肝豆汤联合青霉胺对Wilson病模型肝脏铜死亡抑制作用

目的 观察肝豆汤联合青霉胺对Wilson病（WD）模型肝脏铜死亡的抑制作用。方法 以淡化致死基因（DL）小鼠为正常组,将毒牛奶（TX）小鼠随机分为模型组、肝豆汤组、青霉胺组和肝豆汤联合青霉胺组,每组8只。正常组及模型组予以0.9%氯化钠溶液0.2 mL/（10 g·d）,肝豆汤组、青霉胺组和肝豆汤联合青霉胺组分别予以肝豆汤浓缩液0.2 mL/（10 g·d）,青霉胺0.1 g/（kg·d）,肝豆汤浓缩液 0.2 mL/（10 g·d）联合青霉胺0.1 g/（kg·d）,连续灌胃30天。采用生化法、电感耦合等离子体-质谱法（ICP-MS）、HE染色、透射电镜、实时荧光定量PCR、Western Blot法和免疫组织化学法检测各组小鼠血清学指标和肝脏铜含量、病理改变、线粒体超微结构、铜死亡相关基因和蛋白以及硫辛酸（LA）的表达水平。结果 与正常组比较,模型组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和肝组织铜含量升高（P＜0.05）,肝脏局部碎片状坏死,炎性细胞数升高（P＜0.01）,线粒体损伤显著,铜死亡相关基因mRNA,铁硫簇蛋白、硫辛酰化蛋白、LA表达水平下降（P＜0.05）,二氢硫辛酸转乙酰基酶（DLAT）二聚体和热休克蛋白70（HSP70）表达水平升高（P＜0.01）。与模型组比较,各治疗组血清ALT、AST水平,LDH、SOD活性及肝组织铜含量下降（P＜0.05）,肝脏病理损伤减轻,炎性细胞数降低（P＜0.01）,线粒体结构恢复,铜死亡相关基因mRNA、铁硫簇蛋白、lipDLAT、 lipDBT、 lipDLST、LA表达水平升高（P＜0.05）,DLAT二聚体下降（P＜0.05）。与青霉胺组比较,肝豆汤联合青霉胺组 ALT、 AST 水平下降（P＜0.05）,肝组织铜含量降低（P＜0.01）,PDHB mRNA 表达、铁硫簇蛋白、硫辛酰化蛋白表达升高（P＜0.01,P＜0.05）,DLAT二聚体、HSP70 表达下降（P＜0.01）。结论 肝豆汤联合青霉胺可促进铜排出并上调LA途径相关蛋白的表达,减轻WD模型肝脏铜死亡。肝豆汤对青霉胺治疗WD具有辅助增效作用。     

Drug repositioning of disulfiram induces endometrioid epithelial ovarian cancer cell death via the both apoptosis and cuproptosis pathways

Various therapeutic strategies have been developed to overcome ovarian cancer. However, the prognoses resulting from these strategies are still unclear. In the present work, we screened 54 small molecule compounds approved by the FDA to identify novel agents that could inhibit the viability of human epithelial ovarian cancer cells. Among these, we identified disulfiram (DSF), an old alcohol-abuse drug, as a potential inducer of cell death in ovarian cancer. Mechanistically, DSF treatment significantly reduced the expression of the anti-apoptosis marker B-cell lymphoma/leukemia-2 (Bcl-2) and increase the expression of the apoptotic molecules Bcl2 associated X (Bax) and cleaved caspase-3 to promote human epithelial ovarian cancer cell apoptosis. Furthermore, DSF is a newly identified effective copper ionophore, thus the combination of DSF and copper was used to reduce ovarian cancer viability than DSF single treatment. Combination treatment with DSF and copper also led to the reduced expression of ferredoxin 1 and loss of Fe-S cluster proteins (biomarkers of cuproptosis). In vivo, DSF and copper gluconate significantly decreased the tumor volume and increased the survival rate in a murine ovarian cancer xenograft model. Thus, the role of DSF revealed its potential for used as a viable therapeutic agent for the ovarian cancer.     

