青藤碱通过COX-2/VEGF通路抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的研究

摘要：目的:探讨青藤碱对胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:将胃癌MGC803细胞随机分成4组:对照组、青藤碱300,600,1 200 mg·L-1组,采用划痕愈合实验检测细胞迁移率,Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,qRTPCR检测环氧合酶2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶2（MMP2） mRNA表达,Western blot检测COX-2、VEGF、MMP9、MMP2蛋白表达。结果:青藤碱300,600,1 200mg·L-1组胃癌MGC803细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数、COX-2、VEGF、MMP9、MMP2 mRNA和蛋白表达显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）。结论:青藤碱抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭,其机制与下调COX-2、VEGF、MMP9、MMP2表达有关。     

青藤碱抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭及其与NF-κB信号通路的关系

背景与目的:胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤,早期转移是导致胰腺癌患者死亡的主要原因.青藤碱是从青风藤及毛青藤的干燥藤茎中提取的一种生物碱,具有镇痛、抗炎、免疫抑制等药理作用.研究发现NF-κB信号通路与胰腺癌转移密切相关,而青藤碱可以抑制NF-κB信号通路激活.因此,本研究探讨青藤碱对胰腺癌细胞迁移和侵袭抑制作...     

青藤碱抗肿瘤作用研究进展

青藤碱（Sinomenine,SIN）是从中药青风藤分离出的一种生物碱单体,分子式为C19H23NO4,结构类似于吗啡,具有镇痛镇静、镇咳局麻、降血压、抗炎等作用,为植物中很强的组织胺释放剂。青藤碱除具有镇静抗炎作用外,对肿瘤细胞增殖也有较强的抑制作用,能够抑制多种恶性肿瘤细胞的生长[1]。现将青藤碱抗肿瘤作用研究进展作一综述。1青藤碱抗宫颈癌作用1.1青藤碱抑制宫颈癌细胞增殖张瑜等[2]探讨了青藤碱对宫颈癌Hela细胞的抑制作用。结果表明0.12.5 mmol·L-1青藤碱均能抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并呈时间、剂量依赖性;青藤碱作用后,     

肝癌铜死亡相关基因及其与预后、免疫浸润的关系分析

背景与目的 肝癌是消化道恶性肿瘤之一，发病率高、病死率高。铜死亡是一种铜依赖、新型的细胞死亡方式，继发于铜过载诱发的线粒体功能受损。铜死亡在多种肿瘤中扮演重要作用，但其与肝癌的关系尚不清楚。因此，本研究探讨铜死亡相关基因在肝癌中的表达特征，以及与肝癌预后及免疫浸润的关系。方法 从TCGA和GTEx数据库下载肝癌和正常肝脏组织转录组数据进行差异表达和突变分析。采用R语言“clusterProfiler”包进行GO和KEGG富集分析。采用LASSO、单因素和多因素回归分析筛选影响肝癌患者预后的基因并构建风险因子图。使用R包“rms”构建列线图。使用UALCAN数据库分析铜死亡相关基因与肝癌临床病理特征的关系并验证。使用Spearman相关性分析铜死亡相关基因与免疫细胞浸润和免疫检查点的相关性。采用TIMER2.0数据库分析铜死亡相关基因表达与肿瘤相关成纤维细胞（CAF）浸润的相关性，采用TISDB数据库分析CDKN2A和DLAT表达与髓源抑制性细胞（MDSC）浸润丰度的相关性。结果 与正常肝脏组织比较，9个铜死亡相关基因在肝癌中表达显著升高，CDKN2A突变频率最高。铜死亡相关基因主要参与蛋白质脂酰化、三羧酸循环、柠檬酸循环等生物过程。基于LASSO、单因素与多因素回归分析筛选出影响肝癌患者总体生存率（OS）的基因CDKN2A和DLAT，并以此构建风险因子图，时间依赖性受试者工作特征曲线显示其具有较好的预测能力。通过单因素和多因素回归分析筛选出CDKN2A、DLAT、T分期和肿瘤状态是影响肝癌患者OS的独立预后因素，基于上述因素构建了列线图，校正曲线显示该列线图预测和实际观察之间有很好的一致性。UALCAN数据库分析发现CDKN2A、DLAT与肝癌临床分期、肿瘤分级有关，且GEO数据库、HPA数据库及肝癌细胞中的验证结果与之一致。相关性分析显示，CDKN2A和DLAT表达与免疫细胞浸润和免疫检查点表达相关；TIMER2.0数据库分析显示，DLAT表达与CAF浸润明显正相关；TISDB数据库分析显示，CDKN2A和DLAT表达与MDSC浸润丰度无相关性。结论 铜死亡相关基因CDKN2A、DLAT可能是肝癌新的预后生物标志物和免疫治疗的新靶点。     

