DNMT3B基因启动子单核苷酸多态性C46359T与中国北方汉族人群ITP发病的相关性研究

目的 探讨甲基化转移酶家族DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）发病的相关性。方法采用PCR—RFLP结合DNA测序技术检测201例ITP患者及136例正常对照DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结果在ITP患者和正常对照中均未检测到C／C基因型。在正常对照中．T／T纯合型和C／T杂合型及T、C等位基因的频率分别为97．8％、2．2％、98．9％和1．1％。ITP患者和正常对照之间的基因型和等位基因频率相比无统计学差异（P值分别为0．745和0．747）。ITP患者按年龄和病程分组,儿童组和成人组、儿童急性组和慢性组及成人急性组和慢性组之间的基因型和等位基因的分布均无统计学差异。结论ITP患者和正常对照的DNMT3B基因启动-149位基因型的基因型分布类似;中国北方人群中,DN—MT3B基因启动子-149位基因多态性不能作为ITP易感性的一个预测指标。     

重组人血小板生成素治疗特发性血小板减少性紫癜的多中心随机对照临床试验

目的评价重组人血小板生成素(rhTPO)治疗糖皮质激素无效的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的有效性和安全性。方法采用多中心、随机开放、空白对照方法,将糖皮质激素治疗无效的患者随机分为试验组(rhTPO+达那唑)和对照组(达那唑)。两组患者在整个试验阶段均口服达那唑0.2g/次,3次/d。试验组皮下注射rhTPO1.0μg/kg,1次/d,疗程14d,停用rhTPO后观察14d。对照组口服达那唑14d后,如血小板仍≤20×109/L接受rhTPO治疗,用法如前,停用rhTPO后观察14d。试验的主要终点是比较两组间第一阶段(前14d内)血小板计数增加的最高值和血小板计数的曲线下面积;次要终点是比较两组间第一阶段的显效率和有效率,对照组第二阶段应用rhTPO前后的血小板计数、显效率和有效率。结果入选患者140例,试验组和对照组分别为73例和67例,最终进入FAS集者分别为73例和63例,进入PPS集者分别为60例和50例。主要终点FAS结果显示:试验组rhTPO治疗后血小板计数最高值平均增加101.2×109/L,显著高于对照组的33.3×109/L(P=0.0060);试验组血小板计数的曲线下面积749.6,显著高于对照组的316.2(P=0.0000)。次要终点FAS结果显示:试验组第一阶段的显效率和有效率(显效+良效)分别为38.4%和60.3%,明显高于对照组的7.9%(P=0.0003)和36.5%(P=0.0104);对照组第一阶段第14天血小板计数≤20×109/L的患者,接受rhTPO治疗后显效率和有效率分别达到31.1%和66.7%。试验组停用rhTPO后血小板计数逐渐下降,但停药14d时仍维持在50×109/L左右。rhTPO对白细胞计数、血红蛋白、胆红素、凝血试验、抗GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb自身抗体无明显影响。不良事件的发生率,试验组和对照组分别为34.3%和26.2%,其中以肝胆指标异常最常见,分别为15.1%和16.9%。rhTPO相关的不良事件发生率13.6%,主要有轻度嗜睡、头晕、短暂性视野缺损、过敏样反应和乏力等。结论 rhTPO是一种治疗慢性ITP的疗效确切、较为安全的药物。     

高压尾静脉注射和位点特异性整合介导的人凝血因子Ⅸ基因治疗血友病B小鼠

目的 通过高压尾静脉注射将携带attB和人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)的质粒与表达phiC31的质粒共同导入血友病B小鼠肝脏细胞,检测目的 质粒能否整合入小鼠基因组并持续表达.方法 ①构建表达hFⅨ并携带attB核心序列的真核表达载体attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP,并在体外验证该载体能否表达目的 基因.②用高压尾静脉注射法将该载体与表达phiC31的质粒CMV-int共注入血友病B小鼠,attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP单独注射为对照.③ELISA的方法检测hFⅨ在其体内的表达;用出血时间评价血友病小鼠出血症状是否改善;用巢式PCR检测attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP是否整合到基因组的整合热点mpsL1(mouse pseudo-site from liver 1)位点.结果 经鉴定,attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP载体构建成功,并在体外表达hFⅨ.高压尾静脉注入血友病B小鼠24 h后,hFⅨ血清水平达到最高值为(1533±239)ng/ml,此时小鼠的出血症状明显改善.但是不论是否与CMV-int共注射,此后hFⅨ水平迅速下降,在注射后10 d内降到本底水平.巢式PCR的结果证实,attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP整合到小鼠肝脏基因组的mpsL1位点.结论 phiC31可以将34 bp的attB最短序列整合到小鼠基因组的整合热点mpsL1;由CMV启动hFⅨ的能够瞬间高表达并有效改善血友病小鼠的出血症状;但是外来DNA进入细胞后,无论是否整合到基因组均被迅速沉默,说明肺脏和肝脏对整合入基因组的CMV启动子表达调控的机制不尽相同,因此对用于基因治疗的裸DNA进行改进使其适合在靶器官表达是十分必要的.     

