肝星状细胞条件培养基对肝癌细胞PLC/PRF/5耐药性的影响及其机制

目的：探讨肝星状细胞条件培养基（hepatic stellate cell conditioned medium,HSC-CM）对人肝癌PLC/PRF/5细胞耐药性的影响及其可能的机制。 方法： 用无血清RPMI 1640培养肝星状细胞LX-2,使其在缺营养的环境下活化,收集其条件培养上清即为HSC-CM。PLC/PRF/5细胞在HSC-CM条件下培养24 h后,顺铂处理12 h或24 h,采用流式细胞术检测PLC/PRF/5细胞的凋亡情况,MTT法检测PLC/PRF/5细胞的增殖,real-time PCR检测PLC/PRF/5细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关基因的表达水平。 结果： 顺铂组12和24 h两个时间点PLC/PRF/5细胞的凋亡率为（22.34±1.12）%和（26.78±1.56）%;HSC-CM+顺铂组细胞的凋亡率为（17.22±1.42）%和（21.52±1.76）%,顺铂组细胞凋亡率显著高于HSC-CM+顺铂组（P<0.05）。同在这两个时间点,顺铂组和HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞的增殖活性分别为（68.65±2.56）%和（79.47±1.43）%,（46.54±3.65）%和（62.77±2.89）%,HSC-CM+顺铂组细胞增殖活性均高于顺铂组（P<0.05）。Real-time PCR 结果显示,与顺铂组相比较,HSC-CM+顺铂组PLC/PRF/5细胞中上皮标记物钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下降（P<0.05）,而间质细胞标记物神经黏附素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）以及EMT相关转录因 子Snail和ZEB1的表达显著上调（P<0.01）。 结论: HSC-CM可能通过诱导PLC/PRF/5细胞发生EMT,从而增强PLC/PRF/5 细胞对顺铂的抵抗作用。     

肿瘤坏死因子α通过核因子κB促进肝癌细胞上皮间质转化

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响并探讨其分子机制。方法用TNF-α处理人肝癌细胞株(Hep3B和SMMC-7721)24h,倒置显微镜下观察处理前后细胞形态的变化,采用荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析方法检测细胞中上皮细胞标记物上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)和β-连环素(β-catenin)、间质细胞标记物波形蛋白(Vimentin)和神经性钙黏蛋白(N-cadherin)以及转录调控因子Twist的表达变化,Transwell及划痕实验分析细胞的侵袭能力。随后采用荧光素酶报告基因系统和细胞免疫荧光评估TNF-α对核因子κB(NF-κB)的激活作用;蛋白质印迹分析检测IκBα及p-IκBα蛋白表达水平。TNF-α联合应用NF-κB抑制剂后,检测细胞EMT表型变化。结果 Hep3B和SMMC-7721细胞用TNF-α处理后,表现EMT的表型;细胞的划痕愈合率明显大于未处理组(P<0.05),Tr-answell实验显示细胞穿透膜的数量亦显著增多(P<0.05)。TNF-α能有效激活NF-κB报告基因,促进NF-κB p65核转位及IκBα的磷酸化。应用NF-κB抑制剂BAY11-7082能够逆转TNF-α诱导EMT的作用(P<0.05)。结论 TNF-α通过NF-κB依赖性途径诱导肝癌细胞发生EMT,进而促进肝癌的侵袭转移。     

经导管动脉栓塞化疗联合阿帕替尼治疗老年中晚期肝癌患者的疗效

目的 探讨经导管动脉栓塞化疗（TACE）联合阿帕替尼治疗老年中晚期肝癌患者的疗效。方法 将70例老年中晚期肝癌患者按治疗方式的不同分为研究组（35例）及对照组（35例）。对照组接受TACE治疗,研究组接受TACE联合阿帕替尼治疗。比较两组患者的疗效、不良反应及血管内皮生长因子（VEGF）、甲胎蛋白（AFP）、胱天蛋白酶8(caspase 8)水平。结果 研究组患者客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后,研究组患者VEGF、AFP和caspase 8水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。研究组患者不良反应总发生率低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 TACE联合阿帕替尼治疗老年中晚期肝癌患者,可有效提高ORR、DCR,下调VEGF、AFP及caspace 8水平,控制不良反应,具有较高临床应用价值。