EDTA-K3依赖性血小板假性减少症分析

EDTA盐是国际血液学标准化委员会(ICSH) 1993年建议用作血液分析的抗凝剂,但EDTA盐有时可导致血小板发生聚集从而导致血液分析仪做血小板计数时出现假性偏低的现象,即EDTA依赖性血小板假性减少症(EDTA dependentpseudothrombocytopenia ,EDTA dependentPTCP)。现报道该类患者2例。1　病例介绍及相关检验结果病例1:患者男,36岁,因上呼吸道感染就医。取EDTA K3 抗凝静脉血做血液常规分析,红细胞、白细胞及各参数均正常,但血小板计数结果偏低(2 0×10 9/L) ,询问患者并无出血倾向如鼻、牙龈出血、紫癜等。将抗凝静脉血涂片镜检,…     

CRF01_AE CRF07_BC和B''''亚型HIV-1 pol基因及耐药特征分析

目的 研究中国部分地区新发现未经抗病毒治疗的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者的耐药情况,及不同亚型毒株pol基因的多态性对耐药突变产生的影响.方法 选取2005-2006年湖南、云南、四川和新疆4省(自治区,下同)当年确认的部分样本,进行核酸扩增及测序,利用系统进化及重组分析的方法确定亚型;根据美国斯坦福大学HIV-1耐药数据库,分析不同亚型毒株蛋白酶基因和逆转录酶基因的多态性和耐药突变情况;利用荷兰乌得勒支大学Vijver等人使用的一种遗传障碍定量方法,计算并比较不同亚型间耐药突变产生的遗传障碍.结果 共得到84份样本PR基因区(1-99氨基酸)和RT基因区(1-272氨基酸)的序列,亚型分析显示:84份样本中B'亚型13份,01AE重组亚型27份,07BC重组亚型44份,其中18份样本在蛋白酶基因区的第10位和第71位存在次要耐药突变;来自云南省和湖南省的3份样本中,存在逆转录酶抑制剂相关耐药突变,分别是A62V、V179D和G190A.三种亚型在逆转录酶基因区的2个非核苷类抑制剂相关耐药突变位点V106M和V108I的遗传障碍存在差异,有显著的统计学意义(P＜0.001).结论 4个地区未冶疗感染者中耐药发生的水平较低.遗传障碍的比较,CRF01AE、CRF07BC与B'亚型病人经治疗后主要耐药突变的发展模式应基本一致.     

河南和新疆地区HIV-1毒株gp120和gag基因的变异分析

目的分析中国河南和新疆地区艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)毒株gp120和gag基因全长序列的变异特征。方法PCR扩增河南和新疆HIV-1确认阳性样本前病毒DNA gp120和gag全长基因,测序得到40份gp120和41份gag基因序列,用GCG软件包等软件进行分析。结果河南省HIV-1毒株为B′亚型,新疆维吾尔自治区HIV-1毒株为CRF07 BC亚型。B′亚型毒株gp120基因中变异程度最大的区段是V5区段,最小的是C1区段;CRF07BC亚型毒株中变异最大的是V1区段,最小的是C4区段。两种亚型毒株gp120和gag基因的Ks/Ka值<1(P<0.05)。结论对于病毒基因全长序列的分析可以更多地反映病毒的特性。gp120基因各个区段在B′和CRF07BC亚型毒株中的变异程度不一致。B′和CRF07 BC亚型毒株的gp120基因和gag基因都受到正向选择压力的作用。     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体，观察RNA干扰（RNAi）技术，对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术，设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞，荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达，计算转染效率，半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率，流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率，比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后，荧光显微镜下观察转染效率约40％；Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示，转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示，转染pAKT2-shRNA后，紫杉醇25nmol／L处理细胞12h，与空白对照组和阴性对照组相比，细胞凋亡率显著增加，P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达；运用RNAi技术，降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平，能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。     

贵州省HIV-1毒株亚型分布研究

目的揭示贵州省HIV-1亚型毒株分布特点。方法用套式PCR扩增HIV-1毒株外膜蛋白并基因测序分析。结果62例样本扩增测序成功52例,其中B亚型3例,B’亚型4例,C亚型2例,E亚型2例,BC重组亚型41例。结论贵州省HIV-1病毒以BC重组亚型流行为主,多亚型并存;提示亚型分布复杂,来源广泛,防治难度大。     