抗凝血杀鼠药中毒九例临床观察

为探讨抗凝血杀鼠药中毒致维生素K依赖性凝血因子缺乏症的临床特征及治疗,我们对我院诊治的9例抗凝血鼠药中毒致维生素K依赖性凝血因子缺乏症的临床资料进行分析,报告如下.     

脐血血管内皮祖细胞的分离和诱导分化

目的 从脐血中分离内皮祖细胞，诱导其向内皮细胞分化，研究内皮祖细胞的生物学特性和诱导分化条件。方法 从新鲜脐血中纯化的CD133^ 细胞接种于添加了VEGF、bFGF、IGF—1的M199培养液中，观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。结果 培养3—4d可观察到梭形贴壁细胞，14d左右可形成索条状结构，贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志VE-cadherin,vWF,UEA-1和VEGFR-2。结论 脐血中含有内皮祖细胞，在一定的条件下，可分化为内皮样细胞。     

血管内皮祖细胞的研究进展

在胚胎发育过程中，血管系统的建立始于两种方式：血管发生和血管新生。传统理论认为血管新生即是出生后血管发生的代名词。然而，近的来发现循环中存在骨髓来源的血管内皮祖细胞，并与出生后血管发生密切相关，具有重要的生理、病理意义。这不仅拓展了干细胞的研究，也为缺血性疾病和肿瘤的治疗提供了新策略。本文简述了血管内皮祖细胞的来源、细胞表面标志、生物学特性、生理病理意义及其临床应用前景。     

体外诱导小鼠胚胎干细胞血管形成

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化的条件,模拟体内血管生成和血管新生过程,为研究新血管的形成提供一种新思路。方法体外培养小鼠胚胎干细胞诱导形成胚胎小体,将11 d的胚胎小体种植到胶原中诱发出芽性血管新生;通过免疫组织化学染色方法检测胚胎小体及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化。结果胚胎干细胞在体外能自发形成胚胎小体,其内部含有血管样结构,并伴有平滑肌的分化;种植到胶原中的胚胎小体能再现出芽性血管新生。结论胚胎干细胞存体外不但能定向分化成内皮细胞,还能再现体内血管生成、血管新生及动脉生成过程。     

血小板相关抗体检测在血液病中应用的评价

特发性血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)为一种自身免疫性血小板减少症 ,是由于自身免疫功能异常导致患者血小板产生自身抗体 ,即所谓血小板相关抗体(ＰＡＩｇ) ,使血小板在网状内皮系统被大量吞噬 ,从而导致血小板减少［１］。所以ＰＡＩｇ 的检测对ＩＴＰ的诊断有一定的辅助作用。本文报告４１４例血液病患者ＰＡＩｇ 检测的结果 ,并结合文献对ＰＡ１ｇ 的检测方法进行讨论。１资料与方法１．１标本来源血液病组均为按《血液病诊断及疗效标准》［２］确诊的本院住院患者 ,其中ＩＴＰ２５０例 ,再障 (ＡＡ)１３２例 ,自免溶贫 (ＡＩＨＡ)１２例 ,…     

原发性浆细胞白血病(附11例报告)

目的　探讨原发性浆细胞白血病（ＰＰＣＬ）的临床特点。方法　对１１ 例ＰＰＣＬ进行回顾性分析。结果　７ 例接受治疗，除２ 例仍存活外（１例存活已达１ ａ 现仍在观察中，另１例为新近诊断）其余均已死亡（１例存活５ａ，其余均于１ ａ内死亡）。结论　ＰＰＣＬ与急性白血病类似。