HIV-1 B''亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析

目的分析我国HIV-1B′亚型R5或R5／X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性。方法采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒，用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系，测定毒株的辅助受体利用情况，使用相同病毒量即2mg的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系，通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白（GFP）的表达反映病毒感染细胞的能力。结果35例B′亚型毒株利用CCR5受体，占22例（62．85％），双嗜性即CCR5／CXCR4均阳性占13例（37．15％）。GHOST-R5／X4细胞的感染性分析结果显示，R5／X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4〉200／μl的R5毒株的感染性（P〈0．05）；R5／X4毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4〉200／μl的R5毒株与CD4≤200／μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义（P〈0．05）；GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示：R5／X4双嗜性毒株的感染性明显下降，与CD4〉200／μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义（P〉0．05）。利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5／X4的GHOST细胞系，显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体，但69．23％的R5／X4毒株以CCR5受体为主，30．77％的R5／X4毒株以CXCR4受体为主。结论HIV-1B′亚型R5／X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性，而且在GHOST-R5／X4细胞中感染性明显提高。持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的，但病毒感染细胞的能力增加。     

实时荧光定量RT-PCR监测恒河猴体内人/猴免疫缺陷病毒载量在传代过程中的变化

目的为分析中国SHIV/猕猴AIDS模型的病毒载量变化趋势,建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒的定量检测方法。方法体外转录制备RNA标准品,利用TaqManEZRT-PCR试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的TaqMan探针和引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR。提取126份来自SHIV-CN97001感染恒河猴血浆病毒RNA并定量检测。结果利用梯度稀释的RNA标准品对反应体系进行优化,标准曲线下限达到2×102拷贝/ml,相关性(r>0.99)及重复性(CV=4.14%)均能达到测定要求。病毒载量的检测结果表明SHIV-CN97001在猴体内传代过程中病毒载量有先升后降的趋势,病毒载量通常在接种病毒或感染猴的全血后第14天达到高峰。血浆载量可达到105~106拷贝/ml。结论成功地建立了一步法定量SHIVRNA的实时荧光定量RT-PCR,为SHIV/恒河猴AIDS模型的建立与应用提供了灵敏的病毒载量检测方法。SHIV-CN97001的体内繁殖能力在猴体内传代过程中有所增强。     

我国HIV-1 B''亚型毒株gag基因变异特征研究

目的研究我国人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）B’亚型主要流行株在宿主免疫压力下的基因变异及抗原表位的变化特征，探讨选择压力、基因离散率和抗原表位变化之间的关系。方法从确诊的HIV-1感染者的全血样本中提取基因组DNA，经套式聚合酶链反应（PCR）扩增后，将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析，使用GCG软件包的Distance程序对P17和P24两个区段计算基因距离，用Diverge程序计算同义替换（1（s）和非同义替换（1（a）及二者之间的比值，并对我国人群中较常见的HLA型别限制的CTL表位的突变情况进行分析。结果HIV-1B’亚型毒株的P17区段的Ks／Ka值〈1，而P24区段的Ks／Ka值〉1；P24部分的基因离散率低于P17部分；P17区段抗原表位的保守率为34．94％，而P24区段抗原表位的保守率为67．38％；从基因离散率、所受的选择压力及抗原表位的突变率3个方面来看，HIV-1的P17区段均明显大于P24区段。结论HIV-1B’亚型毒株的P17区段的抗原表位变化较大，而P24区段的抗原表位相对较为保守。提示P24区段的CTL表位更适合于表位疫苗的研制。     

