兔抗MAGE-n血清的制备、纯化及鉴定

目的: 制备高效价、特异性的兔抗人MAGE-n血清。方法: 对原核表达的MAGE-n蛋白进行纯化, 与弗氏佐剂混合免疫新西兰兔制备抗血清, 用硫酸铵盐析法及溴化氰活化的Sephrose4B(CNBr-ActivatedSephrose4B)亲和层析柱纯化抗血清, 以双向免疫扩散实验、ELISA、Westernblot和免疫组化对兔抗人MAGE-n血清进行鉴定。结果: 经免疫得到高效价的兔抗人MAGE-n血清, 抗血清能够与MAGE-n特异性结合, 免疫组化结果表明MAGE-n是一种胞质蛋白。结论: 用MAGE-n蛋白与弗氏佐剂混合免疫兔, 制备得到高效价的抗血清, 纯化后的特异性兔抗人MAGE-n血清, 为进一步研究MAGE-n在各种组织中的表达奠定了基础。     

VEGF真核表达载体的构建及在内皮与心肌细胞内的表达

目的：探讨外源性人VEGF165基因在内皮细胞与心肌细胞内表达的可行性。方法：构建了(vaseular endothelium growth factor,VEGF)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因其表达载体pIRES2—FGFP—VEGF165，以脂质体法转染内皮细胞和心肌细胞，采用荧光显做镜检测内皮细胞与心肌细胞中EGFP的表达，同时利用免疫组织化学方法检测VEGF的表达。结果：成功地构建了真核表达载体pIRES2—EGFP—hVEGF165，采用脂质体法转染内皮细胞与心肌细胞后，经荧光显微镜观察，可见细胞内有EGFP的表达，同时经免疫组化证实有VEGF的表达。结论：采用脂质体法可以成功地将外源性VEGF165基因转染到内皮细胞与心肌细胞中，并进行表达。本研究为今后利用VEGF基因治疗心肌缺血等疾病提供了实验基础。     

热休克蛋白70对星形细胞瘤凋亡调控的研究

目的 :研究热休克蛋白 70 (HSP70 )在星形细胞瘤 (astrocytoma)中的表达与意义。方法 :采用鼠抗人 HSP70单克隆抗体及免疫组织化学 SABC法。结果 :在 99例星形细胞瘤中 ,HSP70表达 70例 (70 .7% ) ;用于对照的正常脑组织中 ,HSP70阳性仅 1例 (10 % )。HSP70在星形细胞瘤中的表达强于正常对照组 (P<0 .0 5) ,HSP70在 级和 级、 级和 级、 级和 级星形细胞瘤相互之间表达无显著性差异 (P>0 .0 5) ,但在 50例低度恶性星形细胞瘤 (WHO 级～ 级 )中表达强于在49例高度恶性星形细胞瘤 (WHO 级～ 级 )中的表达 (P<0 .0 5)。结论 :HSP70在大部分星形细胞瘤中有不同程度表达 ,HSP70可能参与星形细胞瘤的凋亡调变 ;其表达与星形细胞瘤分化有关     

V806M突变型Axin基因真核表达载体的构建及其在神经胶质细胞瘤内的表达

目的构建V806M突变型Axin基因真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并稳定表达于大鼠神经胶质瘤细胞系C6。方法用分子克隆技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),经NheⅠ和SmaⅠ双酶切鉴定后,用脂质体法稳定转染神经胶质瘤细胞C6。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),稳定转染后,经荧光显微镜和免疫细胞化学染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究此种突变体Axin是否影响细胞的生物学行为以及是否参与胶质瘤的发生发展奠定了实验基础。     