铜吸收转运蛋白介导放射性肠损伤的作用及机制研究

目的 探讨铜吸收转运蛋白（CTR1）在辐射诱导的小肠细胞放射损伤中发挥的作用及机制。方法 采用人小肠上皮细胞（HIEC）和大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）,分别经2、4、6、8 Gy和5、10、15、20 Gy X射线照射,构建放射损伤细胞模型。照后2、4、8、24、48 h收集细胞,通过Western blot检测CTR1蛋白对辐射的时间-剂量响应。将CTR1 shRNA转染入HIEC和IEC-6细胞后进行X射线照射,采用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）检测细胞内铜水平。通过克隆形成实验确定CTR1对上述细胞辐射敏感性作用,检测活性氧（ROS）水平和DNA损伤来进一步探讨相关机制。Western blot检测X射线照射以及沉默CTR1对抗氧化蛋白Nrf2、HO-1,铜死亡相关蛋白DLAT、LIAS和FDX1表达的影响,初步确定CTR1的调控机制。结果 Western blot表明两株细胞经不同剂量的X射线照射后CTR1表达均显著上调,并且呈显著的时间剂量响应关系（t=3.53、3.45、6.37、11.11、11.13,P<0.05）。沉默CTR1后的两株细胞放射敏感性均低于对照,增敏比分别为1.146、1.201。沉默CTR1缓解了辐射诱导IEC-6细胞内的铜蓄积（t=3.10,P<0.05）。两株细胞照射沉默组ROS产量显著低于照射对照组（t=5.23、2.96,P<0.05）;并且照射沉默组γ-H2AX蛋白表达较照射对照组有所减少（t=7.50、4.29,P<0.05）。此外,X射线诱导Nrf2、HO-1蛋白表达上调;沉默CTR1后Nrf2和HO-1的表达会进一步增加。电离辐射导致铜死亡标志物DLAT以及铁硫簇蛋白LIAS、FDX1丢失,而沉默CTR1能促进上述蛋白表达水平恢复正常。结论 CTR1沉默后的小肠细胞HIEC和IEC-6辐射抗性增强,涉及的机制可能与氧化应激和铜死亡途径有关。     

肾癌中调节性细胞死亡的新动向和未来展望

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一。近年来,我国肾癌的发病率呈逐年上升的趋势,严重威胁着人们的健康。调节性细胞死亡是由一种细胞主动有序的死亡方式,普遍存在于生命活动过程中,在维系生命活动的平衡中发挥着至关重要的作用。近期Science杂志上报道了一种新的调节性细胞死亡方式即铜死亡,进一步强化了生命体中细胞死亡的重要性。随着对调节性细胞死亡认识的不断深入,越来越多的研究显示不同的调节性细胞死亡（如铁死亡、焦亡、自噬等）均与肾癌的发生、发展密切相关。如诱导细胞铁死亡将显著抑制肾癌的侵袭和转移、并与肾癌患者的更好预后密切相关;细胞焦亡不仅可以诱导肾癌细胞死亡还可以激活抗肾癌的免疫应答;自噬在肾癌中具有“双向”作用,增强自噬可抑制肾癌细胞生长,但也可能减弱联合用药治疗的效果;抑制细胞凋亡和坏死性凋亡可以显著促进肾癌细胞的增殖、侵袭等。本文将综述铁死亡、细胞焦亡、自噬、细胞凋亡和坏死性凋亡的分子机制和在肾癌发生、发展中作用的研究进展并进行展望,为探索肾癌的发病机制和潜在的治疗靶点提供新的视角。     

铜死亡相关基因在肝细胞癌中的表达及其临床意义

背景与目的：肝细胞癌（HCC）是一种全球常见的恶性肿瘤，具有高复发率和高病死率。铜死亡是一种新型的程序性细胞死亡，涉及肿瘤细胞的增殖和生长、血管生成和转移。因此，本研究探讨铜死亡相关基因（CRGs）在HCC中的表达与预后的关系，并建立预后相关的列线图模型以及分析CRGs与HCC免疫细胞浸润的关系。方法：使用R语言“limma”包对TCGA数据库下载的HCC组织与正常组织的数据中CRGs进行差异表达分析；“clusterProfiler”包进行GO和KEGG分析；单因素Cox回归分析筛选与预后相关的CRGs,LassoCox回归分析构建HCC中CRGs相关预后评分模型；“ggsurvplot”包以总生存（OS）为结局绘制Kaplan-Meier生存曲线；“survival ROC”包绘制ROC曲线评估预后评分的准确性；“regplot”和“rms”包绘制列线图和校准曲线；利用TIMER数据库分析CRGs的表达与6种免疫细胞丰度之间的关系。结果：与正常组织相比，HCC组织19个CRGs中的16个有差异表达（上调：PDHB、PDHA1、MTF1、LIPT1、LIPT2、LIAS、GLS、DL...     