EIAV减毒疫苗诱导马外周血单个核细胞Th1型细胞因子的转录

目的：探讨马传染性贫血病毒驴白细胞减毒疫苗免疫马后,外周血单个核细胞中Th1型细胞因子转录水平与免疫保护应答的关系,揭示DLV的免疫保护机制。方法：应用分子克隆及实时定量RT-PCR技术,建立了马PBMC中IFNγ-、IL-2、IL-12 mRNA转录水平的定量检测方法,定期观察4组（疫苗免疫组、阴性对照组、强毒株阳性对照组、自然感染组）12匹马外周血PBMC中细胞因子的转录水平及分布特征,同时监测体温变化等指标。疫苗株免疫动物8个月后,用EIAV强毒株攻击,观察攻击前后细胞因子转录水平的变化。结果：DLV免疫马,在免疫后3周外周血PBMC中IFN-γ、IL-2转录量显著高于阴性对照组及自然感染组（P〈0.01）;免疫后用EIAV强毒株攻击,IFNγ-、IL-2和IL-12转录的量明显升高,免疫马获得完全保护;强毒株攻击阳性对照马IFN-γ、IL-2转录量随疾病进展波动,发热期下降。结论：本研究首次证明EIAV减毒疫苗可诱导马外周血PBMC中IFN-γ、IL-2、IL-12基因高效转录,其转录水平与DLV的免疫保护密切相关,此结果在分子水平为阐明DLV的免疫保护机制提供了新的实验依据。     

病毒载量和T淋巴细胞计数在HIV感染者临床治疗疗效观察中的应用

目的 研究病毒载量检测和CD4^ 计数在评价人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者疗效中的应用效果。方法 对HIV感染者临床病例73例进行了实验室和临床观察，其中包括6例鸡尾酒治疗病例、36例中药试验性治疗病例及31例未进行治疗的感染者。主要实验室指标包括血浆病毒载量及T淋巴细胞亚群计数。结果 在进行治疗后3个月时联合治疗组的病毒载量明显低于其他两组，并且在其后保持在很低的水平，CD4^ 计数水平明显高于其他两组并在其后持续升高。在整个观察期间，中药治疗组的病毒载量检测和CD4^ 计数水平与未治疗组差异无显著性，但在临床症状观察中中药治疗组较未治疗组有明显改善。结论 病毒载量检测和CD4^ 计数试验是评价抗HIV治疗疗效的有效方法。     

早期HIV-1感染env基因的动态变异研究

目的 追踪观察HIV-1新发感染者体内CRF07_BC重组毒株膜蛋白基因的变异性.方法 从HIV-1感染者血浆中提取总RNA,通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得HIV-1 gp120全长及C2-C5区段基因.纯化后装入T载体,转化至Top10大肠埃希菌内增殖,通过蓝白斑筛选获得阳性克隆,运用PCR方法进行鉴定,最后对所获得的目的克隆测序.结果从两个感染者血浆样品中获得感染后半年到2年半间多个时间点的gp120基因克隆共135个及gp120基因C2-C5区段克隆15个,分析显示这些克隆均为HIV-1 CRF07_BC亚型.随感染时间的延长,HIV-1 env基因的离散率与多样性均有增加的趋势.env基因同义突变与非同义突变比较结果显示,C1、C3与V4区段非同义突变比率比gp120基因的其他区域都高.基因多态性分析的结果显示,同一时间点内不同毒株基因在不同区段的变异是不同的,基因多样性介于0与0.066±0.028之间.结论 随着患者感染时间的推移,HIV-1膜蛋白基因的变异逐渐增大.C1、C3和V4区的高突变率提示,该基因区可能是HIV-1病毒生存与宿主免疫压力相互作用的主要位点.     

中国恒河猴(Macaca mulatta)外周血CD4+CD25+T淋巴细胞的研究

目的:研究中国恒河猴外周血中CD4 CD25 T淋巴细胞亚群及其分布频率。方法:利用流式细胞术对50只中国恒河猴外周血CD4 CD25 T淋巴细胞进行了分析。结果:发现所有被检测的恒河猴个体中均存在明显的CD4 CD25 T淋巴细胞亚群;CD4 CD25 T淋巴细胞大约占CD4 T淋巴细胞的9.1%(变化范围为2.6%～18.1%);其中CD4 CD25highT淋巴细胞约占2.5%(0.3%～5.5%)。对不同年龄和性别个体中CD4 CD25 T淋巴细胞频率的初步分析未发现统计学上有年龄或性别差异。结论:中国恒河猴可用于与CD4 CD25 T细胞相关的人类疾病的研究中。     

