抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选

目的: 获得前列腺癌的噬菌体呈现型单链抗体库,筛选与前列腺癌特异结合的抗体,为前列腺癌的诊断和治疗奠定基础. 方法: 用两种恶性程度较高的前列腺癌细胞PC3,DU145膜蛋白混合物免疫Balb/c小鼠.取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL), 经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TG1.用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体.以恶性程度低的前列腺癌细胞LNCap为对照,用PC3细胞对重组噬菌体抗体库进行五轮筛选后,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合PC3细胞的ScFv.结果: 用所构建的库容量为3.5×106的单链抗体库筛选特异结合抗体,得到一个与PC3细胞特异结合的噬菌体-单链抗体.结论: 本研究所构建的抗体库中可筛选到与前列腺癌细胞结合特异性较好的抗体,可用于前列腺癌的诊断和治疗中.     

重组人干扰素α1b注射剂评价性抽验结果与质量分析

目的 评价重组人干扰素α1b注射剂的质量现状及存在问题。方法 抽取2个企业生产的31批注射用重组人干扰素α1b和11批重组人干扰素α1b注射液,按照《中国药典》2010年版三部标准进行检验,统计分析生物学活性、渗透压摩尔浓度、水分、pH值等检验结果,对国产重组人干扰素α1b注射剂的质量现状进行评价。结果 42批样品检验全部合格,各生产企业生产工艺比较稳定。结论 该品种总体质量状况良好,现行质量标准能够保证产品的安全有效,渗透压摩尔浓度项目的标准规定应进一步完善。     

首批1型单纯疱疹病毒溶瘤活性测定国家候选标准品的研制

目的:研制首批1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)溶瘤活性测定国家标准品。方法:按2020年版《中华人民共和国药典》三部相关要求,分别进行HSV-1溶瘤活性测定液体标准品和冻干标准品的制备和质量检测,并使用热加速试验进行稳定性考察,以U-2 OS细胞/CCK-8法分别在3家实验室对标准品的溶瘤活性进行协作标定。对比研究液体标准品和冻干标准品,选择其中更为适用的1种作为国家标准品。结果:制备的2种HSV-1溶瘤活性测定标准品的质量检测结果均符合要求,其中冻干标准品水分含量为1.09%,分装精度为0.15%。稳定性试验结果用阿伦尼乌斯公式计算,初步预测液体标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需7.7年;冻干标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需6.1×10⁵年,其稳定性得到很大提高。3个实验室协作标定进行了共21次测定,液体标准品的溶瘤活性值几何均数为7.08×10⁴ U·mL^-1,冻干标准品的溶瘤活性值几何均数为1.82×10⁴ U·支^-1...     

肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性

目的：检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性，探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性。方法：将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白（EGFP）基因及带有硫氧还原蛋白（Trx）基因的原核表达载体pET-28a（＋）／EGFP及pTIG—Trx中，在大肠杆菌中进行表达，并经镍柱（Ni—NTA）纯化。建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白，通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号，考察该单链抗体的靶向性；同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白，观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性。结果：在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段，并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达，经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带。靶向性实验结果显示，单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集，而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少，并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号。抑瘤性实验发现，单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似。结论：从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性，而对肿瘤生长的抑制作用不明显，为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。     

重组腺相关病毒(rAAV)基因治疗制品质控检验技术重点考量

近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。     

放射诱导基因Gadd 45在健康人群中表达水平的 检测及其意义

目的 考察Gadd 45基因在健康人群个体间表达的差异,评估Gadd 45发展成为一种新的辐射生物剂量计的可行性。方法 采集20例健康献血员血液样本,提取白细胞RNA进行反转录,以β-actin作为内对照基因,建立实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并以此方法探讨人群中Gadd 45基因表达水平的差异。结果 20例受试者血液标本中的Gadd 45表达水平之间存在较大差异,且其表达水平与性别无关。结论 放射诱导基因Gadd 45的表达可能不适合做生物剂量计。     

基因治疗制品质量控制通用技术要求考虑要点

本文旨在为基因治疗产品研发者开展制品研发和生产等活动提供必要质量控制原则，适用于以病毒为载体的基因治疗制品，也适用于溶瘤病毒类制品。本文通过借鉴类似制品成熟的、有效的、实用性被证明的策略和方法阐述基因治疗制品质量控制生物通用技术要求，希望对整个行业的发展提供帮助。基因治疗制品制造和质量控制应依照风险评估、全过程控制和全生命周期管理理念，以保障制品质量为最终目的，并通过对各个制造环节的控制实现制品的低安全风险的稳定生产。     

抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选

目的:研究复方中药VI-28胶囊(即卫康胶囊,主要成分有人参、鹿茸、菟丝子)辅助环磷酰胺体内抑制肿瘤生长的作用及其机制。方法:C57BL/6纯系小鼠背部皮下接种Lewis肺癌细胞(LCC,每只106个细胞),同时按40mg/kg隔天腹腔注射环磷酰胺治疗。实验组灌胃VI-28(2%悬液,每只0.5ml,隔天给药)。第28天时取小鼠胸腺和肿瘤组织块,计算肿瘤指数和胸腺指数。取脾细胞测定细胞免疫功能。组织切片观察所形成实体瘤的病理学特征。结果:小鼠接种LLC细胞14d后在接种部位开始形成实体瘤,瘤块直径增加为1—1.8cm。与单纯化疗荷瘤组小鼠相比,VI-28辅助治疗组的胸腺较大,脾细胞对ConA反应性较强,形成实体瘤的瘤块较小且分化程度较高。结论:VI-28胶囊可有效地促进化疗小鼠免疫功能的恢复,帮助化疗药物抑制肿瘤生长,是一种有效的化疗辅助药。     

以某三级医院为例探讨推动科研发展的人才梯队建设

目的：以某三级医院为例,力求探讨推动医院科研发展的人才梯队建设。方法：通过对该三级医院在科研人才梯队建设中实施的各项举措进行充分地阐述和分析,包括“搭建平台”、“打造团队”、“因才施计”、“内培外引”等,以总结这些人才梯队建设举措取得的成果和成效。结果：该三级医院通过各项人才梯队建设举措的实施,人才培养得以扎实推进,科研课题立项有所突破,学科建设更上一层楼,科技成果也稳步提升,总体来看,医院科研实力和质量得到了有效的提升。结论：医院科研发展的关键在于人才梯队建设,合理的人才梯队建设能够不断扩展科研思路、夯实科研基础,提升医院内涵,保持和扩大医院科研优势,保障医院科研的可持续发展。     

人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应

目的:克隆人Egr-1基因的启动子, 插入荧光素酶报告基因载体中, 并检测电离辐射对其活性的影响.方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子, 将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞, 测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变.结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后, Egr-1的启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h, Egr-1的启动子活性达峰值.结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能, 为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础.