胶质母细胞瘤铜死亡相关lncRNA预后模型的构建

目的 采用生物信息学方法分析胶质母细胞瘤差异表达的铜死亡相关长链非编码RNA(lncRNA)并构建预后模型。方法 计算机检索TCGA数据库下载胶质母细胞瘤的RNA-seq数据及其临床信息,应用单因素Cox分析和LASSO回归筛选铜死亡相关lncRNA,并计算风险评分=基因系数×基因表达量,以风险评分中位数分为低风险组和高风险组;将胶质母细胞瘤样本随机分为测试组和训练组,再进行整合生物信息学分析。结果 共下载胶质母细胞瘤样本169例,对照样本5例,共表达分析发现791个铜死亡相关lncRNA,其中正相关lncRNA有753个,负相关lncRNA有38个。单因素Cox分析发现22个显著差异表达的lncRNA(P<0.05),LASSO回归分析筛选9个差异表达的lncRNA;多因素Cox回归分析显示风险评分增高是胶质母细胞瘤预后不良的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,无论是训练组,还是测试组,高风险组总体生存期和无进展生存期显著缩短（P<0.05）。ROC曲线分析显示模型对1、2、3年生存期具有良好的预测价值（P<0.05）,而且风险评分预测效能显著优于...     

肝癌铜死亡相关基因及其与预后、免疫浸润的关系分析

背景与目的 肝癌是消化道恶性肿瘤之一,发病率高、病死率高。铜死亡是一种铜依赖、新型的细胞死亡方式,继发于铜过载诱发的线粒体功能受损。铜死亡在多种肿瘤中扮演重要作用,但其与肝癌的关系尚不清楚。因此,本研究探讨铜死亡相关基因在肝癌中的表达特征,以及与肝癌预后及免疫浸润的关系。方法 从TCGA和GTEx数据库下载肝癌和正常肝脏组织转录组数据进行差异表达和突变分析。采用R语言“clusterProfiler”包进行GO和KEGG富集分析。采用LASSO、单因素和多因素回归分析筛选影响肝癌患者预后的基因并构建风险因子图。使用R包“rms”构建列线图。使用UALCAN数据库分析铜死亡相关基因与肝癌临床病理特征的关系并验证。使用Spearman相关性分析铜死亡相关基因与免疫细胞浸润和免疫检查点的相关性。采用TIMER2.0数据库分析铜死亡相关基因表达与肿瘤相关成纤维细胞（CAF）浸润的相关性,采用TISDB数据库分析CDKN2A和DLAT表达与髓源抑制性细胞（MDSC）浸润丰度的相关性。结果 与正常肝脏组织比较,9个铜死亡相关基因在肝癌中表达显著升高,CDKN2A突变频率最高。铜死亡相关基因主要参与蛋白质脂酰化、三羧酸循环、柠檬酸循环等生物过程。基于LASSO、单因素与多因素回归分析筛选出影响肝癌患者总体生存率（OS）的基因CDKN2A和DLAT,并以此构建风险因子图,时间依赖性受试者工作特征曲线显示其具有较好的预测能力。通过单因素和多因素回归分析筛选出CDKN2A、DLAT、T分期和肿瘤状态是影响肝癌患者OS的独立预后因素,基于上述因素构建了列线图,校正曲线显示该列线图预测和实际观察之间有很好的一致性。UALCAN数据库分析发现CDKN2A、DLAT与肝癌临床分期、肿瘤分级有关,且GEO数据库、HPA数据库及肝癌细胞中的验证结果与之一致。相关性分析显示,CDKN2A和DLAT表达与免疫细胞浸润和免疫检查点表达相关;TIMER2.0数据库分析显示,DLAT表达与CAF浸润明显正相关;TISDB数据库分析显示,CDKN2A和DLAT表达与MDSC浸润丰度无相关性。结论 铜死亡相关基因CDKN2A、DLAT可能是肝癌新的预后生物标志物和免疫治疗的新靶点。