以社区为基础招募的乌鲁木齐市吸毒者首次吸毒发生情况的调查

目的:在横断面调查的基础上,采用生存分析方法(survivalanalysis)探讨乌鲁木齐市社区吸毒人群发生首次吸毒的情况及其影响因素。方法:于2005年4-6月,以应答驱动抽样为主要招募方式,在社区招募吸毒者参加调查;应用结构式问卷调查吸毒者的社会人口学特征、首次口吸和静脉注射毒品时间、方式,首次吸毒前的个人成瘾性行为(如吸烟、饮酒)及家庭成员、亲友吸毒情况等。结果:401名静脉注射毒品者进入本次横断面调查,首次吸毒方式为口吸和静脉注射毒品者分别为95·0%(381/401)和5·0%(20/401),首次使用的毒品均为海洛因,首次吸毒年龄19·8a±s5·0a,首次吸毒年龄最小值为6·4a,15a以前开始吸毒者占14·2%(57/401)。从出生到首次吸毒的发生率为5·0/100人年(95%CI:4·5-5·5),影响首次吸毒发生的变量为:维族(HR=2·161,95%CI:1·713-2·726)、15a以前开始吸烟(HR=1·273,95%CI:1·006-1·610)、16a以前开始饮酒(HR=1·774,95%CI:1·387-2·269)、有亲戚吸毒(HR=1·411,95%CI:1·032-1·928)。从出生到发生首次吸毒的时间分别为:维族17·9(95%CI:17·2-18·5)a,15a以前开始吸烟者为20·0(95%CI:20·0-20·8)a,16a以前开始饮酒者为17·0(95%CI:16·6-17·7)a,有亲戚吸毒者为19·2(95%CI:18·6-20·0)a。结论:提示吸毒流行严重地区,吸毒低龄化可能会加速艾滋病的流行。在青少年早期开展个人成瘾性行为(如吸烟、饮酒)的干预教育及艾滋病知识的宣传教育非常必要,维族青少年应该是重点干预人群。     

四川省西昌市吸毒人群首次吸毒情况的调查分析

目的:调查四川省西昌市吸毒人群首次吸毒的发生情况。方法:在四川省凉山彝族自治州西昌市戒毒所、拘留所和看守所调查吸毒人员的人口学特征,吸毒前吸烟和饮酒的情况,朋友、亲戚和家人吸毒的人数,首次吸毒的时间和使用毒品的方式和种类,吸毒前是否有被治安处理或违法行为。结果:共调查了619名吸毒人员,从出生到首次吸毒的发生率为4·08/100(95%可信区间为3·76-4·40)人年。在多因素Cox比例风险模型中,15a以前开始吸烟(危险率比值为1·58;95%可信区间为1·35-1·86),朋友中吸毒的人数(朋友中有1-4人吸毒危险率比值为1·25;95%可信区间为1·04-1·51,朋友中有5人及以上吸毒危险率比值为1·71;95%可信区间为1·39-2·09)和研究对象来源(拘留所和看守所危险率比值为1·52;95%可信区间为1·18-1·96)与首次吸毒的发生率有统计学意义。结论:需进一步了解首次吸毒发生的情况及其影响因素,为开展健康教育和行为干预来预防吸毒和有关疾病的传播提供科学依据。     

西昌市静脉吸毒人群HIV/AIDS流行趋势分析

目的 在西昌市静脉吸毒人群中，利用传播动力学数学模型预测未来几年艾滋病病毒(HIV)伎滋病(AIDS)的流行趋势。方法 对当地静脉吸毒人群进行HIV感染横断面和前瞻性队列研究获得的有关数据，利用离散型HIV／AIDS传播动力学数学模型进行分析。结果 建立了静脉吸毒人群中的HIV／AIDS传播动力学模型，给出了有关参数的确定；通过数值模拟对未来几年HIV感染情况进行了预测。结论 由模型可以看出：如果不采取干预措施，到2010年西昌市静脉吸毒人群中的累计HIV感染者／AIDS患者人数约为1070，HIV感染率约为18％；如果采取适当的干预措施，使得HIV感染者的传染性降低50％，则到2010年累计HIV感染者／AIDS患者人数约为630．HIV感染率约为8％。因此．对吸毒人群施加必要的干预措施．就变成一项非常有意义的工作。