浙江省HIV/AIDS未治疗人群耐药基因特征研究

目的：横断面了解浙江省未治疗人群耐药基因变异情况,补充耐药监测本底数据。方法：选取2004-2006年期间在各市县接受流行病学调查的104例未治疗HIV/AIDS感染者,对病毒载量高于最低检测限的99个样本进行HIV蛋白酶（PR）全长和部分逆转录酶（RT）基因区进行RT-PCR扩增测序。使用Stanford HIV Drug Resistance Database（ht-tp：//hivdb.stanford.edu）的在线耐药序列分析软件HIV DB进行序列分析,寻找耐药相关突变位点,并做出样本对各药物敏感性的结论。结果：扩增得到74份PI区序列,1份样本存在蛋白酶抑制剂（PIs）主要相关突变,耐药突变率为1.35%;得到83份RT区序列,4份样本存在逆转录酶抑制剂（RTIs）相关突变,耐药突变率为4.8%。总耐药突变率为6.02%（5/83）。结论：浙江省未治疗HIV感染者中耐药相关突变处于低流行状态。但具体感染者体内存在的PR和RT区主要耐药突变位点,会导致对抗病毒治疗药物不同程度的耐药,应该争取条件对治疗前病人进行基因型耐药检测。     

九江市HIV-流行毒株基因序列测定和亚型分析

目的：了解九江市HIV-1流行毒株的亚型分布情况。方法：对采集的6份九江市HIV-1感染者的血浆样品进行RT—PCR扩增，获得GAG基因的核酸片断进行核苷酸序列分析。结果：在6份样品中发现B’亚型HIV-1毒株四株，B亚型和A／E重组亚型HIV-1毒株各一株。结论：HIV-1流行毒株亚型在九江市分布情况复杂，防控形势严峻。     

山东省HIV-1感染者分子流行病学研究

目的了解流行于山东省境内艾滋病病毒(HIV-1)毒株的亚型及各种亚型的分布特点。方法对93例HIV感染者进行详细的流行病学调查，并采集外周静脉防凝血，提取前病毒DNA进行体外扩增，获得包膜蛋白(env)、核心蛋白(gag)、tat区基因的核酸片段，并对各基因区核苷酸进行测定和分析。结果发现在所有目标人群中共存在B、B’、C3种亚型以及CRF07-BC、CRF08-BC、CRF02-AG和CRF01-AE 4种重组毒株，B’亚型在人群和地域上分布最广，涉及献血员、受血者、二者的配偶和性乱人群，分布在山东省10个地市；CRF07-BC、CRF08-BC亚型以吸毒人群为主，分布在5个地市；CRF01-AE和其他亚型则主要为性乱人群，集中在几个经济发达的城市。结论山东省HIV-1亚型众多，各亚型在我省高危人群和地域分布不平衡，各有特点，从总的亚型流行特征来看，HIV-1在我省有流行加快的趋势。     

TSA增强人卵巢癌顺铂耐药株C13对顺铂敏感性的体外研究

目的：本研究探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂triChoStatin A（TSA）联合化疗药物顺铂（DDP）处理人卵巢癌顺铂耐药株C13＊的协同效应。方法：MTT法观察TSA、DDP、TSA＋DDP对C13＊细胞增殖的影响；克隆形成实验分别检测DDP、TSA＋DDP处理C13＊的克隆形成率；流式细胞仪检测凋亡和分析细胞周期；Hochest33258观察凋亡细胞形态。结果：40nmol／L TSA处理C13＊12h，细胞的凋亡率为2．99％，MTT显示生长未受明显影响；TSA＋DDP组较DDP组C13＊对DDP的作用更为敏感，在DDP为20～30μmol／L时差异显著（P〈0．05）。结论：一定浓度的TSA和DDP联合应用可以增强人卵巢癌顺铂耐药株C13＊对顺铂的敏感性。     

十二指肠前肝十二指肠韧带

患儿 :女 ,40ｄ。生后 2ｄ出现呕吐 ,每次进奶后半小时呕吐 ,大便一日一次或数日一次 ,量少。外院以幽门痉挛给予阿托品口服治疗无缓解 ,转来我院。入院时患儿有严重营养不良、脱水。体重 2 .5ｋｇ,巩膜和皮肤无黄染 ,上中腹可见肠型 ,并触及 4.0ｃｍ× 2 .0ｃｍ包块 ,能推动。血液生化检查显示低氯性碱中毒。Ｘ线钡餐检查示十二指肠第一段延长扩张 ,仅少许钡剂进入降部。考虑上消化道梗阻 ,急诊行剖腹探查术。术中见十二指肠球部延长为 7ｃｍ ,肝十二指肠韧带下段从球部远端前面越过止于其下缘和胰头上缘之间。其中有门静脉和胆总管及较多…