阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

荨麻鞣质的体内抗氧化活性研究

为了说明荨麻鞣质的体内抗氧化活性,给小鼠灌胃荨麻鞣质50mg/kg·d,100mg/kg·d及200mg/kg·d共7d,7天后测定小鼠体内超氧化歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,说明荨麻鞣质能够明显提高小鼠抗氧化系统功能,初步确定荨麻鞣质的抗氧化性。     

改善蛋白药代动力学的方法--蛋白聚乙二醇化的研究进展

蛋白作为治疗药物有很大的前途.然而,许多蛋白很容易被体内的蛋白酶水解,具有较快的肾脏清除率和体内代谢半衰期短的缺点;同时治疗蛋白是异源物质,易引起机体的免疫排斥反应,从而限制了治疗蛋白的使用范围.聚乙二醇化是聚乙二醇通过某种官能团与蛋白相连的过程,其结果是提高了蛋白的分子量、增强了抗蛋白酶水解的能力、降低了免疫原性和改善了药代动力学参数.本文综述了蛋白与聚乙二醇的连接方法、蛋白聚乙二醇化的分析方法和聚乙二醇化在临床治疗药物中的应用.     

哮喘片中麻黄的薄层色谱研究

目的：确定哮喘片薄层色谱鉴别的实验方法。方法：采用3种不同展开荆分别进行哮喘片中麻黄薄层色谱鉴别研究。结果：哮喘片色谱条件为：采用硅胶G色谱板,以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：8：1）为展开剂,茚三酮试液为显色荆,斑点清晰。结论：本实验精密度好且操作简便易行。     

感冒清热口服液中葛根素含量测定

目的：应用HPLC法测定感冒清热口服液中葛根素含量。方法：采用高效液相色谱法;色谱柱：ShimpackVP-ODS柱（150mm×4.6mm）;流动相：甲醇-水（24：76）流速：1.0ml/min;检测波长：250nm;进样量：20μl。结果：在进样量0.5μg～4μg范围内,葛根素峰面积与进样量呈良好的线性关系,其回归方程为：A=48895170.86C＋4178.18;r=0.999996,平均回收率为98.98%,RSD=0.55%。结论：本法快速简便,准确,重现性好。     

PHⅡ-7逆转肿瘤细胞K562/A02耐药机制的研究

目的阐明PHⅡ-7逆转肿瘤耐药的机制。方法用MTT法测定阿霉素、PHⅡ-7及二者联合用药对人白血病细胞系K562及其多药耐药细胞系K562/A02的IC50值,提取不同浓度PHⅡ-7作用48h后K562和K562/A02细胞RNA,以实时定量PCR的方法分析PHⅡ-7对MDR1基因表达水平的影响,最后通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察PHⅡ-7作用前后,K562和K562/A02细胞内阿霉素浓度的改变。结果 PHⅡ-7本身具有抗肿瘤活性,对K562和K562/A02IC50值分别为(1.37±0.37)μmol·L-1;(1.48±0.34)μmol·L-1。此外PHⅡ-7还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,K562组CDI值为0.22,K562/A02组CDI值为0.09,其对耐药细胞的协同作用更为明显。阿霉素和PHⅡ-7同时作用于K562/A02,随着PHⅡ-7作用剂量的增加,K562/A02细胞MDR1基因表达水平逐渐下降;细胞内阿霉素浓度伴随PHⅡ-7作用时间的延长而逐渐提高。结论 PHⅡ-7不仅本身是有效的肿瘤细胞化疗药物,还具有下调MDR1耐药基因表达的作用,从而有效逆转K562/A02细胞的耐药现象,增强化疗药物阿霉素的细胞杀伤作用。     

洋金花中多糖的含量测定

目的:采用热水提取乙醇沉淀法提取多糖,考查提取纯化条件,确定提取方法。对提取的多糖进行定性和解析。方法:以苯酚-硫酸法测定多糖含量,制备标准曲线并进行效能指标认证。结果:测定平均回收率为99.41%,RSD为1.97%。结论:实验建立的提取工艺简便可行,定量分析方法灵敏、准确。     

疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20 F(ab'''')2之比较

目的　比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法　采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80 %B液洗脱2 0min ,10 0 %B液洗脱30min ;凝胶过滤以5 0mmol LPB缓冲液(pH 7.0 ) ,0 .8mL min洗脱4h。结果　粗纯化产物主要含F(ab’) 2 、Fab’,含量分别为19.6 %、5 9.7%。采用疏水层析法1h即可完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 7% ,纯度为89.3% ;凝胶过滤4h完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 5 % ,纯度为90 .5 %。FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%。结论　疏水层析分离纯化抗CD2 0F(ab’) 2 简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产。     

NBS法标记抗CD20F(ab')2条件的研究

目的 :探讨NBS法标记抗CD2 0F(ab’) 2 的最优条件。方法 :其它条件固定时 ,依次改变反应时间、NBS用量、反应温度、反应体积 ,进行标记后将反应混合物经PD - 1 0柱淋洗 ,收集蛋白峰 ,测定放射性计数 ,计算标记率和免疫活性分数。结果 :反应时间在 2min之前 ,标记率随时间延长而提高 ,2min后出现平台 ,3min达最大值 ,活性在 3min之前变化不大 ,之后明显降低 ;NBS/F(ab’) 2 在 1 6时标记率最高 ,1 4之后活性急剧下降 ;温度对标记率和活性的影响不明显 ;小体积反应有利于提高标记率。结论 :反应时间为 3min ,NBS/F(ab’) 2 为1 6 ,室温小体积标记为最优条件