基于生物信息学的肝内胆管癌差异表达基因谱中关键基因的筛选及分析

背景与目的 肝内胆管癌（ICC）是指来源于肝内胆管上皮的一种恶性肿瘤,其发病隐匿,恶性程度高。ICC早期无明显临床表现,大多数患者确诊时往往已失去手术机会,因此预后极差。寻找ICC的早期诊断和治疗靶标具有重要意义,因此,本研究通过生物信息学方法对影响ICC发生发展的关键基因进行筛选。方法 从GEO数据库下载2个ICC转录组数据集（GSE107943、GSE119336）。用R语言的edgeR包筛选出差异表达基因,然后对这些差异表达基因进行GO和KEGG通路富集分析。通过STRING数据库建立差异表达基因的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,使用Cytoscape中的MCODE插件发掘出关键调控基因。分析关键调控基因在肿瘤组织中的表达,采用UALCAN、GEPIA数据库进行验证。通过UCSC XENA数据库分析关键调控基因在泛癌中的表达。利用TCGA数据库分析关键调控基因共表达基因。采用UALCAN、GEPIA数据库分析关键调控基因与患者预后、肿瘤分级、分期、淋巴转移的关系。使用R语言GSVA包计算关键调控基因表达与免疫浸润相关性。绘制ROC曲线评价关键调控基因对ICC的预测能力。采用细胞实验验证关键调控基因的表达。结果 共筛选出1 094个共同差异表达基因,其中共同上调的基因为567个,共同下调的基因为527个,主要参与小分子分解代谢、有机酸生物合成、碳代谢等过程。通过PPI网络挖掘出3个关键调控基因Polo样激酶1（PLK1）、羟基酸氧化酶2（HAO2）、纤维胶凝蛋白（FCN2）,其中PLK1基因在肿瘤组织中明显上调,HAO2和FCN2基因在肿瘤组织明显下调,通过UALCAN、GEPIA数据库验证发现3个基因表达与分析结果一致。通过UCSC XENA数据库分析发现PLK1在28种肿瘤中表达显著增高,HAO2在24种肿瘤表达显著降低,FCN2在27种肿瘤表达显著降低。TCGA数据库分析发现PLK1与CCNA2、GTSE1等基因共表达,HAO2与MTTP、CPS1等基因共表达,FCN2与FAM99A、GDF2等基因共表达。UALCAN数据库分析发现3个基因表达与肿瘤的分期和分级、淋巴转移有关,其中PLK1高表达、HAO2、FCN2低表达提示肿瘤分期更高、分化更差、更易出现淋巴转移。相关性分析发现PLK1表达与Th2 cells浸润呈显著正相关,FCN2表达与aDC浸润呈显著负相关。绘制ROC曲线显示这3个基因都可以很好地诊断ICC,其中HAO2的诊断能力最好。细胞实验结果发现PLK1在RBE中表达明显升高,HAO2、FCN2在RBE中表达明显降低（均P<0.01）。结论 PLK1、HAO2、FCN2可能是影响ICC发生发展的关键调控基因,这3个基因可能成为ICC诊治的新靶点。     

青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的上皮间质转化抑制胰腺癌AsPC-1细胞侵袭和转移

目的 探讨青藤碱对胰腺癌AsPC-1细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）、侵袭和转移的影响及机制。方法 采用不同浓度青藤碱作用胰腺癌AsPC-1细胞后，划痕愈合试验检测细胞愈合能力，Transwell试验检测迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果 青藤碱降低AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数。青藤碱上调E-cadherin蛋白表达、下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达。青藤碱降低p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值。胰岛素生长因子-1逆转青藤碱对E-cadherin蛋白表达的上调和对N-cadherin、Vimentin蛋白表达的下调作用。TGF-β逆转青藤碱对AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数的降低作用。结论 青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的EMT，抑制AsPC-1细胞侵袭和转移。     

青藤碱通过调控NF-kB信号通路抑制胰腺癌Capan-1细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 探讨青藤碱(Sinomenine, SIN)对胰腺癌Capan-1细胞增殖及凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞活力,光学显微镜下观察细胞凋亡形态,DAPI/TUNEL双染检测细胞凋亡,流式细胞术Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,Western blot检测裂解型Caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)、细胞核内NF-κB(Nuclear factor-kappa-binding)蛋白表达。结果 CCK8结果表明青藤碱抑制胰腺癌Capan-1细胞增殖,并具有时间浓度依赖性;光学显微镜观察结果表明,在青藤碱作用下,Capan-1细胞皱缩、变圆、脱落增多;DAPI/TUNEL染色结果表明,在青藤碱作用下,Capan-1细胞凋亡增多;流式细胞术Annexin V-FITC/PI结果表明,在青藤碱作用下,Capan-1细胞凋亡率增高;Western blot结果表明,在青藤碱作用下,Capan-1细胞cleaved caspase-3、核内NF-κB表达降低,NF-κB信号通路激活剂TNF-α逆转青藤碱对Capan-1细胞增殖的抑制作用、凋亡率的升高作用和cleaved caspase-3表达的下调作用。结论 青藤碱通过调控NF-κB信号通路抑制胰腺癌Capan-1细胞增殖并诱导细胞凋亡。