乙醇对小鼠原代肝细胞脂肪酸氧化速度的影响

目的建立小鼠肝细胞的体外培养方法，同时检测乙醇对肝细胞脂肪酸β-氧化速度的影响。方法采用戊巴比妥麻醉小鼠，通过肝脏灌注和胶原酶消化分离小鼠肝细胞，接种于胶原包被的培养皿中进行体外培养。通过HE染色观察细胞的生长状态。在20mmol／L乙醇存在的情况下，通过^3H标记的棕榈酸（C16：0）检测肝细胞的脂肪酸氧化速度。结果成功地分离了肝细胞，肝细胞的存活率≥95％。肝细胞在体外培养48h仍能够保持良好的生长状态。对肝细胞脂肪酸氧化速度的研究发现，20mmol／L酒精能够导致肝细胞的脂肪酸氧化速度降低40％左右，导致肝细胞中脂肪含量增加。结论本研究成功地建立肝细胞的体外培养方法，采用^3H标记的脂肪酸能够敏感地检测脂肪酸氧化速度，而研究发现乙醇能够抑制肝细胞脂肪酸氧化速度。同时，本研究结果为肝细胞的脂肪和糖类代谢的研究提供了实验条件。     

促凋亡基因bak及其在星形细胞瘤中的表达关系研究

目的 研究促凋亡基因bak及其在星形细胞瘤(Astrocytoma)中的表达与意义，探讨二者之间的关系及对患者临床康复意义。方法 采用兔抗人Bak、Bax多克隆抗体及免疫组织化学SABC法。结果 在99例星形细胞瘤中Bax阳性反应62例(62．6％)，Bax阳性反应60例(60．6％)，在10例用于对照的正常脑组织中。Bak阳性仅1例(10％)，Bax阳性2例(20％)。Bak、Bax在星形胶质细胞瘤中的表达均强于正常对照组(P&;lt;0．01，x^2=6．80);二者在Ⅰ和Ⅱ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ级星形胶质细胞瘤相互间表达无显著差异(P&;gt;0．05，x^2=3．49)；但在50例低度恶性星形细胞瘤(WHOⅠ～Ⅱ级)中明显均强于49例高度恶性星形细胞瘤(WHOⅢ～Ⅳ级)中的表达(P&;lt;0．01，x^2=7．71)。结论 促凋亡基因促凋亡基因Bak及其Bax在大部分星形细胞瘤中有不同程度表达，Bak、Bax可能协同参与星形细胞瘤的凋亡调变，二者的表达与星形细胞瘤分化有关，其研究有利于采取有效的治疗措施为改善患者生活质量和减少功能损害提供依据。     

热休克蛋白70在食道鳞状细胞癌中表达及其可能对凋亡的调控

目的 研究热休克蛋白70（HSP70）在食道鳞状细胞癌中的表达与意义。方法 采用鼠抗人HSP70单克隆抗体及免疫组织化学SABC法。结果 在60例食道鳞状细胞癌中，HSP70表达46例（76．7％）。HSP70在食道鳞状细胞癌I级中表达强于在食道鳞状细胞癌Ⅲ级中的表达（P＜0．05）。结论 HSP70在大部分食道鳞状细胞癌中有不同程度表达，HSP70可能参与食道鳞状细胞癌的凋亡调变；其表达与食道鳞状细胞癌分化有关。     

磁敏感加权成像在帕金森病及血管性帕金森综合征诊断、鉴别诊断中的临床研究

目的探讨磁敏感加权成像(SWI)在帕金森病(PD)及血管性帕金森综合征(VP)诊断、鉴别诊断中的临床应用价值。方法收集我院2013年6月-2015年3月间收治的30例帕金森病患者(PD组)及25例血管性帕金森病患者(VP组),同时将同期收集25例健康老年人(NC组)纳入对照组。三组患者均行磁敏感加权成像检查,比较三组患者黑质致密带(SNc)、黑质网状带(SNr)、红核(RN)、苍白球(GP)、壳核(PUT)和尾状核(CN)中的相位值。结果 PD组中黑质致密带(SNc)、苍白球(GP)、壳核(PUT)的相位值明显低于VP组(P<0.05),两组黑质网状带(SNr)、红核(RN)和尾状核(CN)的相位值比较无明显差别(P>0.05),VP组中各核团相位值与NC组相比无明显差别(P>0.05)。结论运用磁敏感加权成像测定PD及VP患者黑质致密带、苍白球、壳核中的相位值对二者诊断、鉴别诊断起到一些参考价值。     

病理学实习考核形式的改革与体会

鉴于病理学实习考核的特点,对多媒体考核方式进行了有益的尝试。通过制作多媒体考试题库和课件,经过实践,具有省时、省力、保护标本、保证考试公平、准确等许多优点,多媒体考核的方式可以代替传统考核方式。