的抗炎作用机制。方法利用放免法测定磷酸二酯酶(PLA2)和环氧酶2(COX2)活性及MTT法检测小鼠腹腔巨噬细胞NO生成。结果100μg/mlYP可明显抑制PLA2活性,并抑制COX2的活性;100μg/ml以上YP可明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成。结论YP对PLA2和COX2的活性具有抑制作用,并可减少炎症反应过程中NO的生成。     

去甲斑蝥素通过c-Jun氨基末端激酶通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分~([1-3]),曾试用于治疗原发性肝癌,能够缓解患者病情~([4-8]).但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用~([9-12]).近年来陆续合成了不良反应少的同类药物,如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺及甲基斑蝥胺等.     

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

目的:构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体.方法:应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET-28a(+)-cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+-NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价.结果:测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+-NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶ 1.6×105.结论:首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗体,为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与治疗奠定了基础.